Diagnoza je najpomembnejši korak pri zdravljenju katere koli bolezni. Odvisno od pravilne diagnoze ni le uspešno zdravljenje, temveč tudi možnost preprečevanja razvoja zapletov in sočasne bolezni. Kaj je serološki test? To je metoda diagnostične analize pacientovega biološkega vzorca na prisotnost protiteles in antigenov. Test vam omogoča prepoznavanje več deset bolezni, fazo bolezni in nadzor zdravljenja.

Čemu je študij namenjen?

Ta vrsta medicinskih raziskav se pogosto uporablja na različnih področjih medicine. Reakcija vezave komplementa ali RSK je namenjena prepoznavanju specifičnih celic v krvnem serumu, protiteles, ki jih telo proizvaja za boj proti okužbam in virusom.

Izoserološka študija je namenjena določanju krvne skupine, Rh faktorja in drugih parametrov bolnikove krvi.

• Serološki test krvi se uporablja v ginekologiji za odkrivanje spolno prenosljivih bolezni. Serološka titracija se uporablja tudi za celovit pregled bodočih mater (toksoplazmoza, HIV, sifilis itd.). Pri registraciji nosečnic je to obvezen test.
• V pediatriji se serološki testi uporabljajo za potrditev diagnoze "otroških" bolezni (norice, rdečke, ošpice itd.), Če simptomi niso izraziti in ni mogoče določiti bolezni glede na klinične indikacije.
• Serološke študije omogočajo venereologom hitro in natančno diagnozo. pri podobni simptomi in pritožb, krvni test razkrije protitelesa proti sifilisu, giardiazi, ureplazmozi, klamidiji, herpesu in drugim boleznim.
• Gastroenergetiki, hepatologi in specialisti za nalezljive bolezni uporabljajo serološki krvni test za diagnosticiranje virusnega hepatitisa.
• Vsako nalezljivo ali virusno bolezen lahko sumi terapevt. Za potrditev se uporabljajo serološki testi za specifična protitelesa v telesu. Opravijo se analize na encefalitis, brucelozo, oslovski kašelj, virus denge, virus imunske pomanjkljivosti, alergije itd.
• Serološka diagnoza za hospitalizacijo ima pomembno vlogo. Ta diagnostična metoda lahko pokaže, v kateri fazi razvoja je bolezen in ali je potreben takojšen sprejem v bolnišnico ali zadostuje ambulantno zdravljenje.

Kot biološki material Za študijo lahko uporabimo vzorec sline in blata, vendar se najpogosteje uporablja bolnikova venska kri. Analizo za serološke reakcije je treba vzeti iz kubitalne vene v laboratorijskih pogojih. Preden opravite test, se morate posvetovati z zdravnikom in se pripraviti.

Priprava na analizo

Tovrstne raziskave se izvajajo tako v občinskih kot gospodarskih ustanovah. Bolje je, da se odločite za laboratorij, ki ima najsodobnejšo opremo in ima le pozitivne povratne informacije o svojem delu. Za zaposlene paciente lahko laboratorij opravi storitve odvzema krvi v RSK na domu.

V tem primeru pacientu ni treba preživeti časa na cesti, čakalne vrste pa so izključene.

Priprava na odvzem venske krvi vključuje več splošna pravila. Pred testom ne morete jesti hrane, to pomeni, da se analiza vzame na prazen želodec. Ko darujete kri, morate biti mirni in brez skrbi. Pred posegom ne smete opravljati drugih postopkov (rentgen, ultrazvok itd.). Nekaj ​​tednov pred odvzemom krvi se v dogovoru z lečečim zdravnikom zdravilo prekliče. Nekatera priporočila so odvisna od bolezni, za katero se testira. Na primer, pri testiranju na hepatitis 2 dni pred analizo je iz prehrane izključena mastna hrana in alkohol.

Fluorescenčna reakcija

Ena od vrst seroloških reakcij je fluorescenca ali RIF. Ta raziskovalna metoda se izvaja z uporabo reagenta, ki poudarja želena protitelesa v krvnem serumu. Za postavitev neposredne serološke reakcije ali PIF so specifična protitelesa označena s fluorescentno snovjo. To je najhitrejši tip raziskave, ki poteka v eni fazi.

Druga metoda, ki se imenuje posredna ali RNIF, se izvaja v dveh fazah. Na prvem specifične celice (protitelesa) nimajo fluorescenčnih oznak, na drugem pa se z ustrezno označenimi protitelesi odkrije kompleks antigen protitelo. Reakcija žarenja se pojavi šele po vezavi s specifičnim protitelesom. Rezultat manipulacij se oceni s posebno napravo, ki oceni intenzivnost sevanja ter določi obliko in velikost preučevanih predmetov. Povzročitelja okužbe določimo z 90-95% zanesljivostjo glede na vrsto in stadij bolezni.

Povezani imunosorbentni test

Za študijo ELISA se serološke reakcije izvajajo z edinstvenimi stabilnimi reagenti. Označene snovi so pritrjene na določeno (želeno) vrsto protiteles. Kot rezultat, serologija zagotavlja kvalitativno ali kvantitativno oceno bolnikovega vzorca krvi. Če substrat nima izraženih markerjev, se rezultat šteje za negativnega. V primeru kvalitativne študije pozitiven rezultat pomeni le prisotnost protiteles v biološkem vzorcu.

Serodiagnostika s kvantitativnim odkrivanjem protitelesnih celic daje popolnejšo sliko. Po vsoti odkritih celic lahko zdravnik ugotovi, ali je bolezen v začetni fazi, akutna ali gre za poslabšanje kronične oblike bolezni. Pri postavljanju diagnoze se upoštevajo tudi klinična slika in pritožbe bolnika.

Značilnosti raziskovanja

Pri testiranju na brucelozo se krvni serum spremlja glede samoretencije brez antigena. To izboljša zanesljivost testa. Rezultat analize za brucelozo je lahko pozitiven, negativen ali neizražen, torej vprašljiv. Pri dvomljivih rezultatih je priporočljivo ponoviti odvzem krvi. Brucelozo diagnosticiramo tudi na podlagi rezultatov hemokultur, preiskav kostnega mozga in likvorja.

Prednosti in slabosti serologije

V sodobni medicini se pogosto uporablja serološka diagnoza. Ta test je še posebej pomemben pri odkrivanju virusnih in nalezljivih bolezni. Ista vrsta analize se uporablja pri geografskih pregledih in zdravniških pregledih za preprečevanje epidemioloških izbruhov.

Serološki testi imajo številne prednosti.

• Serološki test katere koli vrste je zelo zanesljiv.
• Serološke preiskave opravimo dokaj hitro. Rezultat RSC je znan v enem dnevu, dobite pa ga lahko preko interneta, ne da bi zapustili svoj dom. IN posebne priložnosti pri bolnišnično zdravljenje test se izvede v nekaj urah.
• RSK vam omogoča nadzor nad razvojem bolezni in spremljanje učinkovitosti zdravljenja.
• Serološke raziskovalne metode so poceni in na voljo bolnikom.

Serološki testi imajo tudi nekaj slabosti. Da bi pregled dal najbolj zanesljive informacije, je treba opraviti krvni test ob upoštevanju časa inkubacijske dobe bolezni.

Herpes simplex tipa 1 in 2 je mogoče določiti šele 2 tedna po okužbi, test za virus imunske pomanjkljivosti pa se opravi 1, 3 in 6 mesecev po stiku z bolnikom.

Na zanesljivost študije lahko vpliva človeški dejavnik. Če pacient zanemari pravila za pripravo na študijo ali je laboratorijski pomočnik naredil napako pri obdelavi vzorca krvi, lahko dobimo napačen ali dvomljiv rezultat. To stanje se pojavi v približno 5% primerov. Praviloma lečeči zdravnik na podlagi kliničnih indikacij zlahka izračuna napako RSK.

Serološka preiskava krvi je sodoben in zanesljiv način odkrivanja le-teh nevarne bolezni kot so HIV, hepatitis, bruceloza, spolno prenosljive bolezni itd. Ta veja medicine je namenjena preučevanju človeške krvne plazme in njenih imunoloških lastnosti. Serološka metoda je zelo razširjena, stroški raziskav v zasebnih laboratorijih pa so relativno nizki. Za analizo se uporablja sodobna oprema, ki zmanjšuje vpliv človeškega faktorja na rezultate raziskav.

V stiku z

Wassermannov test (RW) je najbolj priljubljen imunološki test, ki se uporablja za diagnosticiranje sifilisa od odkritja leta 1906. RW spada v skupino reakcij vezave komplementa (RCC) in temelji na sposobnosti krvnega seruma bolnika s sifilisom, da tvori kompleks z ustreznimi antigeni. Sodobne metode RSK, ki se uporabljajo za diagnosticiranje sifilisa, se po svojih antigenih bistveno razlikujejo od klasične Wassermanove reakcije, vendar se zanje tradicionalno ohranja izraz "Wassermanova reakcija".

V krvi okužene osebe se pojavijo protitelesa, ki jih proizvaja imunski sistem. Treponema pallidum, povzročitelj bolezni, vsebuje kardiolipinski antigen, ki povzroči nastanek protiteles, določenih z RW. Pozitivna Wassermanova reakcija samo kaže na prisotnost takšnih protiteles v človeški krvi in ​​na podlagi tega se sklepa o prisotnosti bolezni.

Indikator rezultata študije v RSC je reakcija hemolize. V reakciji sodelujeta dve komponenti: ovčji eritrociti in hemolitični serum. Hemolitični serum dobimo z imunizacijo kunca z ovnovimi eritrociti. Inaktivira se 30 minut pri 56°C. Rezultati RSC se ocenjujejo glede na prisotnost ali odsotnost hemolize v epruvetah. Prisotnost hemolize je razloženo z dejstvom, da če v testnem serumu ni sifilitičnih protiteles, potem ne pride do reakcije antigen-protitelo in celoten komplement gre v reakcijo ovčjih rdečih krvnih celic-hemolizina. In če obstajajo specifična protitelesa, komplement popolnoma preide na reakcijo antigen-protitelo in hemoliza ne pride.

Vse sestavine za Wassermanovo reakcijo se vzamejo v enakem volumnu - 0,5 ali 0,25 ml. Za močno fiksacijo komplementa na določenem kompleksu se mešanica testnega seruma, antigena in komplementa postavi v termostat pri temperaturi 37 ° 45-60 minut. (I. faza reakcije), nato pa uvedemo hemolitični sistem, sestavljen iz ovčjih eritrocitov in hemolitičnega seruma (II. faza reakcije). Nato epruvete ponovno postavimo v termostat za 30-60 minut do nastopa hemolize v kontroli, pri kateri antigen nadomestimo s fiziološko raztopino in namesto s testnim serumom vstavimo v termostat. fiziološka raztopina. Antigeni za Wassermanovo reakcijo se proizvajajo že pripravljeni, z navedbo titra in metode redčenja.

Največja pozitivnost Wassermanove reakcije je običajno označena s številom križcev: ++++ (ostro pozitivna reakcija) - kaže na popolno zamudo pri hemolizi; +++ (pozitivna reakcija) - ustreza pomembni zamudi pri hemolizi, ++ (šibko pozitivna reakcija) - dokaz delne zamude pri hemolizi, + (dvomljiva reakcija) - ustreza majhni zamudi pri hemolizi. Za negativno RW je značilna popolna hemoliza v vseh epruvetah.

Včasih pa so možni tudi lažno pozitivni rezultati - to je posledica dejstva, da kardiolipin v določeni količini vsebujejo tudi celice človeškega telesa. Človeški imunski sistem ne ustvarja protiteles proti "lastnemu" kardiolipinu, vendar obstajajo izjeme od tega pravila, zaradi katerih pride do pozitivne Wassermanove reakcije pri popolnoma zdravem človeku. To je še posebej pogosto opaziti po hudih virusnih in drugih boleznih - pljučnici, malariji, boleznih jeter in krvi, med nosečnostjo, tj. v trenutkih hude oslabitve imunskega sistema.

Če zdravnik sumi, da ima bolnik lažno pozitiven rezultat Wassermanove reakcije, lahko predpiše številne dodatne študije, ki se običajno uporabljajo pri diagnozi spolno prenosljivih bolezni.

Bolezni in primeri, v katerih lahko zdravnik predpiše krvni test za RW

Izvajanje postopka odvzema krvnega testa za RW

Kri na RW se daje samo na prazen želodec. Zadnji obrok mora biti najkasneje 6 ur pred testom. Zdravstveni delavec pacienta posede ali položi na kavč in vzame 8-10 ml krvi iz kubitalne vene.

Če je treba analizo opraviti pri dojenčku, se vzorec vzame iz lobanjske ali jugularne vene.

Priprava na krvni test za RW

1-2 dni pred testom morate prenehati piti alkohol. Prav tako ni priporočljivo jesti mastne hrane - lahko izkrivi rezultat. Med pripravo na analizo se morate vzdržati jemanja pripravkov digitalisa.

Kontraindikacije

Rezultat analize bo napačen, če:

• oseba je bolna z nalezljivo boleznijo ali je pravkar prebolela,
• ženska obdobje menstruacije,
• nosečnost v zadnjih tednih pred porodom,
• prvih 10 dni po porodu,
• prvih 10 dni otrokovega življenja.

Pri primarnem sifilisu postane Wassermanova reakcija pozitivna v 6-8 tednih poteka bolezni (v 90% primerov), medtem ko opazimo naslednjo dinamiko:

• v prvih 15-17 dneh po okužbi je reakcija pri večini bolnikov običajno negativna;
• v 5.-6. tednu bolezni pri približno 1/4 bolnikov reakcija postane pozitivna;
• pri 7-8 tednih bolezni RW pri večini postane pozitiven.

Pri sekundarnem sifilisu je RW vedno pozitiven. Skupaj z drugimi serološkimi reakcijami (RPHA, ELISA, RIF) omogoča ne le ugotavljanje prisotnosti patogena, temveč tudi ugotavljanje približnega časa okužbe.

Z razvojem sifilitične okužbe v 4. tednu bolezni, po pojavu primarnega sifiloma, se Wassermanova reakcija spremeni iz negativne v pozitivno, tako ostane v sekundarnem svežem in v sekundarnem ponavljajočem se obdobju sifilisa. V latentnem sekundarnem obdobju in brez zdravljenja lahko RW postane negativen, tako da, ko pride do klinične ponovitve sifilisa, ponovno postane pozitiven. Zato v latentnem obdobju sifilisa negativna Wassermanova reakcija ne kaže na njegovo odsotnost ali ozdravitev, ampak služi le kot ugoden prognostični simptom.

Pri aktivnih lezijah terciarnega obdobja sifilisa se pozitiven RW pojavi v približno 3/4 primerov bolezni. Ko aktivne manifestacije terciarnega obdobja sifilisa izginejo, se pogosto spremeni v negativno. V tem primeru negativna Wassermanova reakcija pri bolnikih ne pomeni, da nimajo sifilitične okužbe.

Pri zgodnjem prirojenem sifilisu je RW pozitiven skoraj v vseh primerih in je dragocena metoda za preverjanje bolezni. S poznim prirojenim sifilisom njegovi rezultati ustrezajo tistim, pridobljenim v terciarnem obdobju pridobljenega sifilisa.

Velik praktični pomen je študija Wassermannove reakcije v krvi bolnikov s sifilisom, ki se zdravijo. Pri nekaterih bolnikih se kljub močni antisifilični terapiji Wassermannova reakcija ne spremeni v negativno - to je tako imenovani serorezistentni sifilis. V tem primeru ni smiselno izvajati neskončne antisifilične terapije, s čimer dosežemo prehod pozitivnega RW v negativno.

Iz zgoraj navedenega sledi, da negativna Wassermanova reakcija ni vedno znak odsotnosti sifilitične okužbe v telesu.

Pozitivna Wassermanova reakcija je možna pri ljudeh s številnimi drugimi boleznimi in stanji, ki niso povezana s sifilisom:

Vse zgoraj navedeno kaže, da pozitiven rezultat Wassermanove reakcije še ni brezpogojni dokaz prisotnosti sifilitične okužbe.

Okrevanje po opravljeni analizi

Po odvzemu krvnega testa zdravniki priporočajo pravilno in Uravnotežena prehrana pa tudi čim več tekočine. Lahko si privoščite topel čaj in čokolado. Koristno bo, da se vzdržite telesne dejavnosti in v nobenem primeru ne uživate alkohola.

Norme

Običajno je treba v krvi opaziti hemolizo - to velja za negativno reakcijo na sifilis (Wassermannova reakcija je negativna). Če hemolize ni, se oceni stopnja reakcije, ki je odvisna od stadija bolezni (označeno z znaki "+"). V tem primeru se morate zavedati, da je lahko pri 3-5% popolnoma zdravih ljudi reakcija lažno pozitivna. Hkrati je lahko v prvih 15-17 dneh po okužbi reakcija pri bolnih ljudeh lažno negativna.

Za določitev natančne diagnoze se bolnik temeljito pregleda. Splošna analiza kri ni zelo informativna, ne uporablja se pri diagnozi spolno prenosljive okužbe.

Vrste študij in biomateriali za analizo

Za odkrivanje bolezni se uporabljajo različne metode in biomateriali. V zgodnjih fazah se sifilis določi z bakterioskopskim testom. Vzorci se pregledajo pod mikroskopom. Naprava vam omogoča odkrivanje sevov patogena. Kasneje se izvedejo serološke preiskave. Zahvaljujoč njim se v vzorcih odkrijejo antigeni in protitelesa proti bolezni.

Metode za določanje spolne okužbe so razdeljene v 2 kategoriji:

• neposredno, razkrivajoče patogen. Sem spadajo: mikroskopija v temnem polju, analiza RIT (okužba kuncev z biomaterialom za raziskave), metoda PCR - verižna reakcija s polimerazo (z njeno pomočjo najdemo genetske elemente patogena).
• Posredna (serološka) detekcija protiteles proti patogenu. Proizvaja jih imunski sistem kot odziv na okužbo.

Serološke metode so razdeljene v dve kategoriji: treponemske in netreponemske.

Netreponemski, vključno z: testom s toluidin rdečim, analizo RSK, RPR-testom, krvnim testom z ekspresno metodo RMP.

Treponemal, ki združuje: imunobloting, RSK test, RIT analizo, RIF študijo, RPGA test, ELISA analizo.

Informativnost testov za okužbo je drugačna. Pogosteje opravite glavne vrste testov za sifilis, ki vključujejo serološke metode. Za bolnike, ki potrebujejo pregled, zdravnik predpiše teste posamično.

Biomaterial za raziskave

Za identifikacijo blede treponeme, patogena, ki izgleda kot spirala in povzroča sifilis, se vzamejo vzorci:

• venska kri;
• likvor (izloček iz hrbteničnega kanala);
• vsebina bezgavk;
• razjedno tkivo.

Če je potrebno opraviti teste za odkrivanje sifilisa, se kri vzame ne samo iz kubitalne vene, ampak tudi iz prsta. Na izbiro biomateriala in raziskovalne metode vplivata resnost okužbe in oprema diagnostičnega centra.

Neposredna raziskava

Prepričljiv dokaz sifilisa je identifikacija povzročiteljev okužbe pod mikroskopom. Na ta način odkrijejo povzročitelja pri 8 od 10 pregledanih pacientov, negativen izvid pri preostalih 2 pa še ne pomeni, da nista okužena.

Študija se izvaja na primarni in sekundarni stopnji (stopnji) bolezni, za katero je značilen pojav izpuščajev na koži in sifilomov (razjed) na epitelna tkiva ali sluznice. V izcedku iz lezij najdemo patogene, ki povzročajo spolno prenosljive bolezni.

Natančneje, kompleksen test, imenovan RIF, imunofluorescenčna reakcija, se spopada z določitvijo treponeme. Vzorec za raziskavo je predhodno obdelan s fluorescentnimi protitelesi. Spojine, ki so sposobne žareti, se zlepijo z bakterijami. Pregled vzorcev pod mikroskopom, v primeru okužbe, laboratorijski pomočnik vidi peneče patogene.

Test se uporablja za zgodnjo diagnozo bolezni. Dlje ko bolezen traja, manjša je občutljivost raziskovalnih metod. Poleg tega pade po zdravljenju izpuščajev in razjed z antiseptičnimi sredstvi ter pri bolnikih, ki so bili zdravljeni. Občasno študija daje lažno negativne in lažno pozitivne rezultate.

Analiza RIT je zelo natančen način za odkrivanje sifilisa. Med testom se na rezultate čaka dolgo. Dokler okuženi zajec ne pokaže znakov okužbe. Test se uporablja zelo redko, kljub temu, da je izjemno natančen.

S polimerazno verižno reakcijo za sifilis se določijo genetski elementi patogenov. Edina pomanjkljivost PCR je visoka cena.

Netreponemski testi

Takšni krvni testi pomagajo odkriti protitelesa, ki se pojavijo kot odgovor na kardiolipin, spojino, povezano s splošno strukturo membran patogenov.

Wassermanova reakcija (RV ali RW)

Najbolj znan test za sifilis je Wassermanova reakcija. RS je vključena v kategorijo reakcij vezave komplementa (CFR). Nove metode RSC se bistveno razlikujejo od tradicionalnih RW. Vendar so označeni, kot prej, s pojmom "Wassermanova reakcija".

Imunski sistem sintetizira protitelesa (markerje) kot odgovor na invazijo treponeme. Odkrijejo jih v krvnem testu za sifilis z metodo Wassermanove reakcije. Pozitiven rezultat RW potrjuje, da je subjekt okužen.

Reakcija hemolize - indeks analize PB. Z njim sodelujeta 2 snovi: hemolitični serum in ovčji eritrociti. Serum je narejen z imunizacijo zajca z ovnovimi eritrociti. S segrevanjem se aktivnost biološke tekočine zmanjša.

Indikatorji RV so odvisni od tega, ali je hemoliza minila ali ne. V vzorcu brez markerjev pride do hemolize. V tem primeru je reakcija na antigene nemogoča. Komplement se porabi za interakcijo z ovčjimi eritrociti. Ko so v vzorcu markerji, kompliment reagira z antigeni. V tem primeru se hemoliza ne pojavi.

Komponente za RW se merijo v enakih količinah. Vzorec, ki vsebuje serum, antigen in kompliment, se segreje. Vzorcu dodamo ovčje eritrocite in serum. Hranimo pri temperaturi 37 stopinj, dokler ne pride do hemolize v kontrolnem vzorcu, ki namesto antigena vsebuje fiziološko raztopino.

Za izvajanje RV se uporabljajo že pripravljeni antigeni. Titri in tehnologija njihovega redčenja so navedeni na embalaži. Pozitiven rezultat RW je označen s križci. Končani rezultati testi so označeni na naslednji način:

• ++++ - maksimalno pozitivno (zakasnjena hemoliza);
• +++ - pozitivno (hemoliza je znatno zakasnjena);
• ++ - šibko pozitiven (hemoliza delno zapoznela);
• + - dvomljivo (hemoliza je bila rahlo zakasnjena).

Pri negativnem RV je bila hemoliza popolnoma realizirana v vseh vzorcih. Toda v nekaterih primerih se pridobijo lažno pozitivni podatki. To se zgodi, ko je kardiolipin del celic. Obrambni mehanizmi ne proizvajajo markerjev za "domači" kardiolipin.

Vendar obstajajo redke izjeme. Pozitivni RW se odkrije pri neokuženih ljudeh. To je mogoče, če je bolnik imel huda bolezen ki jih povzročajo virusi (pljučnica, malarija, tuberkuloza, patologije jeter in krvi). Pozitiven RV se pojavi pri nosečnicah. To je posledica dejstva, da je imunski sistem pretirano oslabljen.

Če obstaja sum, da je rezultat testa za sifilis lažno pozitiven, se bolnik dodatno pregleda. Težava je v tem, da te okužbe ni mogoče odkriti z eno samo klinično laboratorijsko preiskavo. Nekatere študije dajejo napačne kazalnike, ki so tako negativni kot pozitivni.

Podrobna analiza za sifilis pomaga pridobiti zanesljive podatke. Po njegovi zaslugi vzpostavijo prava diagnoza: dokažite okužbo ali jo izključite. Poleg tega vam razširjeni test omogoča, da ustavite razvoj okužbe, da izključite nepotrebno terapijo.

RSK in RMP

Pri izvajanju raziskave za sifilis se tradicionalna Wassermanova reakcija uporablja zelo redko. Namesto tega se uporablja metoda RSC. Test daje pozitiven rezultat 2 meseca po okužbi. Pri sekundarni obliki bolezni je pozitiven v skoraj 100% primerov.

Metoda mikroprecipitacije (RMP) je študija z mehanizmom, podobnim Wassermanovi reakciji. Tehnika je preprosta za izvedbo. Izvaja se hitro. Za raziskave se kri za sifilis v tem primeru vzame s prsta. Tehnika daje pozitiven rezultat 30 dni po pojavu sifilomov. Napake v študiji niso izključene. Lažno pozitivni podatki so pridobljeni v ozadju: poslabšanih okužb, pljučnice, srčnega infarkta, kapi, zastrupitve.

Privede do napačnih testov:

Po odkritju dvomljive analize za sifilis se opravijo treponemske študije. Pomagajo razjasniti diagnozo.

RPR in test s toluidinskim rdečim

Metoda reagina v plazmi (RPR) je še en analog Wassermanove reakcije. Uporablja se po potrebi:

• pregled asimptomatskih posameznikov;
• potrditi sifilis;
• pregledati darovano kri.

Test s toluidinskim rdečim, tako kot RPR, se izvaja za oceno napredka zdravljenje z zdravili. Njihovi kazalniki padejo, ko se bolezen umakne, in povečajo, ko se patologija ponovi.

Netreponemski testi pokažejo, koliko je pacient okreval. Pridobitev negativnih rezultatov za sifilis kaže, da se je bolezen popolnoma umaknila. Prvi pregled se opravi 3 mesece po tečaju terapije.

Treponemalne študije

Visoko zmogljivi testi se izvajajo z uporabo treponemskih antigenov. Izdelane so, ko:

• z metodo RMP je bil dosežen pozitiven rezultat;
• treba je prepoznati napačne podatke, ki izhajajo iz presejalnih testov;
• sum na razvoj sifilisa;
• potrebno je diagnosticirati latentno okužbo;
• treba je postaviti retrospektivno diagnozo.

RIF in RIT testi

Pri mnogih zdravljenih bolnikih treponemsko testiranje vzorcev daje pozitivne rezultate za dolgo časa. Ne morejo oceniti stopnje učinkovitosti zdravljenja. RIT in RIF sta preobčutljiva testa. Zahvaljujoč njim se pridobijo zanesljivi podatki. Te analize so dolgotrajne, zahtevajo dostojno količino časa, razpoložljivost napredne opreme. Izvaja jih lahko usposobljeno medicinsko osebje.

Z analizo RIF za sifilis so pozitivni podatki pridobljeni 2 meseca po okužbi. Negativni parametri potrjujejo, da je subjekt zdrav. Pozitivno - nakazujejo, da je oseba okužena.

RIT se izvede, ko je reakcija mikroprecipitacije pozitivna. Takšen krvni test za sifilis pomaga ovreči ali potrditi prisotnost okužbe. Test je ultra občutljiv, natančno pokaže ali je bolnik kužen ali zdrav. Toda študija zagotavlja zanesljive podatke le 3 mesece po prodoru treponeme v telo.

Western blotting metoda

Ultra natančni testi vključujejo imunobloting. Takšen krvni test za sifilis se redko izvaja. Uporablja se pri pregledu novorojenčkov. Ni primeren za ekspresno testiranje. Pozitivni rezultati so prejeti pozno. Veliko prej jih dajemo z metodo mikroprecipitacije.

ELISA in RPGA

Informativne ultra natančne raziskovalne metode vključujejo teste ELISA in RPHA. Uporabljajo se za hitro diagnozo. Laboranti naredijo ogromno takih analiz. Zahvaljujoč njim je mogoče vzpostaviti natančno diagnozo.

Analiza RPHA za sifilis je pozitivna 30 dni po vstopu patogena v telo. Z njegovo pomočjo se diagnosticira primarna okužba, ko se pojavijo razjede in izpuščaj.

Zahvaljujoč njemu je mogoče prepoznati zanemarjene, skrivno trenutne, pa tudi prirojene oblike patologije. Vendar se izvaja v povezavi z netreponemskimi in treponemskimi testi. Celovita diagnostika zagotavlja zanesljivost rezultatov. Trojno testiranje natančno dokazuje prisotnost ali odsotnost spolne okužbe.

Pozitiven odziv ostaja za velik segmentčas. Zaradi tega se študija ne uporablja za oceno učinkovitosti zdravljenja.

ELISA analiza je pozitivna 21 dni po okužbi. Test včasih daje napačne rezultate. Pojavijo se s sistemskimi patologijami, motnjami metabolnih procesov. Njihova učinkovitost je vprašljiva pri otroku, ki ga je rodila okužena mati.

Napake, pridobljene s serološkimi raziskovalnimi metodami, so postale razlog za odkritje progresivnih diagnostičnih metod. Plinska kromatografija in masna spektrometrija ne dajeta lažni rezultati. Edina ovira za njihovo množično uporabo so visoki stroški.

Algoritem diagnoze

• Ko je sifilis v primarni fazi (do 60 dni od trenutka okužbe), povzročitelja iščemo na temnem ozadju ali pa ga odkrivamo s fluorescentnimi protitelesi.
• Če je patologija v primarni, sekundarni ali latentni obliki, se uporabljata RMP in ELISA. Krvni test RPGA za sifilis pomaga potrditi rezultate.
• V primeru ponovitve sekundarne okužbe se analizira izcedek razjed in izpuščajev. Patogene odstranimo iz vzorcev, preučujemo jih z mikroskopom.
• Ko bolezen preide v terciarno fazo, ima 1/3 bolnikov negativen rak mehurja. Hkrati so rezultati ELISA in RPHA pozitivni. Vendar ne nakazujejo vedno terciarnega obdobja, temveč potrjujejo, da je oseba že imela okužbo. Šibko pozitiven test je dokaz popolne ozdravitve in ne razvoja terciarne faze.
• Za potrditev prirojenega sifilisa se vzame krvni test matere in otroka. Primerjajte podatke RMP testov. Upoštevajte, da sta ELISA in RPHA otroka pozitivna. Potrdite diagnozo s tehniko imunoblotinga.

Sifilis, tako kot katera koli sistemska patologija, vpliva na celotno telo. Zato se pregledi za to izvajajo med nosečnostjo, pred splavom. Bolniki naredijo RMP, ELISA, RPHA.

Kako opraviti analizo

Venereolog pošlje bolnike na analizo. Zasebni laboratoriji izvajajo anonimne raziskave na sifilis na zahtevo naročnika. Za opravljanje testa ne potrebujejo napotnice zdravnika.

Pravila raziskave:

• Krv v laboratoriju se odvzame zjutraj na tešče (po posegu jesti). Pred analizo je dovoljeno piti samo vodo.
• 2 dni pred pregledom je prepovedano jesti mastno hrano in piti alkohol.
• Kri se vzame iz prsta ali vene.
• Kako dolgo traja študij? Ponavadi ne več kot en dan. Prepis testov za sifilis se pridobi od laboratorijskih pomočnikov ali lečečega zdravnika.
• Koliko časa velja test? Po 3 mesecih rezultati testa postanejo neveljavni. Spet se prodajajo.

Če dekodiranje analize pokaže, da je test pozitiven, je treba obiskati venereologa, ki bo predpisal dodaten pregled za natančno potrditev diagnoze in izbiro potrebnega režima zdravljenja.

Testiranje vsebine hrbtenice

Diagnozo nevrosifilisa postavimo po pregledu cerebrospinalne tekočine. Ta analiza se izvaja:

• ljudje z latentno obliko okužbe;
• s simptomi bolezni živčnega sistema;
• asimptomatski, napredovali nevrosifilis;
• ozdraveli bolniki s pozitivnimi serološkimi testi.

Smer za študij cerebrospinalne tekočine daje zdravnik. Iz hrbteničnega kanala vzemite punkcijo v 2 epruveti. Punkcija je namazana z jodom, pokrita s sterilnim prtičkom. Po posegu je bolnik v postelji 2 dni.

V 1 vzorcu se določi količina beljakovin, celic, sledi meningitisa. V drugem vzorcu se izračunajo protitelesa proti povzročitelju sifilisa. Za to so narejeni testi: RV, RMP, RIF in RIBT.

Glede na število odkritih kršitev ločimo 4 vrste alkoholnih pijač. Vsak kaže na določeno poškodbo živčnega sistema. Zdravnik diagnosticira:

Poleg tega rezultati testov sodijo o okrevanju pacienta.

Razlaga testov je naloga zdravnika. Samo on lahko naredi prave zaključke, po potrebi predpiše dodaten pregled in postavi natančno diagnozo. V primeru nevarne sistemske patologije ni treba opraviti neodvisne diagnoze. Napačna diagnoza ima resne posledice.

Reakcija vezave komplementa (CFR)

Reakcija vezave komplementa (RCC) poteka v dveh fazah: v prvi fazi se antigen kombinira s testnim serumom, v katerem se predpostavlja prisotnost protiteles in doda komplement, inkubiramo v termostatu 30 minut.

Druga faza: dodamo hemolitični sistem (ovčji eritrociti + hemolitični serum). Po inkubaciji v termostatu 30 minut se upošteva rezultat.

Pri pozitivnem RSK serumska protitelesa v kombinaciji z antigenom tvorijo imunski kompleks, ki nase veže komplement, in do hemolize ne pride. Če je reakcija negativna (v testnem serumu ni protiteles), bo komplement ostal prost in prišlo bo do hemolize.

RSK se uporablja za serološko diagnostiko sifilisa, gonoreje, tifusa in drugih bolezni.

Imunske reakcije z uporabo označenih antigenov in protiteles temeljijo na dejstvu, da je ena od sestavin, vključenih v reakcijo (antigeni ali protitelesa), združena z neko oznako, ki jo je mogoče zlahka zaznati. Kot oznake se uporabljajo fluorokromi (RIF), encimi (ELISA), radioizotopi (RIA), spojine z elektronsko gostoto (IEM).

Encimsko-imunski test (ELISA) se tako kot druge imunske reakcije uporablja: 1) za odkrivanje neznanega antigena z uporabo znanih protiteles ali 2) za odkrivanje protiteles v krvnem serumu z uporabo znanega antigena. Posebnost reakcije je, da se znana sestavina reakcije združi z encimom (na primer peroksidazo). Prisotnost encima določa substrat, ki se zaradi delovanja encima obarva. Najbolj razširjena trdnofazna ELISA.

1) Odkrivanje antigena. Prva faza je adsorpcija specifičnih protiteles na trdni fazi, ki se uporablja kot polistirenske ali polivinilkloridne površine vdolbinic plastičnih plošč. Druga faza je dodajanje testnega materiala, ki predvideva prisotnost antigena. Antigen se veže na protitelesa. Vdolbinice nato speremo. Tretja faza je dodajanje specifičnega seruma, ki vsebuje protitelesa proti danemu antigenu, označena z encimom. Označena protitelesa se pritrdijo na antigene, njihov presežek pa se odstrani s spiranjem. Če so torej v testnem materialu antigeni, se na površini trdne faze tvori z encimom označen kompleks protitelo-antigen-protitelo. Za detekcijo encima dodamo substrat. Za peroksidazo je substrat ortofenilendiamin, pomešan s H 2 O 2 v pufrski raztopini. Pod delovanjem encima nastanejo produkti, ki imajo rjavo barvo.

2) Odkrivanje protiteles. Prva faza je adsorpcija specifičnih antigenov na stene vdolbinic. Običajno so v komercialnih testnih sistemih antigeni že adsorbirani na površini vdolbinic. Druga faza je dodajanje proučevanega seruma. V prisotnosti protiteles nastane kompleks antigen-protitelo. Tretja stopnja - po izpiranju se v vdolbinice dodajo z encimom označena antiglobulinska protitelesa (protitelesa proti humanim globulinom). Rezultate reakcije ovrednotimo, kot je opisano zgoraj.

Kot kontrole se uporabljajo znani pozitivni in znani negativni vzorci, ki so na voljo v komercialnih sistemih.

ELISA se uporablja za diagnosticiranje številnih nalezljivih bolezni, zlasti okužbe s HIV, virusnega hepatitisa.

Imunobloting je vrsta ELISA (kombinacija elektroforeze in ELISA). Biopolimere, kot so antigeni virusa humane imunske pomanjkljivosti, ločimo z gelsko elektroforezo. Ločene molekule se nato prenesejo na površino nitroceluloze v istem vrstnem redu, kot so bile v gelu. Postopek prenosa imenujemo blotiranje, nastali odtis pa blot (angleško blot - madež). Na ta odtis vpliva preiskovani serum. Nato dodamo s peroksidazo označen antihumani globulinski serum in nato substrat, ki pod delovanjem encima porjavi. Rjave proge nastanejo tam, kjer so se protitelesa združila z antigeni. Metoda vam omogoča odkrivanje protiteles proti posameznim antigenom virusa.

Radioimunski test (RIA). Metoda vam omogoča, da določite količino antigena v testnem vzorcu. Najprej se na imunski serum pritrdi material, ki domnevno vsebuje antigen, nato pa znani antigen, označen z radioizotopom, na primer I 125 . Posledično se zaznavni (neoznačeni) in znani označeni antigen veže na omejeno število protiteles. Ker je označeni antigen dodan v določenem odmerku, je mogoče ugotoviti, kateri del se je vezal na protitelesa, kateri pa je zaradi kompeticije z neoznačenim antigenom ostal prost in je bil odstranjen. Količino označenega antigena, vezanega na protitelesa, določimo s števcem. Je obratno sorazmeren s količino določenega antigena.

Imunoelektronska mikroskopija (IEM). Antigen, na primer virus gripe, je vezan na specifičen antiserum, označen z elektronsko gosto snovjo. Kot oznaka se uporabljajo beljakovine, ki vsebujejo kovine (feritin, hemocianin) ali koloidno zlato. Pri mikroskopiranju v elektronskem mikroskopu se posnamejo fotografije, ki prikazujejo virione influence s pritrjenimi temnimi pikami - molekulami označenih protiteles.

Pridobljena imunost, njena razlika od dedne (vrste, prirojene). Vrste pridobljene imunosti.

Naloga. V družini je otrok Valery, star tri leta, zbolel za davico. Ostali družinski člani niso zboleli, mati pa je v otroštvu zbolela za davico, oče pa je bil cepljen z davičnim toksoidom. Starejša sestra Nataša, stara pet let, zaradi zdravstvenih kontraindikacij ni bila cepljena z davičnim toksoidom, zato je morala dobiti nujno profilakso z antitoksičnim serumom proti davici. Mlajši brat Vitalij tri mesece ni zbolel, čeprav ni bil z ničemer cepljen. V hiši sta mačka in pes, nista zbolela. Za vsakega od družinskih članov in za živali poimenujte vrsto imunosti, zaradi katere niso zbolele.

Kaj je antigen? Katere snovi so lahko antigeni? Popolni antigeni in hapteni, kako se med seboj razlikujejo? Struktura antigena. Kako se imenuje del molekule antigena, ki določa njegovo specifičnost? Poimenujte antigene, ki jih poznate. Kaj so avtoantigeni? Antigenska zgradba mikrobne celice. Flagella in somatski antigeni; lokalizacija, črkovna oznaka, kemična narava, odnos do temperature, način priprave, praktično uporabo. Anatoksin, njegove lastnosti, uporaba, proizvodnja. Katero tkivo sestavlja imunski sistem telesa? Navedite centralne in periferne organe človeškega imunskega sistema. Opišite proces nastajanja humoralnega in celičnega imunskega odgovora. Navedite celice, ki zajamejo in prebavijo antigen; celice, ki sodelujejo pri nastanku humoralne imunosti, celične imunosti; celice, ki se transformirajo in postanejo plazemske celice, ki proizvajajo protitelesa; celice, ki spodbujajo ta proces; celice, ki zavirajo imunski odziv; celice, ki ubijajo tumorske celice in z virusom okužene celice. Kaj so protitelesa? Kako do imunskega seruma? Kako do seruma, ki bi nevtraliziral tetanusni toksin? Proti katerim antigenom se tvorijo antitoksini, aglutinini, hemolizini? Katera protitelesa nastanejo ob vbrizganju davičnega toksoida v telo? bakterije davice? Kemična narava in struktura protiteles. Kaj je aktivno mesto imunoglobulina? Naštejte razrede imunoglobulinov, njihove lastnosti. Navedite razred imunoglobulinov, ki lahko prehajajo skozi placento. V kateri razred spadajo sekretorni imunoglobulini? Dinamika kopičenja protiteles. Kako se sekundarni imunski odziv razlikuje od primarnega? Kako se znanje o dinamiki imunskega odziva uporablja v praktični medicini? Kakšne so imunske reakcije, kakšen je njihov mehanizem, reakcije. V kateri 2 smeri se uporabljajo imunske reakcije? Naštejte reakcije imunskega sistema.

Naloga. Manjkajoče besede zamenjajte s »toksoid« ali »antitoksin«: _________ je antigen, _________ je protitelo, __________ ob vnosu v telo ustvari aktivno imunost, __________ ob vnosu v telo ustvari pasivno imunost, __________ se pridobi z imunizacijo živali. , ___________ se pridobi iz toksina, ko je izpostavljen formalinu in toploti, ___________ nevtralizira toksine, __________ povzroči nastanek protiteles v telesu.

Aglutinacijska reakcija: kaj je aglutinacija, kaj je antigen, kaj je protitelo; načini nastavitve, katere kontrole so nastavljene in za kaj; kako naj izgledajo kontrole. Aglutinacijski serumi, kaj vsebujejo, kako se pridobivajo, za kaj se uporabljajo; kakšen je titer aglutinacijskega seruma? Reakcija posredne (pasivne) hemaglutinacije: kaj služi kot antigen pri tej reakciji, kako se pridobi, mehanizem reakcije. Kaj je eritrocitni diagnostik? Kaj je protitelesni eritrocitni diagnostik? Precipitacijske reakcije: kaj je precipitacija, kaj služi kot antigen; kako do seruma za obarjanje? Kakšen je titer obarjanja seruma? Izjavne metode, praktična uporaba.

Reakcija vezave komplementa (RCC): princip CFR; kaj nastane pri interakciji imunskega seruma s specifičnim antigenom; kaj se zgodi s komplementom, če je prisoten v tej interakciji? Kakšna je usoda komplementa, če med antigenom in protitelesi ni specifične afinitete? Če je končni rezultat RSK hemoliza, ali to pomeni pozitiven ali negativen rezultat? Tehnika nastavitve RSC. Zakaj bi moral biti testni serum inaktiviran? Hemolitični serum: kaj vsebuje, kako se pridobi, kaj je titer in kako se določi? Komplement: kemična narava, razmerje do visoka temperatura kje je vsebovan? Kako se lahko komplement uniči? Kaj se praktično uporablja kot dopolnilo?

Naloga. Na oblačilih moškega, obtoženega umora, so našli madež krvi. S kakšno reakcijo je mogoče ugotoviti, ali gre za človeško kri; kaj bo v tej reakciji antigen in kaj bodo protitelesa; kakšno diagnostično zdravilo mora biti v laboratoriju za to reakcijo, kako se pripravi?

Naloga. Kako uporabiti reakcijo obarjanja za ugotavljanje, ali je vzorec mesa, dostavljen v analizo, velik govedo ali konjsko meso; kakšne diagnostične priprave so potrebne?

Reakcija padavin v agar gel, metode nastavitve, praktična uporaba.

Kaj pokaže serološki test krvi?

Kaj pokaže serološki test krvi? Diagnostični ukrepi so najpomembnejša faza pri zdravljenju katere koli bolezni. Uspeh zdravljenja ni odvisen le od predpisanih zdravil, ampak v veliki meri tudi od tega, kako pravilno je bila postavljena diagnoza.

Poleg tega lahko diagnostika prepreči zaplete in sočasne bolezni. S pomočjo serološke analize bolnikove krvi ugotovimo prisotnost protiteles in antigenov. Študija pomaga odkriti številne bolezni, določiti njihovo fazo in nadzorovati potek zdravljenja.

Kaj je serologija?

Serologija je veja imunologije, ki preučuje reakcije antigenov na protitelesa. Ta veja medicine se ukvarja s proučevanjem krvne plazme in njenih imunoloških značilnosti.

Danes je serološki krvni test za protitelesa zanesljiv način za odkrivanje virusa humane imunske pomanjkljivosti, hepatitisa, bruceloze, spolno prenosljivih bolezni in drugih življenjsko nevarnih bolezni. Ugotovimo, v katerih primerih je predpisano.

Indikacije za imenovanje

Serološki test krvi je potreben za identifikacijo povzročitelja bolezni v primeru težav pri postavljanju diagnoze.

Za izvedbo te reakcije se antigeni patogenov injicirajo v plazmo, nato pa laboratorijski pomočnik preučuje proces, ki poteka. Bodisi izvedite povratni udarec: V okužena kri protitelesa se injicirajo za določitev specifične pripadnosti povzročitelja.

Področje uporabe

Ta študija se uporablja v različne industrije zdravilo. S pomočjo te reakcije se zaznajo specifične celice in protitelesa, ki jih proizvaja telo, da bi se borili proti okužbam in virusom.

Poleg tega se s serološko metodo določi krvna skupina osebe.

Podoben serološki krvni test se uporablja v ginekologiji za diagnosticiranje spolno prenosljivih bolezni. Ta metoda se uporablja tudi za celovite preglede nosečnic (odkrivanje toksoplazmoze, HIV, sifilisa itd.). Opravljanje tega preizkusa je obvezno za registracijo v predporodna klinika.

Pri otrocih se serološki test uporablja za potrditev diagnoze tako imenovanih "otroških" bolezni (norice, ošpice, rdečke itd.), V primeru, da simptomi nimajo izrazitih manifestacij in bolezni ni mogoče identificirati z analiza kliničnih indikacij.

Odkrivanje spolno prenosljivih bolezni

Za venerologe je to testiranje resnično nepogrešljivo in vam omogoča zelo natančno diagnozo.

Z zamegljeno klinično sliko lahko serološki krvni test za sifilis, giardiozo, ureaplazmozo, klamidijo, herpes in druge bolezni hitro ugotovi prisotnost protiteles.

Virusne in nalezljive bolezni

Serološko analizo aktivno uporabljajo gastroenterologi, hepatologi in specialisti za nalezljive bolezni za diagnosticiranje virusnega hepatitisa.

Dešifriranje serološke preiskave krvi omogoča določitev stopnje poteka bolezni in odgovor na vprašanje, koliko hospitalizacije je trenutno potrebno. Kako se pravilno pripraviti?

Priprava na dostavo analize

Serološke preiskave krvi se izvajajo v javnih in komercialnih ambulantah. Prednost je treba dati laboratoriju s sodobno opremo in usposobljenim osebjem.

Biološki vzorci za raziskave so lahko slina in blato, vendar se v večini primerov uporablja venska kri bolnika. Krv za serološko preiskavo odvzamemo iz kubitalne vene v laboratoriju. Preden opravite test, se posvetujte s svojim zdravnikom o pripravi na ta postopek.

Za pripravo na dostavo analize za serološko študijo morate upoštevati nekaj preprostih pravil.

Kri se odvzame v mirnem stanju pred obroki, to je na prazen želodec. Pred tem ne smete opraviti drugih študij, kot so rentgenski žarki, ultrazvok itd.

Nekaj ​​tednov pred darovanjem krvi je treba izključiti uporabo antibakterijskih in nekaterih drugih zdravil. Nekatera priporočila so v tem primeru odvisna od bolezni, za katero se preiskava izvaja. Na primer, test za hepatitis vključuje izogibanje mastni hrani in alkoholu 48 ur pred posegom.

Fluorescenčna reakcija

Med vrstami seroloških reakcij je fluorescenčna reakcija. Ta tehnika uporablja reagent, ki poudari protitelesa v krvnem serumu.

Nastavitev neposredne serološke reakcije vključuje označevanje specifičnih protiteles s fluorescentno snovjo. Ta reakcija je najhitrejša in poteka v enem koraku.

Druga možnost za izvedbo takšne analize se imenuje posredna ali RNIF. Izvaja se v dveh fazah. V prvem koraku protiteles ne označujemo s fluorescentnimi oznakami, v drugem koraku pa z ustrezno označenimi protitelesi dokazujemo antigene in protitelesa. Luminescenca se pojavi šele, ko se veže na specifično protitelo.

Kaj pokaže serološki test krvi? Rezultat celotnega postopka se oceni s posebno napravo, ki analizira moč sevanja, razkriva obliko in velikost preučevanega predmeta. Povzročitelji nalezljivih bolezni se odkrijejo z rezultatom, katerega zanesljivost je %, odvisno od vrste in stopnje patologije.

Povezani imunosorbentni test

Te vrste serologije uporabljajo edinstvene, stabilne reagente. Zdi se, da se označene snovi držijo želenih protiteles. Kot rezultat dobimo kvalitativni ali kvantitativni rezultat.

Če ni izraženih markerjev, se bo rezultat štel za negativnega. Če se med kvalitativno študijo odkrije prisotnost protiteles v bioloških vzorcih, se rezultat analize šteje za pozitiven. Pri kvantificiranju celic analiza daje natančnejši rezultat.

Z analizo kazalcev analize (na primer količine odkritih celic) specialist ugotovi, ali je bolezen v začetni fazi, v akutni fazi ali se je kronična oblika patologije poslabšala. Za postavitev diagnoze zdravnik upošteva ne le podatke serološke študije, temveč tudi klinično sliko bolezni.

Značilnosti tega testa

Izvajanje te analize ne more vedno dati 100-odstotne gotovosti, da je bila določena bolezen odkrita. Zgodi se, da so rezultati lahko dvoumni in so potrebni drugi postopki.

Na primer, med testom za brucelozo se serum testira na samozadrževanje brez antigena. To bistveno poveča zanesljivost testiranja. Analiza za brucelozo je lahko pozitivna ali negativna in povzroča tudi dvome.

Če prejmete dvomljive rezultate, ki nimajo nedvoumne razlage, je priporočljivo ponovno opraviti analizo. Poleg tega je mogoče brucelozo odkriti kot rezultat hemokultur s pregledom kostni mozeg in cerebrospinalne tekočine.

Prednosti serološke preiskave krvi

Diagnostične tehnike s serološkimi testi se pogosto uporabljajo v sodobni medicinski praksi. To se še posebej pogosto izvaja pri določanju virusnih in nalezljivih patologij.

Isti testi se uporabljajo pri geografskem presejanju in zdravniškem pregledu za preprečevanje epidemiološkega širjenja okužbe.

Prednosti metode vključujejo:

• Visoka stopnja samozavesti.
• Hiter odziv in rezultati. Rezultati RSC so znani v 24 urah. V posebnem primeru, v bolnišničnem okolju, bo analiza pripravljena v nekaj urah.
• Spremljanje razvoja bolezni in učinkovitosti terapije.
• Nizki stroški in dostopnost za bolnike.

Slabosti metode

Vendar pa imajo serološke študije tudi svoje pomanjkljivosti.

Ti vključujejo dejstvo, ki ga mora analiza upoštevati inkubacijska doba bolezni, da bi dobili bolj zanesljivo sliko.

Na primer definicija herpes simpleks prva ali druga vrsta je možna šele po 14 dneh od trenutka okužbe. Analiza za prisotnost virusa imunske pomanjkljivosti se opravi po 30 dneh, po 90 dneh in šestih mesecih po stiku z okuženo osebo.

Seveda lahko na zanesljivost rezultatov vpliva tudi človeški dejavnik: zanemarjanje pravil za pripravo na odvzem krvi ali napaka laboratorijskega pomočnika med reakcijo.

Po statističnih podatkih je napačen rezultat mogoče dobiti v 5% primerov. Izkušeni zdravnik pri pregledu pacienta, ki je preučil klinično sliko, lahko v večini primerov izračuna storjeno napako.

Katere krvne preiskave se dajejo za sifilis: RW, RPHA, ELISA, VDRL, RPR, RIBT, dekodiranje rezultatov testov

Sifilis je nalezljiva bolezen, ki jo povzroča spiroheta Treponema pallidum, nagnjena k progresivnemu kroničnemu poteku, z jasno periodizacijo kliničnih simptomov.

Prevlada spolnega prenosa nad kontaktnim in transplacentalnim prenosom uvršča to bolezen med številne spolno prenosljive bolezni (SPO, SPO). Poleg teh načinov prenosa okužbe ima posebno vlogo umetna pot (iz latinskega "artificio" - umetno ustvarjena).

Značilno je za zdravstvene ustanove, ki se večinoma izvaja v bolnišničnem okolju. Do okužbe pride med transfuzijo krvi, različnimi kirurški posegi, invazivne diagnostične metode.

Kljub karanteni darovane krvi je problem odkrivanja sifilisa pri darovalcih različnih stopnjah bolezen je še vedno prisotna.

Zato diagnostični ukrepi za sifilis zahtevajo standardizacijo, uvedbo novih občutljivih in informativnih metod identifikacije, pa tudi zmanjšanje napak in napačne interpretacije rezultatov testov.

Klasifikacija laboratorijskih diagnostičnih metod

Diagnoza sifilisa ima nekatere značilnosti in se razlikuje od diagnoze drugih. bakterijske okužbe. Kompleksna struktura in antigenske lastnosti blede treponeme povzročajo napake pri interpretaciji rezultatov seroloških testov.

Krvni test za sifilis je na voljo 3 glavnim skupinam bolnikov:

1. 1 Presejalni in profilaktični zdravstveni pregled skupin prebivalstva (vključno z nosečnostjo, registracijo v predporodni kliniki, zaposlitvijo in registracijo zdravstvene knjižice itd.).
2. 2 Presejanje v rizičnih skupinah (nezaščiten spolni odnos z osebo, okuženo s sifilisom, osebe po prisilnem spolnem stiku, okuženi z virusom HIV itd.).
3. 3 Osebe s simptomi ali sumom na sifilistično okužbo.

Vse laboratorijske metode pogojno razdeljen na neposredne in posredne.

Neposredne metode

1. 1 Identifikacija Treponema pallidum v temnem polju (mikroskopija v temnem polju).
2. 2 Okužba poskusnih živali (gojitev v laboratorijskih živalih).
3. 3 PCR (verižna reakcija s polimerazo).
4. 4 DNA sonda ali hibridizacija nukleinske kisline.

Posredne metode

Serološke reakcije so laboratorijske diagnostične metode, ki temeljijo na odkrivanju protiteles (skrajšano AT) proti antigenom blede treponeme (skrajšano AG). Bistveni so za potrditev diagnoze.

1. 1 Netreponemski testi:
   • Wassermanova reakcija (RSK);
   • Reakcija mikroprecipitacije (MR, RMP) in njeni analogi, ki so navedeni spodaj;
   • Hitri test reagina v plazmi (RPR, RPR);
   • Test z rdečim toluidinom in serumom (TRUST);
   • Netreponemski test Laboratorija za proučevanje spolno prenosljivih bolezni - VDRL.
2. 2 Treponemski testi:
   • R-cija imobilizacije Treponema pallidum - RIBT / RIT;
   • R-cija imunofluorescence - RIF, FTA (razredčenje serumov RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • R-cija pasivne hemaglutinacije (RPHA, TRPGA, TPHA);
   • ELISA (ELISA, EIA);
   • Imunobloting.

Slika 1 - Algoritem za serodiagnozo sifilisa

Histomorfološke metode

Te metode so zmanjšane na prepoznavanje značilnosti histomorfologije sifilitičnih manifestacij. Pozornost je namenjena tankostim strukture trdega šankra. Vendar je diferencialna diagnoza okužbe s pomočjo histologije zelo težka. Histomorfologija se uporablja z drugimi laboratorijskimi in kliničnimi preiskavami.

Mikroskopija v temnem polju Treponema pallidum

Ta metoda temelji na neposrednem odkrivanju bledih treponem v testnem materialu z uporabo mikroskopa in posebnih naprav (najpogosteje izcedek iz erozij in razjed, manj pogosto cerebrospinalna tekočina in drugi substrati).

S pomočjo brazgotine, strganja, iztiskanja iz erozij in ulcerativnih okvar pridobimo eksudat, nato pa pripravljeni pripravek pregledamo pod mikroskopom.

Običajno se bledi treponemi odkrijejo v pripravku, pridobljenem iz šankra, iz žarišč sekundarnega svežega, sekundarnega ponavljajočega se sifilisa, pa tudi iz pike bezgavk, posteljice.

Metoda, ki temelji na pojavu sijaja majhnih delcev v temnem polju, ko jih zadene svetlobni žarek (Tyndallov fenomen), vam omogoča, da popolnoma ločite povzročitelja sifilisa od drugih treponemov na podlagi morfoloških razlik in razlik v načinih se bakterija premakne.

Za mikroskopiranje se uporablja poseben temnopoljski kondenzor ustrezne optične ločljivosti. Zdravilo pridobivamo po metodi zdrobljene kapljice (kapljico materiala nanesemo na čisto, nemastno predmetno stekelce in prekrijemo z zelo tankim pokrovnim stekelcem).

Imerzijsko olje kapnemo na pokrovno stekelce. Z vrtenjem tubusa in vrtenjem povečevalne leče nastavimo želeno osvetlitev.

V temnem polju mikroskopa se odkrijejo krvne celice, epitelne celice in povzročitelj sifilisa. Bleda treponema izgleda kot spirala, zelo tanka, izžareva srebrno barvo, z gladkimi gibi.

Slika 2 - Mikroskopija v temnem polju kot način vizualizacije blede treponeme v proučevanem materialu. Vir slike - CDC

Treponema pallidum je treba razlikovati od drugih treponem, vključno s Tr. refringens, ki se nahajajo v orofarinksu in sluznici genitalij. Ta bakterija izvaja kaotične gibe, ima široke in asimetrične, precej grobe kodre. Poleg tega se Treponema pallidum razlikuje od Tr. Microdentium, Tr. Buccalis in Tr. vincenti.

Vizualizacija bakterij v temnem polju je včasih dopolnjena s fluorescenčno reakcijo. Za to se naravnemu materialu dodajo antitreponemska protitelesa, označena s fluorescentnim barvilom. V tem primeru nastane kompleks, imenovan antigen-protitelo (skrajšano AG-AT), ki je predmet pregleda z luminiscenčnim mikroskopom.

Metoda verižne reakcije s polimerazo (PCR).

PCR, razvit leta 1991 za odkrivanje molekule deoksiribonukleinske kisline (DNK) treponeme pallidum, je zelo občutljiv in specifičen ter omogoča odkrivanje fragmentov DNK patogena.

Ta analiza temelji na kopiranju kratkih odsekov DNA spirohete pallidum, ki ustreza določenim parametrom in je prisotna v vzorcu. Vse to poteka v umetnih pogojih (in vitro). Reakcija se izvaja v napravi - ojačevalniku, ki zagotavlja periodizacijo temperaturnih ciklov. Pride do ohlajanja, ki mu sledi segrevanje epruvet z napako 0,1˚С.

Predlogo DNA segrevamo 2 minuti pri temperaturi 92-98˚С ( Najvišja temperatura uporablja se, če je polimeraza termostabilna). Pri segrevanju se verige DNK ločijo zaradi razpada vodikovih vezi med njimi. V koraku žarjenja se reakcijska temperatura zniža, da se temeljni premaz veže na enovijačno predlogo.

Žarjenje traja približno 30 sekund, med tem pa se sintetizira na stotine nukleotidov. Novo sintetizirane molekule kopira polimeraza, posledično se specifični fragmenti deoksiribonukleinske kisline večkrat povečajo. Naknadna detekcija fragmentov se izvede z elektroforezo v agar gelu.

PCR diagnostika sifilisa je še vedno eksperimentalna, vendar je upravičena, ko se odkrije prirojena okužba, v težkih diagnostičnih primerih ali z minimalno vsebnostjo bledih treponem v testnem materialu.

DNA hibridizacija

Hibridizacija DNK se izvaja in vitro in temelji na popolni ali delni povezavi dveh enoverižnih molekul DNK v eno molekulo. V primeru popolnega ujemanja komplementarnih fragmentov je združitev enostavna. Če je komplementarno ujemanje delno, potem pride do povezovanja verig DNK počasi. Na podlagi časa verižne fuzije je mogoče oceniti stopnjo komplementarnosti.

Ko se DNK segreje v puferski raztopini, vodikove vezi prekinejo dušikove baze, ki so komplementarne, posledično se verige DNK razhajajo. Nato dobimo pripravek iz dveh denaturiranih deoksiribonukleinskih kislin. Po ohlajanju pride do renaturacije enoverižnih regij. Nastane tako imenovani DNK hibrid.

Metoda omogoča oceno in analizo stopnje žarjenja ob upoštevanju lastnosti (podobnosti in razlik) DNK med vrstami ali znotraj vrste.

Uporaba sonde DNA je sestavljena iz hibridizacije označenega fragmenta DNA s specifično regijo DNA za identifikacijo komplementarnih nukleotidnih sekvenc. Za označevanje sonde se uporablja skupina nenasičenih atomov (kromoforjev) ali radioaktivnih izotopov.

Sonda DNA se uporablja za heterogeno in homogeno detekcijo nukleinskih kislin. Vloga sonde je določiti območja, kjer je prišlo do zlitja tarče in sonde. Detekcija v homogenem sistemu ima prednost, da lahko sledi hibridizaciji molekul DNK v realnem času.

Bistvo metode je reducirano na denaturacijo in renaturacijo DNK (ponovno združevanje verig DNK). Proces renaturacije nukleinske kisline in sonde DNA se konča s tvorbo "hibrida".

Specifična zaporedja nukleinskih kislin se hibridizirajo s sondo DNK in se tako zaznajo ter omogočajo oceno količine DNK v testnem materialu.

Okužba laboratorijskih živali

Visoka občutljivost kuncev na Treponema pallidum (približno 99,9%) omogoča njihovo uporabo pri diagnozi sifilitične okužbe.

Okužba kuncev se izvaja v raziskovalnih centrih in je "zlati standard" za oceno občutljivosti drugih metod.

Vrnimo se k treponemskim in netreponemskim testom, saj se najpogosteje uporabljajo. Upoštevajte njihove prednosti in slabosti ter napake pri interpretaciji rezultatov.

Netreponemski testi

To so testi za določanje protiteles IgG in IgM na standardiziran kardiolipinski antigen. Njihova pomembna pomanjkljivost je relativno nizka specifičnost.

Nizka cena in enostavna izvedba omogočata uvrstitev teh testov med presejalne diagnostične teste, potrebne za postavitev predhodne diagnoze in presejanje prebivalstva.

To so ne-treponemalni testi, ki se dajejo ob registraciji zdravstvene knjige, prijavi na delovno mesto, registraciji v predporodni kliniki.

1. 1 Minimalna občutljivost v fazi primarnega sifilisa - 70%;
2. 2 Minimalna občutljivost v fazi poznega sifilisa - 30%;
3. 3 Možnost lažno negativnih in lažno pozitivnih rezultatov;
4. 4 Kompleksnost implementacije RSC.

1. 1 Relativno nizki stroški testne proizvodnje;
2. 2 Pridobite hiter odgovor;
3. 3 Možnost njihove uporabe za presejanje.

Pridobitev lažno pozitivnih ali šibko pozitivnih vzorcev je možna v naslednjih primerih:

1. 1 Kršitev izvedbene tehnologije pri blokiranju kompleksa AG-AT.
2. 2 Bolnik ima avtoimunske bolezni (revmatoidni artritis, revmatizem, skleroderma, sistemski eritematozni lupus, sarkoidoza itd.).
3. 3 Maligne neoplazme.
4. 4 Virusne in bakterijske okužbe.
5. 5 Endokrine bolezni ( avtoimunski tiroiditis, sladkorna bolezen).
6. 6 Nosečnost.
7. 7 Pitje alkohola.
8. 8 Uživanje mastne hrane.
9. 9 starost.

Kot je razvidno iz seznama, je razlogov za nepravilen rezultat dovolj. Zato je treba z njim ravnati zelo previdno. Oglejmo si še dva vzorca skupaj z RSC. To je reakcija mikroprecipitacije in VDLR (njegova modifikacija).

Reakcija vezave komplementa (RSK, Wasserman, RW)

To je test, ki temelji na sposobnosti komplementa, da se veže na komplekse AG-AT. Nastali kompleks se identificira s pomočjo hemolitičnega sistema. Kardiolipinski antigen bistveno poveča občutljivost vzorca.

Občutljiva je Colmerjeva reakcija, ki sestoji iz izvajanja pri različnih temperaturnih pogojih. Tako prva faza Colmerjeve reakcije poteka pri temperaturi 20˚С pol ure, druga faza pa pri temperaturi 4-8˚С 20 ur. V tem času pride do vezave komplementa.

Pri izvajanju RSK je mogoče dobiti izrazito pozitivne rezultate. Razlog je verjetno velik titer protiteles v nerazredčenem serumu. V tem primeru se vzorci dajejo z padajočimi odmerki.

Za razlikovanje stopenj sifilisa in oceno učinkovitosti antisifilitičnega zdravljenja se določi količina protiteles v serumu.

Pozitivnost vzorca ocenimo s križci, redčenje seruma pa navedemo tudi pri Wassermanovi, Colmerjevi in ​​Cannovi reakciji.

Reakcija mikroprecipitacije

Ker je zahtevnost izvajanja navedenih preiskav velika, potem za širino pokritosti kliničnega pregleda različne skupine populacije je bila razvita pospešena metoda za serodiagnostiko sifilisa, tako imenovana ekspresna metoda - reakcija mikroprecipitacije (skrajšano MR, RMP).

Izvaja se s kardiolipinskim antigenom in pomožnimi snovmi. Njegova prednost je zbiranje periferne krvi za raziskave. To bistveno pohitri tako samo tehniko kot delo laborantov.

Slika 2 - Reakcija mikroprecipitacije (shema)

MR zahteva plazmo ali inaktiviran serum bolnika (vsebujejo protitelesa). Nato se plazma namesti v označene vdolbinice. Nato testnemu materialu dodamo kapljico kardiolipinskega antigena, premešamo in pretresemo. Posledično se v serumu okužene osebe pojavijo značilni kosmiči, ki so različno intenzivni.

To je test kakovosti. Kvantifikacija uporablja 10 razredčin seruma, ki jih damo v 10 ustrezno označenih vdolbinic. Pri kvalitativnem MR je odziv prikazan v obliki križcev (plus) ali minus, pri kvantitativnem MR je prikazan titer protiteles (1:2, 1:4 itd.).

Prisotnost kosmičev se obravnava kot pozitiven ali šibko pozitiven odziv. Pojav flokulate je možen tudi v odsotnosti bolezni, zato se končna ocena dobljenega rezultata opravi po kontrolni študiji ali drugih reakcijah (RIBT, RIF, ELISA, RPHA).

Metoda, ki jo priporoča Svetovna zdravstvena organizacija za vzpostavitev reakcije z antigenom lipoidne narave (AH), upravičeno velja za najboljšo med drugimi standardnimi netreponemskimi testi. Razvito v ZDA, Georgia v laboratoriju za spolne bolezni (Veneral Diseases Research Laboratories).

Okrajšava institucije je služila kot ime za vzorec - VDRL. VDRL je modifikacija MP. Serum bolnika s sifilisom se inaktivira in postavi na stekelce. Uporabljeni antigen je sestavljen iz kardiolipina, holesterola in lecitina v različnih odstotkih. Odgovor se zabeleži skoraj takoj.

Ob prisotnosti protiteles v serumu pride do izrazite flokulacije. Serum postane reaktiven 4 tedne po okužbi. Za oceno količine protiteles se serum predhodno eksponentno razredči.

1. 1 relativno visoka občutljivost;
2. 2 relativno visoka specifičnost;
3. 3 enostavnost izvedbe;
4. 4 nizki stroški reagentov;
5. 5 prejmete hiter odgovor.

Pomanjkljivost VDRL je relativno visoka stopnja lažno pozitivnih rezultatov.

Njihovi vzroki so vse iste bolezni, navedene zgoraj.

Treponemske teste izvajamo s specifičnimi antigeni Treponeme pallidum. So nujni in obvezni za postavitev končne diagnoze. To je reakcija imunofluorescence (RIF), reakcija indirektne hemaglutinacije (IPHA), encimski imunski test (ELISA) itd.

Po pozitiven rezultat netreponemski test (RPR, MP, VDRL), vedno je treba opraviti treponemske teste (pogosteje kombinacijo - RPHA, ELISA, RIF).

Treponemske teste je težje izvesti kot hitre teste in so dražji.

Ta reakcija (skrajšano RIF) se uporablja za diagnosticiranje sifilisa, vključno z latentnimi oblikami, ter za ponovno preverjanje pozitivnih in lažno pozitivnih vzorcev.

RIF temelji na siju označenih protiteles v kombinaciji s kompleksom antigen-protitelo pod kvarčno svetilko. Metoda se je začela uporabljati v 60. letih prejšnjega stoletja in jo je odlikovala enostavnost izvajanja in visoka specifičnost (ki je nekoliko slabša od RIBT).

Ima več modifikacij: RIF-10, RIF-200 in RIF-abs.

Najbolj občutljiv RIF pri redčenju je 10-krat, ostali pa so bolj specifični. RIF se izvaja v dveh fazah. AG se doda pacientov krvni serum. Nastane kompleks AG-AT, ki ga raziščemo v naslednji fazi. S fluorokromom označen kompleks se nato identificira z mikroskopom. Če ni opaziti sijaja, to kaže na odsotnost specifičnih protiteles v krvnem serumu.

RIF-200 je najbolj dragocen med vsemi razredčitvami. Metoda je namenjena diagnostiki različnih oblik sifilisa, predvsem latentni sifilis in ponovno preverjanje pozitivnih vzorcev.

Reakcija imobilizacije treponeme pallidum (skrajšano RIBT, RIT) je ena izmed zapletenih seroloških preiskav, ki zahteva znatne napore in finančne stroške. RIBT se uporablja vedno manj, vendar ostaja aktualen pri diagnostiki latentnega sifilisa.

Velik pomen ima pri prepoznavanju lažno pozitivnih rezultatov pri nosečnicah in temelji na imobilizaciji bakterij ob prisotnosti imobilizina – poznih protiteles.

Rezultat se oceni glede na odstotek (%) imobiliziranega treponema s posebno tabelo:

1. 1 Od 0 do 20 - negativen test.
2. 2 Od 21 do 50 - šibko pozitiven test.
3. 3 Od 50 predpozitivne reakcije.

Lažno pozitivni rezultati so možni tudi pri RIBT. Torej je možen napačen odgovor pri okužbi s tropsko trepanematozo, pa tudi pri tuberkulozi, cirozi jeter, sarkoidozi in senilnih bolnikih.

Ta krvni test za sifilis se imenuje test pasivne hemaglutinacije (skrajšano kot kri za TPHA, TPHA).

Antigen za TPHA pripravimo iz ovčjih eritrocitov, prevlečenih z delci bledih treponem (pridobljenih iz okuženih kuncev (glej sliko 4)). Za analizo se uporabi venska kri (plazma ali inaktivirani serum) bolnika.

Ko serumu bolnika s sifilisom dodamo antigen, nastane kompleks AG-AT, kar povzroči aglutinacijo rdečih krvničk. aglutinacijo subjektivno določi laborant.

Slika 3 - Shema RPHA (reakcija pasivne hemaglutinacije)

Vzorec je ocenjen kot pozitiven, ko se pojavijo aglutinati enakomerne rožnate barve. Rdeča barva oborine kaže na odlaganje eritrocitov. RPHA je zelo občutljiv in zelo specifičen.

Reakcija mikrohemaglutinacije

Je poenostavljena različica RPGA. Od zgoraj opisanega vzorca se razlikuje po tem, da ima manj antigena, razredčila in krvnega seruma za izvedbo reakcije. Vzorec je mogoče oceniti 4 ure po inkubaciji seruma. Uporablja se pri presejanju in množičnih pregledih za sifilis.

Povezani imunosorbentni test

Encimski imunski test (skrajšano ELISA) temelji na specifični reakciji antigen-protitelo. V jamice se vnese biološki material (pacientov krvni serum, cerebrospinalna tekočina), na trdni površini katerega so fiksirani antigeni blede treponeme. Testni material se inkubira, nato se protitelesa, ki se niso vezala na antigene, spere (glej sliko 5).

Identifikacija nastalega kompleksa se izvede v fazi fermentacije z uporabo imunskega seruma, označenega z encimom. pri kemijska reakcija encim obarva nastale komplekse. Intenzivnost obarvanja je odvisna od količine specifičnih protiteles v pacientovi krvi in ​​se zabeleži s spektrofotometrom.

Slika 4 - Shema ELISA (encimski imunski test)

Občutljivost ELISA je več kot 95%. Metoda se uporablja v avtomatiziranem načinu za preučevanje določenih skupin prebivalstva: darovalcev, nosečnic in drugih, za pojasnitev diagnoze v primeru pozitivnih in lažno pozitivnih netreponemskih testov.

Imunobloting

Imunobloting je zelo občutljiva metoda, modifikacija enostavne ELISA. Reakcija temelji na elektroforezi z ločevanjem antigenov bledih treponem.

Ločene imunodeterminante prenesemo na nitrocelulozni papir in prikažemo v testu ELISA. Serum nato inkubiramo in nevezana protitelesa speremo. Nastali material obdelamo z encimsko označenimi imunoglobulini (IgM ali IgG).

Klinična ocena rezultatov laboratorijske diagnoze sifilisa

V spodnji tabeli 1 smo podali možne rezultate analiz in njihovo interpretacijo. Kot lahko vidite v tabeli, je glavna vrednost pri dešifriranju celovita ocena testov.

Tabela 1 - Dešifriranje rezultatov seroloških reakcij (krvni testi za sifilis). Kliknite na tabelo za ogled

Reaktivnost testov se ocenjuje tudi s "križci":

1. 1 Največji odziv (močno pozitiven test) je označen s 4 križci.
2. 2 Pozitiven vzorec je označen s 3 križci.
3. 3 Šibko pozitivna reakcija je označena z dvema križcema.
4. 4 En križec označuje dvomljiv in negativen rezultat.
5. 5 Negativni odgovor je označen z znakom minus.

Problem optimizacije laboratorijske diagnoze sifilisa do danes ni izgubil svojega pomena. Sodobne diagnostične metode kljub želji znanstvenikov, da diagnostiko pripeljejo do čim večje občutljivosti in specifičnosti, zahtevajo kontrolni pregled in individualni pristop.

Značilnost sifilitične okužbe je pojav serorezistence, ki je ni prejel znanstvena razlaga. Diagnoza se postavi po popolnem pregledu bolnika z epidemiološkimi, kliničnimi in laboratorijskimi metodami.

V ozadju gospodarskega in tehničnega razvoja medicine napreduje tudi razvoj novih kriterijev za diagnosticiranje sifilisa. Vse to vam bo omogočilo hitro, uspešno in natančno zdravljenje bolnikov.

Nalezljive bolezni sprožijo proizvodnjo ustreznih protiteles v krvi bolne osebe. Tako to deluje imunska obramba organizem.

Določanje prisotnosti protiteles proti določenemu virusu ali bakteriji omogoča, da se naučimo o začetku bolezni, preden se pojavijo njeni glavni simptomi. Danes serološki in daje najbolj popolno sliko. Zato bomo v tem članku govorili o analizi za serološko študijo.

Kaj je serološko testiranje

Metode preučevanja bioloških materialov ljudi in živali, ki lahko odkrijejo protitelesa ali antigene v njih, ki jih telo proizvaja v obliki zaščitne reakcije v boju proti okužbam, imenujemo serološke študije. Takšne metode se uporabljajo za določitev povzročitelja okužbe, pa tudi za:

• določitev krvne skupine,
• preučevanje imunosti z določanjem stopnje njene humoralne povezave,
• določanje tkivnih antigenov.

Komu je dodeljena

Zakaj to storiti

Metodo strokovnjaki cenijo kot način za kakovostno diagnosticiranje bolezni.

• Če je bolnik v fazi bolezni, se priporoča ponavljanje študij v približno tedenskih intervalih za spremljanje učinkovitosti uporabljenega zdravljenja.
• Pogosto se serološke študije uporabljajo za ugotavljanje, kateri patogen je povzročil bolezen, potem ko jo je bolnik utrpel.

Vrste postopka

Serološke raziskovalne metode temeljijo na različnih reakcijah:

• Reakcija nevtralizacije temelji na lastnosti imunskih serumskih protiteles, da delujejo kot nevtralizacijsko sredstvo proti samim toksinom ali mikroorganizmom in preprečujejo njihov škodljiv učinek.
• Reakcija aglutinacije, ki pa je razdeljen na naslednje podvrste:
  • neposredne reakcije - uporabljajo se pri preučevanju krvnega seruma za prisotnost protiteles. Ubiti mikrobi se vržejo v preučevano sestavo in če se tvori oborina v obliki kosmičev, to pomeni, da je reakcija na to vrsto mikrobov pozitivna;
  • reakcija indirektne hemaglutinacije nastane z vnosom eritrocitov v krvni serum, na katerem so adsorbirani antigeni; ta sredstva medsebojno delujejo z isto vrsto antigenov, ki so prisotni v krvnem serumu, kar povzroči nazobčano oborino.
• Reakcija komplementa uporabljajo za odkrivanje nalezljivih bolezni. Metoda se izvaja z aktivacijo komplementa in opazovanjem potekajočih reakcij v proučevanem mediju.
• reakcija padavin izvedemo s plastenjem raztopine antigena na tekoči medij – imunski serum. Antigen, uporabljen za to metodo, je topen. Reakcija je, da se kompleks antigen-protitelo obarja; nastalo oborino imenujemo oborina.
• Reakcija z uporabo označenih antigenov in protiteles Temelji na dejstvu, da mikrobi ali tkivni antigeni, obdelani na določen način, pridobijo sposobnost oddajanja svetlobe pod vplivom ultravijoličnih žarkov. Metoda se uporablja ne samo za diagnosticiranje antigenov, ampak tudi za določanje zdravilne snovi, encimi, hormoni.

Kontraindikacije za držanje

Ker je metoda sestavljena iz preučevanja biološkega materiala pacienta, ne more negativno vplivati ​​na osebo. Zato ni kontraindikacij za uporabo.

Študija je popolnoma varna.

Kako poteka serološka študija, bomo opisali spodaj.

Indikacije za zadrževanje

Metoda se uporablja za določanje povzročitelja okužbe, vključno s takšnimi boleznimi:

• okužba s HIV,
• toksoplazmoza,
• spolno prenosljive okužbe;
• davica,
• Razpoložljivost ;
• bruceloza,
• stafilokokne okužbe,
• hepatitis.

Metoda se uporablja tudi za odkrivanje takšnih bolezni:

• opistorhoza,
• amebiaza,
• cisticerkoza,
• giardiaza,
• pljučnica.

Priprava na postopek

Posebna priprava na postopek ni potrebna. Upoštevati je treba en pogoj: odvzem krvi se opravi na prazen želodec.

Algoritem odvzema (odvzema) krvi (materiala) za serološke preiskave je opisan spodaj.

Izvajanje analize

Vzorčenje krvi se opravi iz kubitalne vene. Da bi študija delovala, krvi ne odvzamemo z brizgo, temveč z gravitacijo. Igla brez brizge se vstavi v veno in v epruveto zbere do 5 ml krvi.

Med postopkom pacient med vstavljanjem igle v veno občuti rahlo nelagodje. Naslednji koraki niso razlog za skrb.

Interpretacija rezultatov serološke preiskave krvi je opisana spodaj.

Dešifriranje rezultatov

Dobljene rezultate je treba obravnavati v povezavi s klinično sliko bolezni, preverjanjem predlagane diagnoze z uporabo več testov. To je posledica dejstva, da so študije specifične in včasih nimajo absolutne občutljivosti za nalezljive bolezni.

Cena celovite serološke preiskave krvi je opisana spodaj.

Povprečni stroški postopka

Kakšna je cena posega, je odvisno od vrste študija. Sestavljen je iz stroškov izvedbe analize in stroškov protiteles proti določenemu patogenu. Povprečni stroški postopka so 700 rubljev.

Serološke reakcije so opisane v spodnjem videu:

Serološka metoda je niz reakcij, ki temeljijo na interakcija antigen-protitelo (Ag-Ab) in je namenjen odkrivanju v krvnem serumu in drugih telesnih tekočinah protiteles proti antigenom povzročiteljev nalezljivih bolezni ali dejansko mikrobnih antigenov. Za serološko metodo je značilna visoka občutljivost in specifičnost. Večino reakcij te metode je enostavno izvesti in upoštevati, so na voljo širokemu krogu laboratorijev, praviloma so varne, ekonomične in primerne za standardizacijo. TO pomanjkljivosti Serološki metodi je mogoče pripisati: 1) posredno naravo rezultata, ko se etiologija bolezni ne ocenjuje po izolaciji patogena, temveč po odzivu (imunskega) organizma na patogen; 2) potreba po parenteralnem posegu v bolnikovo telo; 3) v večini primerov pozna diagnoza, kar je razloženo z naravno dinamiko humoralnega imunskega odziva; 4) zmožnost jemanja anamnestičnih abs (zaradi predhodne bolezni ali cepljenja) za abs do trenutne okužbe. Pri določanju mikrobnih antigenov ni 3. in 4. pomanjkljivosti, vendar je treba upoštevati posebnosti kroženja antigenov različnih mikrobov in te značilnosti povezati z možnostjo odvzema materiala za raziskave.

Faze serološke metode:

1) jemanje raziskovalni materiali. V večini primerov je material krvni serum. Pridobiva se po nastanku krvnega strdka, kri je treba odvzeti v strogo aseptičnih pogojih po standardni metodi,

2) izbira serološkega testa za določen primer je odvisna od namena študije, domnevne bolezni, faze bolezni, materiala za študijo, občutljivosti reakcije in zmogljivosti določenega laboratorija. Aglutinacijske reakcije se uporabljajo za odkrivanje Abs in Ags ( RA), pasivna hemaglutinacija ( RPGA)), imunofluorescenca (GREBEN), zaviranje hemaglutinacije ( RTGA), padavine, flokulacija, reakcija vezave komplementa (RCC) itd.

3) postavitev serološke reakcije,

4) registracija serološke reakcije za določitev prisotnosti seroloških markerjev okužbe.

Za različne serološke reakcije je značilno več splošne značilnosti:

1) ker so vse serološke reakcije reakcije interakcije Ab in Ag, je v vseh primerih za ugotavljanje prisotnosti Ab v preskusnem substratu niz znanih standardnih korpuskularnih ali topnih Ag, imenovanih diagnostiki. V zameno, da bi ugotovili prisotnost Ag, niz imunski diagnostični serumi,

2) interakcija Ag in Ab poteka samo v prisotnosti elektrolita, ki se običajno uporablja kot izotonična raztopina natrijevega klorida ali puferskih mešanic, pH sistema mora biti približno 7,

3) za nastanek kompleksa Ag-At je potrebna inkubacijska doba pri posebnih temperaturnih pogojih (od +4 °C do 37 °C). Tvorba specifičnega imunskega kompleksa se pojavi hitro; s prostim očesom viden pojav (aglutinacija, liza itd.) - počasi, po nekaj urah ali celo dneh,

4) obe komponenti serološke reakcije (antigen in protitelesa) morata biti prisotni v enakovrednem razmerju. Presežek katere koli komponente blokira nastanek kompleksa Ag-Ab in prispeva k lažno negativnim rezultatom.

Obračunavanje seroloških reakcij se izvaja vizualno, včasih s povečevalnim steklom. Bistvo upoštevanja serološke reakcije je zmanjšano na ugotavljanje pojava vezave Ag in Ab s tvorbo kompleksa Ag-Ab. Vizualno nastanek kompleksa Ag-At spremljata dva glavna pojava - aglutinacija in precipitacija. Razlike med njimi so določene z značilnostmi antigenov in protiteles, specifičnih zanje. Hkrati so med mikrobnimi antigeni tudi tisti, ki inducirajo sintezo neobarjajočih, tvorbe kompleksa Ag-Ab v tem primeru ne spremlja niti pojav aglutinacije niti pojav obarjanja, detekcija pa tvorbe kompleksa Ag-Ab zahteva označevanje diagnostične komponente reakcije s posebnimi oznakami ali prenos diagnostičnega antigena v drugo agregacijsko stanje.

Pri ocenjevanju reakcije se uporabljajo 3 glavna merila: 1) prisotnost in intenzivnost reakcije (v plusih itd.); 2) diagnostični titer, 3) povečanje titra protiteles med potekom bolezni za 4-krat ali več. Prisotnost reakcije ugotavljamo z vizualnimi pojavi ali z vezavo imunokemičnega markerja. Za oceno intenzivnosti serološke reakcije se uporablja načelo 4 "+" (tabela 7).

Tabela 7

Sistem za ocenjevanje seroloških reakcij s 4 "+" za reakcije aglutinacije in precipitacije

Za kvantificiranje rezultatov serološke reakcije se uporablja koncept titra protiteles ali antigena. Za določitev titra At (ali titra Ag) je potrebna serološka reakcija s pripravo niza razredčin krvnega seruma ali drugega materiala (titer). Pri pripravi razredčin krvnega seruma se uporablja raztopina elektrolitov (najpogosteje izotonična raztopina natrijevega klorida). Stopnja redčenja (titracije) je določena z razmerjem volumna raztopine elektrolita in volumna krvnega seruma. Na primer, pri serijskih razredčitvah z 2-kratnim korakom se enake količine raztopine elektrolita in krvnega seruma zmešajo v 1. epruveti, s 5-kratnim korakom se 1 volumen seruma doda 4 volumskim delom elektrolita. raztopino, s korakom 10-krat - na 9 volumnov raztopine elektrolitov dodamo 1 volumen krvnega seruma (tabela 8).