מבחן קומבס- בדיקה לאיתור נוגדנים המחוברים למשטח או מומסים בפלזמה. הוא משמש לאיתור חיסון ונוגדנים לתאי דם אדומים. כותרת שניה בדיקת אנטיגלובולין. זה יכול להיות ישיר או עקיף.
בְּ בדיקת אנטיגלובולין ישירהמזהה נוגדנים קבועים על פני השטח של תאי דם אדומים. זה מתבצע אם יש חשד למחלות אוטואימוניות אחרות, לאחר נטילת תרופות (מתילדופה, פניצילין, כינין) וכו'.
תאי דם אדומים עברו רגישות in vivo - נוגדנים כבר מחוברים אליהם בחוזקה, ותוספת של סרום אנטיגלובולין (אנטי-IgG) גורמת לתאים הרגישים להיצמד זה לזה, הנראה לעין בלתי מזוינת.
מבחן Coombs עקיףמזהה נוגדנים אנטי-אריתרוציטים בפלסמת הדם, הוא מבוצע לפני עירוי דם ובמהלכו.
נוגדנים נגד אריתרוציטים הם סוג של נוגדנים עצמיים, כלומר. נוגדנים נגד הרקמות שלך. נוגדן עצמי מתרחש כאשר מערכת החיסון מגיבה בצורה חריגה לתרופות מסוימות, כגון מינונים גבוהים של פניצילין.
תאי דם אדומים על פני השטח שלהם מכילים שונים מבנים כימיים(גליקוליפידים, סכרידים, גליקופרוטאינים וחלבונים), ברפואה הנקראים אנטיגנים. אדם יורש מהוריו מפה ספציפית של אנטיגנים על כל כדורית דם אדומה.
אנטיגנים משולבים לקבוצות ואז הדם מחולק למספר קבוצות – לפי מערכת AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. המפורסמים והמשמעותיים ביותר בעבודתו של רופא הם AB0 ו-Rh factor (Rh).
מערכת AB0
מצב ה-Rh של אדם נקבע על ידי נוכחותם של אנטיגנים אלו. אנטיגן חשוב במיוחד של אריתרוציטים הוא אנטיגן D. אם הוא קיים, אז הם מדברים על Rh חיובי דם RhD, ואם זה לא שם - הו Rh שלילי Rhd.
אם הנוגדן המתאים נצמד לאנטיגנים של אריתרוציטים, האריתרוציט נהרס - המוליזה.
אינדיקציות
האינדיקציה העיקרית עבור ישירבדיקת אנטיגלובולין- חשד לאנמיה המוליטית. זה מבוצע לרוב עבור מחלות אוטואימוניות ראשוניות. אנמיה המוליטית, המוליזה בשגרון, גידול, מחלות זיהומיות, המוליזה הנגרמת על ידי תרופות.
אם מופיעה אנמיה מספר ימים או חודשים לאחר עירוי דם או עם צהבת ממושכת ביילוד, מבוצעת גם בדיקת קומבס ישירה.
עקיףמבוצעת בדיקת אנטיגלובוליןלפני עירוי דם ובמהלך הריון של אישה שלילית Rh.
אנמיה המוליטית אוטואימונית
אנמיה המוליטית אוטואימונית (ראשונית)- מחלה אוטואימונית קלאסית עם סיבות לא ידועות. האינטראקציה בתוך המערכת החיסונית מופרעת, מה שמוביל לתפיסה של תאי הדם האדומים של האדם עצמו כזרים. בבלוטות הלימפה, מסונתזים נוגדנים מקבוצת IgG (מגיבים ב-37°C t) ו/או IgM (ב-40°C של t), אשר, כאשר הם מחוברים לפני השטח של האריתרוציט, מפעילים מספר אנזימים (ה מערכת משלים) ו"לחורר" את דופן האריתרוציט, מה שמוביל להרס שלו - המוליזה.
התסמינים הראשונים נגרמים הן מהרס של כדוריות הדם האדומות והן מירידה בהמוגלובין. ביניהם:
- עייפות, חולשה כללית, עצבנות
- קוֹצֶר נְשִׁימָה
- כאבי בטן וחזה, בחילות
- צבע שתן כהה
- כאב גב
- שינוי צבע של העור והריריות
- ירידה במספר תאי הדם האדומים ו
תוצאה חיובית ישירה בדיקות קומבס 100% מאשר את האבחנה של אנמיה המוליטית אוטואימונית, מה שמוכיח את המקור האוטואימוני שלה. יחד עם זאת, תוצאה שלילית אינה מאפשרת להסיר את האבחנה.
אנמיה המוליטית משנית
אנמיה המוליטית אוטואימונית משנית ו בדיקה חיובית Coombs עשוי להופיע עם המחלות הבאות:
- תסמונת אוונס
- זיהום בדלקת ריאות
בדיקת אנטיגלובולין חיובית למחלות אלו היא אחד התסמינים, ולא קריטריון לאבחון.
מחלה המוליטית של היילוד
גורם מחלה המוליטיתיילודים -חוסר התאמה של קבוצת הדם של האם והעובר, ברוב המקרים לפי מערכת Rh, במקרים בודדים - לפי מערכת AB0, באופן מזדמן - לפי אנטיגנים אחרים.
קונפליקט Rh מתפתח אם העובר של אישה שלילית Rh יורש דם Rh חיובי מהאב.
המחלה מתפתחת ביילוד רק אם האם כבר פיתחה נוגדנים לאנטיגנים המתאימים, מה שקורה לאחר הריונות קודמים, הפלות ועירוי דם לא תואמים. רוב סיבה נפוצההפעלת סינתזה של נוגדנים לאנטיגנים של קרום אריתרוציטים - לידה (דימום עוברי-אם). הלידה הראשונה מתרחשת בדרך כלל ללא סיבוכים, אך הבאות עולות במחלה המוליטית של היילוד בימים הראשונים לאחר הלידה.
תסמינים של מחלה המוליטית של היילוד:
- צהבהב של העור
- , וממברנות ריריות
- כבד וטחול מוגדלים
- בעיות נשימה
- נפיחות של כל הגוף
- עירור ודיכאון הדרגתי של מערכת העצבים המרכזית
אנמיה לאחר עירוי דם
מבחן Coombs עקיףמבוצעת לפני עירוי דם להערכת תאימות, ובדיקת קומבס ישירה - לאחריה אם יש חשד להמוליזה לאחר עירוי, כלומר. בנוכחות תסמינים כגון חום, השקיה (קרא להלן). מטרת הניתוח היא לזהות נוגדנים לתאי דם אדומים שעברו עירוי שנקשרו לתאי הדם האדומים של הנמען ומהווים את הגורם להמוליזה לאחר עירוי, כמו גם הסרה מוקדמת של תאי דם אדומים תורם ממחזור הדם של המקבל (זה שקיבל את הדם).
תסמינים:
- עלייה בטמפרטורת הגוף
- פריחה בעור
- כאב גב
- אָדוֹם
- בחילה
- סְחַרחוֹרֶת
פִּעַנוּחַ
ראוי לזכור כי הכללים הבסיסיים לפענוח בדיקות אנטיגלובולין ישירות ועקיפות זהים. ההבדל היחיד הוא מיקומם של הנוגדנים - בדם או על כדורית הדם האדומה.
- אם בדיקת Coombs ישירה היא שליליתזה אומר שהנוגדן לא "יושב" על תאי הדם האדומים ויש לחפש עוד את הסיבה לתסמינים ולבצע בדיקת קומבס עקיפה
- אם מתגלה תוצאה חיובית של בדיקת Coombs לאחר עירוי דם, זיהומים, תרופות - חיוביות נמשכת עד 3 חודשים (משך החיים של כדוריות הדם האדומות הוא 120 יום - 3 חודשים)
- תוצאה חיובית של בדיקת אנטיגלובולין למחלה אוטואימונית נמשכת חודשים ואף שנים
נוֹרמָה
- בדיקת קומבס ישירה - שלילית
- בדיקת Coombs עקיפה - שלילית
תוצאה חיובית איכותית נמדדת במספר הפלוסים מאחד עד ארבע (+, ++, +++, ++++), ומבחינה כמותית בצורה דיגיטלית - 1:16, 1:256 וכו'.
כן. הרופא שלך בהחלט צריך לדעת שקיבלת עירוי דם, שכן זה משפיע על הפרשנות הנכונה של תוצאות הבדיקה כעת. כאשר מקבלים דם של מישהו אחר (אם כי נבדק פעמים רבות), תמיד קיימת האפשרות שהגוף שלך יפתח נוגדנים נגד הדם שעבר עירוי. הנוגדנים הללו הם שיספקו השפעה רעהעל מצב בריאותי. לעירויי דם לאחר מכן, הרופא חייב לדעת שכבר קיבלת עירויים, מה שאומר שהיה זמן לסינתזה של נוגדנים. עבור נשים בהריון, מידע זה רלוונטי אפילו יותר.
3. אם יש אי התאמה בגורם Rh בין האם לילד, האם כל הילדים יהיו חולים?
תלוי אם הילד Rh חיובי או שלילי (RhD). נשאים של קבוצות דם I, II, III ו- IV יכולים להיות חיוביים או שליליים ל-Rh. במצב שבו האם היא Rh שלילית והילד חיובי ל-Rh, ייווצרו נוגדנים כבר בהריון הראשון, אך רק לאחר הלידה הראשונה (או הפסקת ההריון) יהיה מגע ישיר בין הדם של האם לבין הילד. ההשפעה ההמוליטית של הנוגדנים תתממש רק במהלך הלידות השנייה והאחרות, מה שיוביל למחלה המוליטית ביילוד.
כל אישה עם גורם Rh שלילי צריך להיבדק בקפידה במהלך ההריון, ולאחר הלידה טיפול מונעכדי למנוע הופעת נוגדנים וסיבוכים נוספים.
4. האם במהלך ההריון יש צורך לדעת את סוג הדם של בעלי לפני ביצוע בדיקת קומבס?
אתה צריך לא רק לדעת, אלא גם לבדוק את סוג הדם של האב הביולוגי של הילד במהלך ההריון.
נתונים
- הוצע לראשונה בקיימברידג' ב-1945
- סף רגישות - לפחות 300 מולקולות נוגדנים קבועות על כדורית דם אדומה אחת
- מספר הנוגדנים המעוררים המוליזה - בנפרד עבור כל אדם (מ-16-30 עד 300)
- הדינמיקה של אינדיקטורים מעבדתיים אחרים של אנמיה המוליטית (המוגלובין, בילירובין, רטיקולוציטים) עשויה להתנרמל, ובדיקת Coombs תישאר באותה רמה
מבחן Coombs שונה לאחרונה: 16 במרץ 2018 על ידי מריה בודיאן
בדיקת אנטיגלובולין, שנועדה לזהות נוגדנים אנטי-אריתרוציטים לא שלמים, הוצעה על ידי Coombs, Morant, Reis בשנת 1945 ולימים נקראה מבחן Coombs. המהות השיטה הזאתהוא שסרום אנטיגלובולינים המכיל נוגדנים לאימונוגלובולינים אנושיים, כאשר מגיבים עם תאי דם אדומים עם רגישות בנוגדנים לא שלמים, מוביל לאגלוטינציה שלהם.
תלוי אם הנוגדנים מקובעים על פני השטח של תאי דם אדומים או במצב חופשי בפלסמת הדם, נעשה שימוש בבדיקת Coombs ישירה או עקיפה.
בדיקת קומבס ישירה מתבצעת במקרים בהם יש סיבה להניח שתאי הדם האדומים הנבדקים כבר in vivoעברו רגישות עם נוגדנים מתאימים, כלומר. השלב הראשון של התגובה - קיבוע של נוגדנים על פני השטח של תאי דם אדומים - התרחש בגוף והתוספת שלאחר מכן של סרום אנטיגלובולין גורמת לאגלוטינציה של התאים הרגישים.
באמצעות בדיקת Coombs העקיפה, מתגלים נוגדנים לא שלמים הנמצאים בסרום הבדיקה. במקרה זה, התגובה מתרחשת בשני שלבים. השלב הראשון הוא דגירה של אריתרוציטים בבדיקה עם סרום הבדיקה, במהלכו מתקבעים הנוגדנים הכלולים בדגימת הסרום הנבדקת על פני האריתרוציטים. השלב השני הוא הוספת סרום אנטיגלובולין.
עד כה, בדיקת Coombs נמצאת בשימוש נרחב בפרקטיקה מעבדתית לאבחון מצבים אימונופתולוגיים, בפרט באנמיה המוליטית אוטואימונית, המאופיינת בהרס של כדוריות דם אדומות עקב קשירת קרום התא לנוגדנים ו(או) מרכיבים של מערכת המשלים. הוא משמש לזיהוי נוכחות של Ig G על קרום האריתרוציטים (בדרך כלל Ig G1 ו-Ig G3), שיכולים להפעיל משלים, ולפעמים משלים (C3d). עם זאת, בתקופה החריפה של המחלה, עקב הרס של כדוריות דם אדומות שעליהן מספר גדול שלנוגדנים, עם משבר המוליטי, כמו גם עם כמות לא מספקת של נוגדנים במהלך המחלה הכרונית, עשויה להופיע בדיקת Coombs ישירה שלילית.
יש להדגיש כי מבחן קומבס העקיף נותר בעינו השיטה הטובה ביותרבחירה אישית של אמצעי עירוי, שכן היא מאפשרת לקבוע בצורה המדויקת ביותר את התאימות האישית של התורם והמקבל על ידי אנטיגנים אריתרוציטים.
בדיקת אנטיגלובולין ישירה נוספת לנוכחות נוגדנים עצמיים מומלצת כאשר בודקים את כל מקבלי האיברים והרקמות בתקופה שלפני ההשתלה ומקבלי תאי גזע המטופואטיים גם לאחר ההשתלה.
בנוסף לאימונוהמטולוגיה וטרנספוזיולוגיה, נעשה שימוש נרחב בבדיקות אנטיגלובולין באבחון של מספר מצבים פתולוגיים: מחלות המטולוגיות, כולל מחלות לימפופרוליפרטיביות, מחלות מערכתיות רקמת חיבור, מחלת סיוגרן, דלקת כבד פעילה כרונית וכו'.
בדיקות Coombs משמשות באופן פעיל בגנטיקה רפואית וברפואה משפטית כדי לקבוע אנטיגנים אריתרוציטים על פני השטח.
מבחן Coombs היא שיטת מחקר עתירת עבודה הדורשת טיפול מיוחד ביישום שלה. בעת השימוש בו, ישנם כמה קשיים הקשורים, במיוחד, לפרשנות של תגובות חיוביות חלשות. ידוע שתגובות חיוביות או שליליות כוזבות בעת ביצוע בדיקות Coombs יכולות להיות תוצאה של שטיפה לא יעילה מספיק של כדוריות דם אדומות, נטרול מגיב האנטיגלובולין על ידי עקבות של סרום, כמו גם מגע עם משטח לא שומני שעליו אנטיגלובולין. ניתן לתקן, ובכך לאבד את פעילותו. חיסרון נוסף של בדיקת Coombs הוא חוסר היציבות של מגיב האנטיגלובולין, להכנתו ולאחסונו יש תכונות מסוימות, מה שמקשה גם על כימת תגובת ההמגלוטינציה עם סרום אנטיגלובולין.
בנוסף, מחקרים שנעשו על ידי A. Holburn, D. Voak et al. , הראה שהגורם לתוצאות שליליות כוזבות עשוי להיות רעד מוגזם בעת השהייה מחדש של תרחיף תאי הדם האדומים. תוצאות שגויות בעת ביצוע בדיקות אנטיגלובולין יכולות להיגרם גם מהימצאות במגיב האנטיגלובולין של תערובת של נוגדנים אנטי משלימים, בפרט לרכיבי המשלים C3d, C3c, C4c ו-C4d, הנספגים על פני השטח של לבדוק תאי דם אדומים במהלך הדגירה וליצור מראה של תוצאה חיובית.
ניתן לבטל בקלות את החסרונות הללו על ידי שטיפה יסודית של הדגימות הנבדקות ומעקב אחר תנאי התגובה.
בעשור האחרון נעשה שימוש במלח איזוטוני בעל חוזק יוני נמוך (LISS) כדי להפחית את הזמן הנדרש לביצוע מבחן Coombs העקיף ולהגביר את הרגישות שלו.
היתרון הבלתי מעורער של בדיקות אנטיגלובולין, על פי מספר מחברים, הוא הרגישות הגבוהה שלהן, שעולה משמעותית ברזולוציה שלהן. שיטות חלופיותבדיקות המשמשות לאיתור נוגדנים שאינם מצמידים.
השווינו את הרזולוציה של שיטות לחקר סרום דם עבור נוכחות של נוגדנים לא שלמים באמצעות סרום פוליגלוקין, ג'לטין ואנטיגלובולין. במהלך המחקר, נוטרו טיטרים של נוגדנים אנטי-D לא שלמים ב-140 דגימות סרום דם מתורמי איסואימוניות באמצעות בדיקות ג'לטין, פוליגלוקין ואנטיגלובולין עקיפות. גיבוש שיטות אלו בוצע בהתאם לשיטות המקובלות.
נמצא שמבחינת הרזולוציה שלהן, השיטות לזיהוי רגישות של אריתרוציטים על ידי נוגדנים נגד D מסודרות באופן הבא: הרגישה ביותר היא בדיקת Coombs העקיפה, לאחר מכן בדיקת הג'לטין והפחות אינפורמטיבית היא בדיקת הפוליגלוצין. התוצאות שהתקבלו בסדרת ניסויים זו תואמות במלואן את נתוני הספרות, מה שמאפשר לנו להסיק זאת רמה גבוהההרגישות של בדיקות קומבס, המאפשרת לזהות ברמת ודאות גבוהה את הימצאות בגוף של נוגדנים אנטי-אריתרוציטים שאינם גורמים לאגלוטינציה של כדוריות דם אדומות.
עם זאת, בעת ביצוע בדיקות קומבס בפועל, ישנם מקרים בהם לא מתגלים נוגדנים לא שלמים, אם כי התמונה הקלינית של המחלה או חיסון קודם מעידה על הימצאותם האפשרית. במקרים כאלה, ניתן לשער שכמות הנוגדנים אינה מספיקה כדי שיזרעו אותם על ידי הנוגדנים של סרום האנטיגלובולין.
מסקנה זו אוששה על ידי ניסוי משלנו, שבו, באמצעות שיטת המיקרו-אלקטרופורזה אנליטית של תאים, נקבעה נוכחות של נוגדנים אנטי-D על אריתרוציטים בבדיקה, שלא זוהו בבדיקת Coombs העקיפה. בסדרת ניסויים זו, נוספו סרום אנטיגלובולין לאריתרוציטים שהודגרו מראש עם סרום המתקבל מדמם של תורמים מחוסנים במהלך תקופת הנוגדנוגנזה בעיצומה, כלומר. בתקופה שבה לא התגלו בהם נוגדנים בשיטות מוכרות, כולל בדיקת Coombs.
במחקרים שנערכו, סופקו עדויות סטטיסטיות לנוכחות של נוגדנים לא שלמים על פני השטח של תאי דם אדומים. שינוי משמעותיגודל הניידות האלקטרופורטית של תאי דם אדומים רגישים לאחר הוספת סרום אנטיגלובולין. יצוין כי לאחר מכן נקבעו נוגדנים נגד D בכל התורמים המחוסנים בבדיקת Coombs העקיפה בסרום הדם.
גילרנד וחב'. כמו כן, הראו כי בדיקות אנטיגלובולין מאופיינות בסף רגישות מסוים: תוצאה חיובית מצוינת רק כאשר נרשמות לפחות 500 מולקולות Ig G על פני כדורית דם אדומה אחת.
בנוסף, הספרות מספקת עדויות לכך שתוצאה שלילית אפשרית של בדיקת Coombs עשויה להיות קשורה לזיקה הנמוכה של נוגדנים הגורמים לרגישות לתאי דם אדומים, וכתוצאה מכך הם נפלטים בקלות מפני השטח של תאי דם אדומים במהלך תהליך הכביסה. .
בהתחשב באמור לעיל, אנו יכולים להסיק שבמקרים מסוימים תוצאה שלילית של בדיקת Coombs עדיין אינה עדות להיעדר נוגדנים קבועים על פני השטח של תאי דם אדומים.
ידוע שתגובות Coombs הן מאוד ספציפיות ויכולות לזהות את רוב סוגי הנוגדנים הלא שלמים. עם זאת, כפי שמספר נתונים ניסיוניים מראים, בדיקות אנטיגלובולין יכולות להיות חיוביות גם במצבים לא אימונולוגיים. E. Muirhead et al. ביום השני לאחר מתן phenylhydrazine לכלבים, נצפתה בדיקת Coombs חיובית. הופעה מהירה כזו של תגובה חיובית טוענת נגד האופי האימונולוגי שלה, וליתר דיוק, קשורה לספיחה לא ספציפית של חלבון על פני השטח של אריתרוציטים.
M. Williams et al. מצא כי חומצה קלבולנית יכולה גם לגרום לתגובה חיובית, אשר, על פי המחברים, קשורה לספיחה לא ספציפית של חלבוני פלזמה על פני האריתרוציטים. השפעה דומה נצפתה במהלך הטיפול באנטיביוטיקה של צפלוספורין.
מחברי המחקרים לעיל מדגישים את האופי הלא-אימונולוגי של התוצאות החיוביות של בדיקות Coombs ומתעקשים כי חומרים אלו מסוגלים לגרום לשינוי של ממברנות תאי הדם האדומות, וכתוצאה מכך תאי דם אדומים יכולים לספוג חלבונים (בפרט, אלבומין) הנמצאים בדרך כלל בפלסמת הדם ואין להם תכונות של נוגדנים. בנוסף, ייתכן שהקסנוביוטיקה, הנספגת על פני התא, משמשת כמקשר בין קרום התא לחלבוני הפלזמה.
כדי לפרש נכון את תוצאות בדיקות האנטיגלובולין, יש לקחת בחשבון גם את היחס הכמותי בין כדוריות דם אדומות צעירות לבוגרות בדם ההיקפי. נמצא כי רטיקולוציטים מבודדים מהגוף במהלך תקופת התחדשות אריתרונים מוגברת יכולים להיות צבועים על ידי סרום אנטיגלובולינים.
תוצאה חיובית של בדיקת אנטיגלובולין ישירה מתרחש עם שונה מצבים פתולוגיים, מלווה בהפרעות של המערכת החיסונית, תהליכים דלקתיים המובילים לספיחה לא ספציפית של נוגדנים בעלי סגוליות שונות על הממברנות של אריתרוציטים. זה מצביע על כך שמולקולות Ig G אינן מקיימות אינטראקציה עם אנטיגנים ספציפיים של אריתרוציטים, אלא מקובעות רק על פני התאים הנבדקים.
יש לקחת בחשבון שכאשר מבצעים בדיקת Coombs במקרים של מחלות המאופיינות בהתפתחות דיספרוטאינמיה או הופעת פארפרוטאינים, תוצאה חיובית נובעת מהימצאות על פני השטח של אריתרוציטים של חלבונים שאין להם תכונות של נוגדנים, מה שמעיד גם על חוסר סגוליות של בדיקות אנטיגלובולין לגבי אופי החלבון שזוהה בעזרתם.
לפיכך, כפי שהראו מחקרים רבים, תוצאות חיוביות של בדיקות אנטיגלובולין ישירות ועקיפות אינן הוכחה מוחלטת לנוכחות נוגדנים, שכן תגובות חיוביותניתן להבחין גם במצבים פתולוגיים שונים שאינם קשורים לאיזוסנסיטיזציה או אוטומטית של הגוף. לכן, רק השוואה של התוצאות של מספר שיטות אימונוסרולוגיות עם תמונה קליניתמחלות מאפשרות לנו להעריך באופן מלא את התהליך הפתולוגי המתפתח.
בדיקת אנטיגלובולין עקיפה חיובית עם בדיקה ישירה שלילית מעידה בדרך כלל על נוכחות של נוגדנים אלונו חופשיים בסרום הבדיקה, הקשורים לעירויי דם או להריונות קודמים.
בדיקת Coombs חיובית לעתים קרובות במהלך החמרה של המוגלובינוריה לילית התקפית; בדיקת Coombs חיובית עם אנטי-C3 ואנטי-C3dg היא סמן למחלת אגלוטינין קרה.
במקרים בהם קיים סיכון גבוה לפתח מחלה המוליטית של היילוד, חשיבות רבהכדי לבצע אבחנה (לרוב במהלך ההריון) ובמידת הצורך, ניטור דינמי של המראה והשינוי בטיטר הנוגדנים, יש תוצאות של בדיקות אנטיגלובולין ישירות ועקיפות. לרוב, מחלה המוליטית של יילודים קשורה לאי התאמה של האם והעובר לאנטיגן D, לעתים רחוקות יותר לאנטיגנים של מערכת ABO, ואפילו פחות לאנטיגנים אחרים (C, c, K וכו'). נוגדנים שנוצרו במהלך תהליך זה לה, בהיותם, ככלל, נוגדנים לא שלמים ממחלקת Ig G, מתגלים בבירור בבדיקת האנטיגלובולין העקיפה. עם מחלה זו, יש חשיבות רבה לטיטר ולספציפיות שנקבעו כהלכה של הנוגדנים שזוהו, שכן יש מתאם מסוים בין רמת הנוגדנים האנטי-אריתרוציטים בדם של אישה בהריון פרוגנוזה אפשריתחומרת המחלה המוליטית.
בדיקת Coombs עקיפה נחוצה גם ב פרקטיקה קליניתעל מנת להבטיח טיפול בעירוי בטוח. יישומו מהווה מרכיב חובה במחקרים אימונוהמטולוגיים של תורמים וקטגוריות שונות של נמענים, וכן בדיקות שגרתיות של כל החולים במוסדות רפואיים העלולים לדרוש עירוי דם ומרכיביו.
בדיקת האנטיגלובולין העקיפה משמשת במקרים הבאים:
לקביעה מדויקת יותר של השתייכות Rh (אנטיגן D) במקרה של תוצאות לא ברורות של קביעת גורם Rh בשיטות אחרות (פוליגלוצין, ג'לטין וכו');
לזהות אנטיגנים חלשים של אריתרוציטים (מערכות קל, דאפי, קיד, לואיס וכו') ונוגדנים לאנטיגנים הללו;
לזיהוי וזיהוי של נוגדנים אנטי-אריתרוציטים אלואימוניים, לרבות נוגדנים הגורמים לתגובות המוליטיות לאחר עירוי;
כדי לקבוע את נוכחותם של נוגדנים חיסוניים של מערכת AB0 במהלך עירוי סיבוכים המוליטיים;
כבדיקת תאימות לבחירה אישית של דם שעבר עירוי ומרכיביו.
לפיכך, מבחן Coombs הוא מבחן אבחוני חשוב המשמש בתחומי הרפואה השונים (המטולוגיה, מיילדות, ראומטולוגיה, טרנספוזיולוגיה, אבחון קליני ומעבדתי ועוד). הכרת המוזרויות של ביצוע מבחן Coombs יסייע להגביר את מהימנות התוצאות המתקבלות ויתרום לפרשנות נכונה של נתוני המעבדה.
סִפְרוּת
1. נוגדנים. שיטות / עורך. ד קייטי. - מ.: מיר, 1991.
2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.. // טיפול בעירוי באנמיה: ספר לימוד. מדריך לרופאים. - מ.: פרקט. רפואה, 2005. - עמ' 105-106.
3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// טרנספוזיולוגיה. - 2006. - מס' 2. — עמ' 39—62.
4. דונסקוב ש.י.// קבוצות דם של מערכת Rhesus: תיאוריה ופרקטיקה. - מ.: VINITI RAS, 2005. - עמ' 180-186, 195.
5.אימונוסרולוגיה (מסמכים רגולטוריים) / comp. א.ג. Bashlay, S.I. דונסקוב. - מ.: VINITI RAS, 1998.
6.חקר מערכת הדם בפרקטיקה הקלינית / ed. G.I. Kozinets, V.A. מקרובה. - מ.: Triada-X, 1997.
7. לוין V.I. למנגנון של erythrodieresis ו erythropoiesis במהלך חריף אנמיה פוסט-דמורגית: תקציר המחבר. דיס. ...cand. דבש. Sci. - מינסק, 1968.
8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // יסודות אבחון, מניעה וטיפול באנמיה. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - P. 204-209.
9. צ'ומקובה E.D.. // בעיות בפועלהמטולוגיה וטרנספוזיולוגיה: הליכים של הקונגרס השישי של המטולוגים וטרנספוזיולוגים של הרפובליקה של בלארוס, מינסק, 24-25 במאי, 2007 / עורך. א.י. סבירנובסקי, מ.פ. Potapneva. - מינסק: המרכז הרפובליקני המדעי והמעשי להמטולוגיה וטרנספוזיולוגיה, 2007. - עמ' 50.
10. Coombs R., Mourant A., Race R. // לנצט. - 1945. - כרך. 2. - עמ' 15.
11. פרידמן ג'יי. // J. Clin. פאתול. - 1979. - כרך. 32. - עמ' 1014-1018.
12. הולברן א.מ.. בקרת איכות. שיטות בהמטולוגיה/אד.אני. קאוויל. - אדינבורו: צ'רצ'יל ליווינגסטון, 1982. - כרך. 4. - עמ' 34-50.
13. חאן ס.// CMAJ. - 2006. - כרך. 175, נ 8. - עמ' 919.
14. Komatsu F.// ניפון רינשו. - 2005. - כרך. 63 (מוסף 7). - עמ' 719-721.
15. Komatsu F.// ניפון רינשו. - 2005. - כרך. 63 (מוסף 7). — עמ' 716—718.
16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// New Engl. J. Med. -1976. - כרך. 277. - עמ' 123-125.
17. Muirhead E.E., חורשותמ., בריאן ס. // J. Lab. קלינ. Med. -1954. - כרך. 44. - עמ' 902-903.
18. רוס ו.פ.//Hosp. פרק. - 1995. - N 105.
19. Voak D., Downie D., מורב. et al. //בדיקות ביולוגיות בול. - 1986. - כרך. 1. - עמ' 41-52.
20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. מכונות כביסה לתאים לבדיקות אנטיגלובולין. בדיקות שכפול - שיטה חדשה המדגימה את חוסר היעילות של מכונה אחת בשימוש נרחב - Sorvall CW1-AF2: דיווח ל-DHSS Technical Branch, פברואר 1991.
21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. et al. //תרופות אנטי-מיקרוביאליות וכימותרפיה. -1985. - עמ' 125-127.
22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - כרך. 174, נ 3. - עמ' 305-307.
חדשות רפואיות. - 2008. - מס' 3. - עמ' 33-36.
תשומת הלב! המאמר מופנה לרופאים מומחים. הדפסה מחדש של מאמר זה או קטעיו באינטרנט ללא היפר קישור למקור נחשבת להפרה של זכויות יוצרים.
- מחקר המסייע בקביעת התוכן של נוגדנים אנטי אריתרוציטים לא שלמים בדם. בדיקת אנטיגלובולין זו מאפשרת לזהות נוגדנים לנשים בהריון.
בנוסף, זה מאפשר לך בשלבים הראשוניםלאבחן אנמיה המוליטית ביילודים עם קונפליקט Rh. זה עוזר למנוע הרס של תאי דם אדומים הדרושים להיווצרות דם תקינה. מבחן זה נוצר בשנת 1945 על ידי רוברט קומבס, וזו הסיבה שהוא קיבל את שמו.
בדיקת Coombs היא בדיקה רב-תכליתית המאפשרת אבחון בזמן של הפרעות המטופואטיות אצל מבוגרים וילדים כאחד.
ישנם את הסוגים הבאים של בדיקות כאלה:
- בדיקת קומבס ישירה- מאפשר לך לקבוע נוגדנים הממוקמים על פני השטח של תאי דם אדומים. בדרך כלל, מחקר כזה נקבע עבור חשד להמוליזה, אנמיה המוליטית אוטואימונית או מחלות אוטואימוניות אחרות. בנוסף, הוא מתבצע לאחר טיפול תרופתיתרופות המבוססות על כינין, פניצילין או מתילדופה, או לאחר עירוי דם. כדי לקבל תוצאות מדויקות יותר, עליך להפסיק לחלוטין ליטול תרופות לפחות שבוע אחד לפני המחקר.
- מבחן Coombs עקיף– בדיקה שבאמצעותה ניתן לזהות נוגדנים נגד אריתרוציטים בפלזמה. זה מבוצע בדרך כלל במהלך ההריון ולפני עירוי דם. נוגדנים אנטי-אריתרוציטים מופיעים בדמו של אדם במהלך מערכת חיסון תגובתית או כתגובה לתרופות מסוימות. למחקר מדויק יותר, מבוצעות מספר דגימות בבת אחת במרווח של שעתיים.
אינדיקציות לשימוש
בדיקת Coombs מתבצעת רק אם קיימות אינדיקציות חמורות. זהו מחקר יקר וגוזל זמן, שהוא מבחן ספציפי.
בדרך כלל, המצבים הבאים נחשבים לאינדיקציות ליישומו:
- בזמן עירוי דם. הבדיקה מאפשרת לקבוע האם דמו של הנמען ישתרש בגוף האדם, וכן האם תיתכן תרומה. במקרה זה יש צורך לבחון את החומר הן מהתורם והן מהנמען. חשוב לקבוע את אופי הנוגדנים, מכיוון שאם הם אינם תואמים בגוף על רקע קונפליקט Rh, מערכת החיסון. זה מוביל לפיתוח מחלה רצינית, ובתוך במקרים נדיריםאפילו מוות.
- לפני התערבויות כירורגיותכאשר קיים סיכון לאובדן דם. זה נעשה כדי שהרופא יוכל מיד להכניס דם מתאים לשיקום הגוף.
- כדי לזהות רגישות Rh.רזוס הוא אנטיגן ספציפי המופיע בגוף של כל אישה במהלך ההריון. אם לאם יש Rh חיובי ולאבא שלילי, או להיפך, אין תלות לילד - הוא יכול לרשת כל אחד. אם הילד מקבל רזוס הפוך מהאם, קיים סיכון גבוה לרגישות. תופעה זו מאופיינת בערבוב הדם של האם והילד. זה יכול לקרות גם במהלך ההיריון וגם במהלך הלידה.
אם מתרחש קונפליקט רזוס בגוף של אישה בהריון, אז המערכת החיסונית של האם מתחילה לתפוס את העובר שלה גוף זר. בשל כך, קיים סיכון גבוה שהוא יתחיל לתקוף אותו.
כתוצאה מפעולות כאלה, התינוק עלול לפתח פתולוגיות חמורות. לרוב, אריתרובלסטוזיס מתרחשת - תופעה שבה הגוף של הילד אינו יכול לייצר מספר מספיק של כדוריות דם אדומות.
בנוסף, עקב קונפליקט Rh, מוות עובר עלול להתרחש ברחם או מיד לאחר הלידה. עם הגישה הנכונה לטיפול, ניתן להימנע בקלות מהשלכות חמורות כאלה.
חריגות מהנורמה
בְּ תוצאה חיוביתבהתבסס על תגובת קומבס, הרופא מסיק שיש נוגדנים לתאי דם אדומים בסרום הדם. המשמעות היא שדם התורם עלול שלא להיות תואם לדם המטופל.
אם מאובחנת תוצאה חיובית בגוף של אישה בהריון עם דם Rh שלילי, אז הגוף שלה מכיל נוגדנים לדם העובר.
הדבר מעיד על קונפליקט Rh, המצריך התייחסות זהירה ביותר לניהול הריון מצד הרופא, כמו גם עמידה בכל ההנחיות וההמלצות מהאישה.
אם קיימים נוגדנים בדם של הילד, מאובחנת מחלה המוליטית של היילוד. במקרה זה, מתבצע מחקר חוזר כדי לקבוע אם העלייה ברמות הנוגדנים בדם של האם המצפה מתרחשת או לא.
סיבוכים אפשריים מבדיקת Coombs
בדיקת Coombs היא בדיקה בטוחה למדי המאפשרת לאבחן מספר מחלות אוטואימוניות. לעתים נדירות זה גורם לסיבוכים, בדרך כלל השלכות שליליותקשור לדגימת דם.
הם:
- דימום או שטפי דם מתחת לעור
- סחרחורת והתעלפות
- זיהום זיהומיות
7 295
– בדיקת אנטיגלובולין שמטרתה לזהות בדם Rh שלילי נוגדנים אנטי אריתרוציטים לא שלמים לגורם Rh - חלבון ספציפי הממוקם על פני האריתרוציטים של דם חיובי ל-Rh. ישנם שני סוגים של בדיקה זו: ישיר - זיהוי נוגדנים על פני כדוריות הדם האדומות, עקיף - זיהוי נוגדנים בסרום הדם. בדיקה ישירה מתבצעת באבחון ומעקב אחר טיפול במחלות דם: אנמיה המוליטית, מחלה המוליטית של יילודים ואחרות. מבוצעת בדיקה עקיפה על מנת להעריך את תאימות הדם של התורם והמקבל במהלך העירוי, וכן לקביעת נוכחות וסיכון של קונפליקט Rh בעת תכנון וניהול ההריון. החומר לבדיקת Coombs הוא דם ורידי, המחקר מתבצע בשיטות המבוססות על תגובת האגלוטינציה. בדרך כלל, שתי הבדיקות נותנות תוצאה שלילית. הניתוח מסתיים תוך יום אחד.
מבחן קומבס - ניסוי קלינידם Rh שלילי, שמטרתו זיהוי נוגדנים לגורם Rh. הבדיקה משמשת לזיהוי הסיכון לפתח קונפליקט Rh ותגובות המוליטיות. בכל אדם, פני השטח של כדוריות הדם האדומות מכילות קבוצה מסוימת של אנטיגנים או אגלוטינוגנים - תרכובות מסוגים שונים, שנוכחותם או היעדרם משמשות לקביעת סוג הדם וגורם ה-Rh. ישנם סוגים רבים של אנטיגנים, כולל פרקטיקה רפואיתהאגלוטינוגנים A ו-B, הקובעים את קבוצת הדם, ואגלוטינוגן D, גורם Rh, הם בעלי החשיבות המעשית הגדולה ביותר. עם גורם Rh חיובי, אנטיגנים D מתגלים על הממברנה החיצונית של אריתרוציטים, אבל עם גורם שלילי, הם לא.
בדיקת Coombs, הנקראת גם בדיקת האנטיגלובולין, נועדה לאתר נוגדנים אנטי-אריתרוציטים לא שלמים למערכת גורם Rh בדם. נוגדנים לגורם Rh הם אימונוגלובולינים ספציפיים המיוצרים בדם שלילי Rh כאשר נכנסים אליו תאי דם אדומים עם אגלוטינוגנים D. זה יכול לקרות כאשר דם של עובר ואישה הרה מעורבב, במהלך עירויי דם שבוצעו ללא דם קודם. הקלדה. מבחן Coombs קיים בשתי גרסאות - ישירות ועקיפות. על ידי מבחן ישירקומבס מזהה נוגדנים המחוברים לפני השטח של תאי דם אדומים. המחקר משמש לקביעת הגורם לתגובה המוליטית. בדיקת Coombs העקיפה מכוונת לאיתור נוגדנים אנטי-אריתרוציטים בפלסמת הדם. יש צורך לקבוע את תאימות הדם בין תורם למקבל או אם לעובר, ומסייע במניעת התפתחות של קונפליקט Rh והמוליזה לאחר מכן של כדוריות דם אדומות.
דם עבור שתי הגרסאות של בדיקת Coombs נלקח מוריד. האנליזה מתבצעת על ידי אגלוטינציה באמצעות סרום אנטיגלובולין. תוצאות המחקר משמשות בהמטולוגיה לזיהוי הגורמים לתגובות המוליטיות, בניתוחים והחייאה בעת עריכת עירויי דם, במיילדות ובגינקולוגיה בעת ניטור הריונות בנשים עם דם שלילי Rh.
אינדיקציות
בדיקת Coombs הישירה, המזהה נוגדנים המחוברים לפני השטח של תאי דם אדומים, נקבעת לתגובות המוליטיות (הרס של תאי דם אדומים) ממקורות שונים. המחקר מיועד לאנמיה המוליטית אוטואימונית ראשונית, אנמיה המוליטית לאחר עירוי, מחלה המוליטית של היילוד, המוליזה של אריתרוציטים הנגרמת על ידי אוטואימונית, גידול או מחלות מדבקות, כמו גם קבלת פנים תרופות, למשל, quinidine, methyldopa, procainamide. בדיקת Coombs העקיפה, הקובעת נוגדנים בפלסמה בדם, משמשת למניעת התפתחות של קונפליקט Rh. זה מיועד לחולים לקראת עירוי דם, כמו גם לנשים הרות עם גורם Rh שלילי, בתנאי שלאב העתיד של הילד יש גורם Rh חיובי.
כדי לקבוע תאימות ל-Rh, בדיקת Coombs אינה ניתנת למטופלים עם דם חיובי ל-Rh. במקרים אלו, יש כבר אנטיגנים על פני כדוריות הדם האדומות, לא ניתן לעורר ייצור נוגדנים על ידי עירוי דם או כניסת דם עוברי לזרם הדם של האישה ההרה. כמו כן, המחקר אינו מיועד לנשים בהריון אם לשני ההורים יש גורם Rh שלילי - תכונה רצסיבית תורשתית. לילד בזוגות כאלה יש תמיד דם Rh שלילי; קונפליקט אימונולוגי עם האם הוא בלתי אפשרי. בפתולוגיות המוליטיות, בדיקת האנטיגלובולין אינה משמשת לניטור הצלחת הטיפול, שכן התוצאות אינן משקפות את פעילות תהליך ההרס של תאי דם אדומים.
מגבלה של מבחן Coombs היא העמל של הליך המחקר - כדי להשיג תוצאות אמינות, יש צורך לעמוד בתנאי טמפרטורה וזמן, כללים להכנת ריאגנטים וביוחומר. היתרונות של מבחן Coombs כוללים את הרגישות הגבוהה שלו. באנמיה המוליטית, התוצאות של בדיקה זו נשארות חיוביות, גם אם רמות ההמוגלובין, הבילירובין והרטיקולוציטים מנורמלות.
הכנה לניתוח ואיסוף חומר
החומר המשמש לביצוע בדיקת Coombs הוא דם ורידי. אין דרישות מיוחדות לזמן הליך דגימת הדם ולהכנת המטופל. כמו בכל מחקר, מומלץ לקחת הפסקה לאחר אכילה של 4 שעות לפחות, ולהפסיק לעשן ב-30 הדקות האחרונות. פעילות גופנית, להימנע מתח רגשי. כמו כן, כדאי לדון מראש עם הרופא בצורך להפסיק ליטול תרופות - תרופות מסוימות עלולות לעוות את תוצאות בדיקת Coombs. דם נלקח באמצעות מזרק מהווריד הקוביטלי, או לעתים רחוקות יותר מוריד בגב היד. תוך מספר שעות החומר מועבר למעבדה.
בעת ביצוע בדיקת Coombs ישירה, מוסיפים סרום אנטיגלובולין לסרום הדם של המטופל. לאחר זמן מה, התערובת נבדקת לנוכחות של אגלוטינים - הם נוצרים אם יש נוגדנים על כדוריות הדם האדומות. אם התוצאה חיובית, הטיטר המצטבר נקבע. מבחן Coombs העקיף מורכב משלבים נוספים. ראשית, נוגדנים הנמצאים בסרום מקובעים על תאי הדם האדומים המוזרקים במהלך הדגירה. לאחר מכן מתווסף סרום אנטיגלובולין לדגימה, לאחר זמן מה נקבע הנוכחות והטיטר של agglutinates. תקופת הניתוח היא יום אחד.
תוצאות תקינות
בדרך כלל, התוצאה של בדיקת Coombs הישירה היא שלילית (-). המשמעות היא שאין נוגדנים הקשורים לתאי דם אדומים בדם, והם אינם יכולים לגרום להמוליזה. תוצאה נורמליתגם בדיקת Coombs העקיפה היא שלילית (-), כלומר אין נוגדנים לגורם Rh בפלסמת הדם. כאשר מתכוננים לעירוי דם עבור הנמען, משמעות הדבר היא תאימות לדם של התורם; בעת ניטור הריון, משמעות הדבר היא היעדר רגישות Rh של האם, סיכון נמוך לפתח קונפליקט אימונולוגי. גורמים פיזיולוגיים, כגון תזונה או פעילות גופנית, אינם יכולים להשפיע על תוצאת הבדיקה. לכן, אם התוצאה חיובית, יש צורך בהתייעצות עם רופא.
ערך אבחון של הניתוח
תוצאת בדיקת Coombs חיובית מתבטאת באופן איכותי, מ-(+) ל-(++++), או כמותית, על ידי טיטרים מ-1:16 עד 1:256. קביעת ריכוז הנוגדנים על תאי דם אדומים ובנסיוב הדם מתבצעת בשני סוגי הדגימות. אם בדיקת Coombs הישירה חיובית, מתגלים נוגדנים על הממברנה החיצונית של תאי הדם האדומים, מה שמוביל להרס של תאי דם אלו. הסיבה עשויה להיות עירוי דם ללא הקלדה מוקדמת - תגובה המוליטית לאחר עירוי, וכן אריתרובלסטוזיס של היילוד, תגובה המוליטית עקב שימוש בתרופות, אנמיה המוליטית אוטואימונית ראשונית או משנית. הרס משני של תאי דם אדומים יכול להיגרם על ידי זאבת אריתמטית מערכתית, תסמונת אוונס, מקרוגלובלינמיה של Waldenström, המוגלובינוריה קרה התקפית, לוקמיה לימפוציטית כרונית, לימפומה, מונונוקלאוזיס זיהומיות, עגבת, דלקת ריאות של מיקופלזמה.
תוצאה חיובית של בדיקת Coombs העקיפה מצביעה על נוכחות של נוגדנים לגורם Rh בפלסמה. בפועל, זה אומר שהתרחשה רגישות ל-Rh, וקיימת אפשרות להתפתחות קונפליקט Rh לאחר עירוי של דם תורם במהלך ההריון. כדי למנוע סיבוכי הריון, נשים עם תוצאת בדיקת Coombs חיובית מוכנסות לפנקס מיוחד.
טיפול בהפרעות
מבחן Coombs מתייחס למחקרים איזוזרולוגיים. תוצאותיו מאפשרות לזהות תגובה המוליטית, וכן לקבוע את תאימות הדם של התורם והמקבל, האם והעובר, על מנת למנוע התפתחות של קונפליקט Rh. אם תוצאת הבדיקה חיובית, אז אתה צריך לבקש עצה מהרופא המטפל שלך - מיילד-גינקולוג, המטולוג, מנתח.
אושר בפקודת Roszdravnadzorעל השימוש ב"סט ריאגנטים לקביעת אנטיגנים ונוגדנים של מערכת הרזוס בדם אנושי"
(בדיקת AGS עבור Coombs)
TU 9398-102-51203590-2012
מס' RU RZN 2013/1255 מיום 10/11/2013
הקדמה
סרום סטנדרטי לבדיקת Coombs מכיל נוגדנים הטרואימוניים ספציפיים כנגד חלבוני דם אנושיים ומיועד לשימוש בשתי אפשרויות תגובה - בדיקת Coombs ישירה ועקיפה.
בדיקת קומבס ישירהמשמש לקביעת הרגישות של אריתרוציטים in vivo במחלה המוליטית של יילודים ובמטופלים עם צורה אוטואימונית של אנמיה המוליטית כרונית, כמו גם במצבים אחרים. ביצוע בדיקה ישירה של קומבסמורכב מהעובדה שסרום לבדיקת Coombs מתווסף לתאי הדם האדומים הנבדקים, שנשטפו קודם לכן מהחלבונים של הפלזמה שלהם. אם תאי דם אדומים עברו רגישות in vivo, התגובה גורמת לאגלוטינציה שלהם.
מבחן Coombs עקיףמשמש כבדיקה לזיהוי מצב הרגישות של הגוף, המאפשר זיהוי של נוגדנים הנמצאים במצב חופשי בסרום הדם של הנבדק; כבדיקת תאימות דם שעבר עירוי, כאשר נבדקת השפעת הסרום של המקבל על תאי הדם האדומים של התורם המיועד; וכבדיקה לקביעת אנטיגנים קבוצתיים שונים באריתרוציטים באמצעות חשיפה מקדימה לסרה סטנדרטית המכילה נוגדנים בעלי סגוליות ידועה. בדיקת Coombs עקיפה (כל האפשרויות) מיוצרבשני שלבים, הראשון שבהם הוא הדגירה של נסיוב הבדיקה (או הסטנדרטי) עם אריתרוציטים סטנדרטיים (או בדיקה), כלומר רגישות של אריתרוציטים במבחנה. השלב השני הוא התגובה בפועל עם סרום לבדיקת Coombs, המתבצעת באותו אופן כמו בדיקת Coombs הישירה.
התוצאה הסופית של התגובה הן בבדיקות Coombs הישירות והן העקיפות מתרחשת עקב האינטראקציה סרום סטנדרטילבדיקת Coombs, עם נוגדנים (חלבון דם אנושי) קבועים על תאי דם אדומים. תוצאה זו מתבטאת בהצטברות של תאי דם אדומים. כדי להתבונן באגלוטינציה יש להשתמש בפורצלן לבן או בכל צלחת לבנה עם משטח שניתן להרטב כך שהטיפות הנמרחות עליה יתערבבו היטב ולא יתפזרו על פני הצלחת. את הטיפות המעורבות יש לפזר קלות על הצלחת, בערך בגודל של מטבע של 2 קופקים.
II. הכנת מרכיבי התגובה
סרום הבדיקה לקביעת נוכחות וסגוליות של נוגדנים בו מתקבל מדם הנבדק ללא הוספת חומר משמר. אחסן בטמפרטורה של + 4-8 0 C לא יותר מיומיים או קפוא למשך חודש.
סרום לבדיקת תאימות מתקבל באותו אופן, אך משמש עם חיי מדף של לא יותר מיומיים.
תאי דם אדומים המיועדים לקביעת איזואנטיגנים מסוימים בהם מוכנים עם סוג של חומר משמר מהאדם שדמו נבדק. אתה יכול גם להשתמש במשקעי תאי דם אדומים מדם שנלקח ללא חומר משמר.
בעת בדיקת תאימות, נעשה שימוש בדם התורם, הנמשך דרך מחט מבקבוקון שהוכן לעירוי.
בכל המקרים, תאי דם אדומים נשטפים 3-4 פעמים במבחנות מפלזמה על ידי הוספת 8-10 נפחים של תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית לנפח אחד של תאי דם אדומים, ולאחר מכן ערבוב וצנטריפוגה ב-1500-2000 סל"ד למשך 5- 10 דקות (עד שקיעת אריתרוציטים מלאה). לאחר כל צנטריפוגה, הסופרנטנט נשאב.
III. טכניקות תגובה
אריתרוציטים הנבדקים מוכנים בצורה של תרחיף 5%, עבורו מערבבים טיפה אחת של אריתרוציטים שנשטפים ארבע פעמים במבחנה עם 19 טיפות תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית.
טיפה אחת (0.05 מ"ל) של תרחיף 5% של תאי דם אדומים מועברת לצלחת לבנה ונמרחת. הצלחת מתנדנדת ונצפה במשך 3 דקות כדי לראות אם התרחשה צבירה של כדוריות דם אדומות. אם לא התרחשה צבירה, הוסף 1-2 טיפות של סרום סטנדרטי לבדיקת Coombs, ערבב את הטיפות ביסודיות, לאחר מכן נער מעט את הצלחת, ולאחר מכן השאר אותה לבד למשך דקה או שתיים ונער שוב. במקביל, התוצאה מנוטרת במשך 10 דקות, המתבטאת בנוכחות או בהיעדר צבירה.
פרשנות תוצאות מבחן Coombs הישיר.
אין צבירה - בדיקה שלילית
נוכחות של צבירה
– בדיקה חיובית, המעידה על רגישות של תאי הדם האדומים הנבדקים, כלומר, ספיגת נוגדנים עליהם, שהתרחשה in vivo בגוף האדם (יילוד, חולה). אם הצטברות של תאי הדם האדומים שנבדקו התרחש לפני ההוספהסרום לבדיקת Coombs; תוצאת הבדיקה הישירה אינה נלקחת בחשבון.
2. בדיקת Coombs עקיפה
מיועד לאיתור נוגדנים איזואידים בסרום הדם של הנבדק
הוא משמש במקרים בהם יש צורך לברר האם הדם של מטופלת, אישה בהריון, תורמת וכו' מכיל נוגדנים איזו-אימוניים בעלי צורה לא מלאה ולבסס את הספציפיות שלהם. לצורך התגובה, נעשה שימוש בסרום הדם של האדם הנבדק ובתאי דם אדומים סטנדרטיים בעלי סגוליות ידועה. בין 8-10 דגימות תאי דם אדומות אלו או יותר אמורים להיות הבדלים בגורמים ממערכות אחרות וחשוב מאוד שכל אחד מהגורמים הללו יכיל לפחות דגימת כדוריות אדומות אחת. הפאנל כולל גם דגימות של אריתרוציטים Rh-שליליים עם שילובים שונים של אנטיגנים של מערכות אחרות, כך שביניהם יש Duffy-positive ו-Duffy-negative, אשר, בתורם, יחולקו ל-Kell-positive ו-Kell-negative, קיד-חיובי וקיד-שלילי וכו' כשליטה שלילית, אם אפשר, אריתרוציטים של האדם שהנסיוב שלו נבדק כלולים בתגובה.
טכניקת תגובה
במעמד מותקנים מספר צנטריפוגות או צינורות אחרים בנפח 3-10 מ"ל, בהתאם למספר דגימות האריתרוציטים הכלולות בתגובה. הצינורות מסומנים ולפי הסימון מתווספת להם טיפה קטנה (0.01 מ"ל) של תאי דם אדומים סטנדרטיים שטופים. שלוש טיפות של סרום הבדיקה מושלכות לתוך כל מבחנה, המבחנות מנערות במרץ כדי לערבב את תאי הדם האדומים עם הסרום ומכניסים לתרמוסטט ב-37 0 C למשך 45 דקות. לאחר הדגירה, הצינורות מוסרים מהתרמוסטט, ותאי הדם האדומים נשטפים על ידי הוספת תמיסת נתרן כלורי איזוטונית לחלק העליון של הצינור, ערבוב וצנטריפוגה לאחר מכן. הכביסה חוזרת על עצמה 3-4 פעמים, בכל פעם שואבים בזהירות את הסופרנטנט, ואז מוסיפים 2 טיפות תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית לתאי הדם האדומים השטופים כדי לקבל כ-5% מהתרחיף (בעת שימוש בצינורות צנטריפוגה, אתה יכול להגביל את עצמך לכביסה פעמיים).1 טיפה של תרחיף 5% של אריתרוציטים מכל מבחנה מועברת לצלחת לבנה, מוסיפים שם 1-2 טיפות של סרום סטנדרטי לבדיקת Coombs ומערבבים היטב את הסרום עם אריתרוציטים. הצלחת מזועזעת מעט, ואז נותרת לבדה למשך 1-2 דקות ומנערת שוב מעת לעת, תוך התבוננות בו-זמנית בתוצאת התגובה במשך 20 דקות.
פרשנות של תוצאות
אין סימני צבירה (תוצאה שלילית) בכל הדגימות פירושה שסרום הבדיקה אינו מכיל נוגדנים לא שלמים לאנטיגנים קבוצתיים הכלולים בתאי הדם האדומים הסטנדרטיים הכלולים במחקר.אם בחלק או ברוב הטיפות, בנוסף לשליטה, נצפים צבירה , המשמעות היא שהסרום הבדיקה מכיל נוגדנים לא שלמים נגד אנטיגנים אריתרוציטים. שאלת הספציפיות של נוגדנים אלה מוכרעת על ידי השוואה חיובית ו תגובות שליליותעם המבנה האנטיגני של תאי דם אדומים הכלול בתגובה. שאלת הפעילות של נוגדנים אלה נפתרת על ידי טיטרציה.
דוגמה 1.צבירה התרחשה עם כל הדגימות של אריתרוציטים המכילות את גורם Rh 0 (D), ללא קשר לנוכחות או היעדר של גורמים אחרים של מערכת זו ושל מערכות אחרות, בעוד שבכל הדגימות Rh 0 (D) - שליליות, לא נצפתה צבירה (כך ללא קשר לנוכחות או היעדר של גורמים אחרים) - המשמעות היא שהסרום הבדיקה מכיל נוגדנים לא שלמים נגד רזוס - Rh 0 (D).
דוגמה 2. צבירה התרחשה בכל הדגימות של אריתרוציטים המכילים את פקטור דאפי, ללא קשר להימצאות או היעדרות של אנטיגנים של מערכת הרזוס ומערכות אחרות, בעוד שלא נצפתה צפיפות עם כל הדגימות השליליות של דאפי, מה שאומר שהסרום הבדיקה מכיל אנטי שלם לא שלם. נוגדנים - דאפי.
חיבור.אם אין במוסד פאנל שלם של תאי דם אדומים סטנדרטיים, אך יש צורך בבדיקת סרום לנוכחות נוגדנים, מומלץ לבצע מחקר עם 25-30 דגימות אקראיות של תאי דם אדומים מאנשים בריאים של קבוצה 0 (I) או הסרום באותו שם כמו סרום הבדיקה. זה יאפשר לפתור את סוגיית הנוכחות או היעדרם של נוגדנים לרוב האנטיגנים של מערכת Rh-Hr, Duffy, Kell, Kidd.
אם מתקבלת תוצאה חיובית, ניתן להחליט על מסקנה נוספת לגבי הספציפיות של הנוגדנים שזוהו על ידי מחקר מיוחד עם פאנל מלא של תאי דם אדומים סטנדרטיים.
3. טכניקה לביצוע בדיקת Coombs עקיפה כבדיקת תאימות דם שעבר עירוי
כדי למנוע אי התאמה במהלך עירוי דם, יש לבצע את בדיקות ההתאמה הבאות לפני העירוי:
בדיקת התאמה לקבוצות דם ABO, המתבצעת במטוס בטמפרטורת החדר.
בדיקות תאימות לגורם Rh ואיזואנטגנים אחרים.
טיפה קטנה אחת (0.01 מ"ל) של אריתרוציטים תורם שטופים, הנלקחת דרך מחט מבקבוק דם המיועד לעירוי, מועברת לתחתית צנטריפוגה או צינור אחר בנפח 3-4 מ"ל ו-3 טיפות של המטופל. מוסיפים לו סרום. המבחנה מנערת כדי לערבב את האריתרוציטים עם הסרום, ולאחר מכן היא מוכנסת לתרמוסטט ב-37 0 C למשך 45 דקות. לאחר הדגירה מוסיפים תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית לחלק העליון של המבחנה, מערבבים את תכולת המבחנה ומעבירים לצנטריפוגה למשך 5-10 דקות. שטיפה זו של תאי דם אדומים חוזרת על עצמה 3 פעמים, בכל פעם מוציאים בזהירות את הסופרנטנט. בעת שימוש בצינורות צנטריפוגה, אתה יכול להגביל את עצמך לשטיפה פעמיים. הוסף 2 טיפות של תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית לתאי הדם האדומים השטופים כדי לקבל תרחיף של כ-5%.
1 טיפה של תרחיף 5% של תאי דם אדומים מועברת לצלחת לבנה, מוסיפים שם 1-2 טיפות של סרום סטנדרטי לבדיקת Coombs ומערבבים היטב את הסרום עם תאי דם אדומים. לאחר מכן הצלחת מזועזעת מעט, נותרת לבדה למשך 1-2 דקות ומנערת שוב מעת לעת, תוך התבוננות בתוצאה במשך 20 דקות.
הערה:במקרה של חוסר תאימות ל-Rh, האגלוטינציה מתרחשת בדרך כלל בתוך הדקה הראשונה, אך עם טיטר נמוך של נוגדני Rh (או נוגדנים אחרים), האגלוטינציה עלולה להתרחש מאוחר יותר, לפעמים בדקה העשרים.
פרשנות התוצאה:
גלוטינים גלויים בצורה של גושים על רקע נקי או מולבן לחלוטין - זה אומר שהדם של התורם שאינו עולה בקנה אחדעם הדם של המקבל ולא ניתן לערוי לו.
הֶעְדֵר סימני אגלוטינציה פירושם שדמו של החולה אינו מכיל נוגדנים חלקיים לתאי הדם האדומים של התורם ביחס לגורם Rh ואיזואנטגנים אחרים אליהם עלולים להיווצר נוגדנים לא שלמים.
בדיקת Coombs העקיפה רגישה רק לנוגדנים לא שלמים.
4. טכניקת בדיקה עקיפה של Coombs לקביעה מבנה אנטיגניתאי דם אדומים
בדיקה זו משמשת לקביעת נוכחות או היעדר אנטיגן של קבוצת תאי דם אדומים באמצעות סרום סטנדרטי המכיל את הנוגדנים המתאימים בצורה לא מלאה.
לרוב, מבחן Coombs העקיף משמש לקביעת האנטיגנים Kell (K), Duffy (Fy), Kidd (Jk), וגם כדי לקבוע את האנטיגן החלש של מערכת Rh (Du).
לפני שתמשיך בקביעת אנטיגנים, יש לבדוק את תאי הדם האדומים הנבדקים בבדיקת Coombs ישירה. אם התוצאה של בדיקה ישירה חיובית, לא ניתן לבצע קביעת אנטיגנים על ידי בדיקת Coombs עקיפה ולצורך כך יש להשתמש בתגובות אחרות.
לצורך התגובה, נעשה שימוש בצנטריפוגה או בצינורות אחרים בנפח של 3-4 מ"ל בכמות של שלושה: אחד עבור דגימת הבדיקה של אריתרוציטים ושתיים עבור 1 טיפה קטנה (0.01 מ"ל) של שלוש פעמים אריתרוציטים נשטפים. בחלק התחתון של הצינור הראשון, אריתרוציטים בקרה מתווספים לצינור השני, המכילים את האנטיגן הרצוי (לדוגמה, Duffy-positive) ולתוך הצינור השלישי - שליטה שלילית (Duffy-negative). הוסף 2-3 טיפות של סרום סטנדרטי (בדוגמה זו, אנטי דאפי) לכל המבחנות. המבחנות מנערות כדי לערבב את התוכן ומניחות בתרמוסטט ב-37 0 C למשך 45 דקות. לאחר דגירה כזו, מוציאים את המבחנות מהתרמוסטט, מוסיפים תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית למעלה, מערבבים היטב את התכולה ומצנטרפים ב-1500-2000 אלף סל"ד למשך 5-10 דקות. לאחר הצנטריפוגה, הסופרנטנט נשאב בזהירות ושטיפה זו של תאי דם אדומים חוזרת על עצמה 4 פעמים. (בעת שימוש בצינורות צנטריפוגה, אתה יכול להגביל את עצמך לשטיפה פעמיים).
הוסף 2 טיפות של תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית לתאי הדם האדומים השטופים כדי לקבל תרחיף של כ-5%. 1 טיפה של תרחיף 5% של אריתרוציטים מכל מבחנה מועברת לצלחת לבנה, 1-2 טיפות של סרום סטנדרטי לבדיקת Coombs מתווספות לכל טיפת אריתרוציטים ומערבבים. הצלחת מזועזעת מעט, ואז נותרת לבדה למשך 1-2 דקות ומנערת שוב מעת לעת, תוך כדי התבוננות בהתקדמות התגובה במשך 20 דקות.
פרשנות של תוצאות
נוכחות של צבירה תאי דם אדומים (תוצאה חיובית) פירושו שהדם מכיל את האנטיגן הרצוי (בדוגמה זו, דם חיובי של דאפי).
אין צבירה (תוצאה שלילית) פירושה שהדם שנבדק אינו מכיל את האנטיגן הרצוי (Duffy negative).
התוצאה נלקחת בחשבון כאמת לאחר בדיקת דגימות הביקורת, כלומר בדוגמה, אם התוצאה חיובית עם מדגם חיובי של דאפי ושלילי עם מדגם שלילי של דאפי.
5. טופס שחרור
המגיב זמין בצורה נוזלית בבקבוקים של 5 או 10 מ"ל (1 מ"ל מכיל 10 מנות). נתרן אזיד משמש כחומר משמר בריכוז סופי של 0.1%.
6.אחסון
חיי מדף: שנתיים במקרר ב-2-8 מעלות צלזיוס. בקבוק נפתח מתאים לשימוש באחסון במקרר, סגור הרמטית, לאורך כל תאריך התפוגה.
עילות התלונה הן: חוסר פעילות, חוסר ספציפיות, פגיעה בשלמות הבקבוק, הימצאות פתיתים, לא בתוקףתאריך תפוגה של ריאגנט. בעת הגשת תלונה, נא לציין את תאריך הקבלה, את הספק (אם קיבלת את המוצר שלא מהיצרן), את מספר האצווה, ואת הסיבות לכך שהמגיב נמצא לא מתאים. נא לצרף פרוטוקול עם תוצאות בדיקת המגיב ו-2-3 בקבוקים לא נפתחים עם המגיב
את התלונה יש לשלוח ליצרן LLC "MEDICLON": 127276
