Coombsov test– test za odkrivanje protiteles, pritrjenih na površino ali raztopljenih v plazmi. Uporablja se za odkrivanje imunizacije in protiteles proti rdečim krvnim celicam. Drugi naslov antiglobulinski test. Lahko je neposreden ali posreden.

pri direktni antiglobulinski test zazna protitelesa, fiksirana na površini rdečih krvničk. Izvaja se ob sumu na druge avtoimunske bolezni, po jemanju zdravil (metildopa, penicilin, kinin) itd.

Rdeče krvne celice so bile senzibilizirane in vivo – protitelesa so nanje že trdno pritrjena, dodatek antiglobulinskega seruma (anti-IgG) pa povzroči, da se senzibilizirane celice zlepijo, kar je vidno s prostim očesom.

Indirektni Coombsov test odkriva protitelesa proti eritrocitom v krvni plazmi, izvaja se pred transfuzijo krvi in ​​med.

Protitelesa proti eritrocitom so vrsta avtoprotiteles, tj. protiteles proti lastnim tkivom. Avtoprotitelesa se pojavijo, ko se imunski sistem nenormalno odzove na določena zdravila, kot so visoki odmerki penicilina.

Rdeče krvničke na svoji površini vsebujejo različne kemijske strukture(glikolipidi, saharidi, glikoproteini in proteini), v medicini imenovani antigeni. Človek od svojih staršev podeduje določen zemljevid antigenov na vsaki rdeči krvni celici.

Antigene združimo v skupine in nato kri razdelimo v več skupin – po sistemu AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najbolj znana in pomembna pri delu zdravnika sta AB0 in Rh faktor (Rh).

sistem AB0

Rh status osebe določa prisotnost teh antigenov. Posebej pomemben antigen eritrocitov je antigen D. Če je prisoten, potem govorijo o Rh pozitivna kri RhD, in če ga ni - oh Rh negativni Rhd.

Če se ustrezno protitelo veže na eritrocitne antigene, se eritrocit uniči – hemoliza.

Indikacije

Glavna indikacija za neposrednoantiglobulinski test- sum na hemolitično anemijo. Najpogosteje se izvaja pri primarnih avtoimunskih boleznih. hemolitična anemija, hemoliza pri revmatičnih, tumorskih, infekcijskih boleznih, hemoliza povzročena z zdravili.

Če se anemija pojavi več dni ali mesecev po transfuziji krvi ali ob dolgotrajni zlatenici pri novorojenčku, opravimo tudi direktni Coombsov test.

posrednoopravi se antiglobulinski test pred transfuzijo krvi in ​​med nosečnostjo Rh negativne ženske.

Avtoimunska hemolitična anemija

Avtoimunska hemolitična anemija (primarna)– klasična avtoimunska bolezen neznanih vzrokov. Interakcija znotraj imunskega sistema je motena, kar vodi v dojemanje lastnih rdečih krvničk kot tujkov. V bezgavkah se sintetizirajo protitelesa razreda IgG (reagirajo pri t 37 °C) in/ali IgM (pri t 40 °C), ki, ko se pritrdijo na površino eritrocita, sprožijo številne encime (t. sistem komplementa) in »preluknjajo« steno eritrocita, kar vodi do njegovega uničenja – hemolize.

Prvi simptomi so posledica uničenja rdečih krvnih celic in zmanjšanja hemoglobina. Med njimi:

• utrujenost, splošna šibkost, razdražljivost
• dispneja
• bolečine v trebuhu in prsih, slabost
• temna barva urina
• bolečine v hrbtu
• ikterično obarvanje kože in sluznic
• zmanjšanje števila rdečih krvničk in

Pozitiven rezultat neposredno Coombsovi testi 100% potrjuje diagnozo avtoimunske hemolitične anemije in dokazuje njen avtoimunski izvor. Hkrati negativni rezultat ne omogoča odstranitve diagnoze.

Sekundarna hemolitična anemija

Sekundarna avtoimunska hemolitična anemija in pozitiven test Coombs se lahko pojavi pri naslednjih boleznih:

• Evansov sindrom
• okužba s pljučnico

Pozitiven antiglobulinski test pri teh boleznih je eden od simptomov in ne merilo za diagnozo.

Hemolitična bolezen novorojenčka

Vzrok hemolitična bolezen novorojenčki - nezdružljivost krvne skupine matere in ploda, v večini primerov po sistemu Rh, v posameznih primerih - po sistemu AB0, kazuistično - po drugih antigenih.

Rh konflikt se razvije, če plod Rh-negativne ženske podeduje Rh-pozitivno kri od očeta.

Bolezen se pri novorojenčku razvije le, če je mati že razvila protitelesa proti ustreznim antigenom, kar se zgodi po prejšnjih nosečnostih, splavih in transfuziji nezdružljive krvi. večina pogost razlog sprožitev sinteze protiteles proti antigenom membrane eritrocitov - porod (feto-maternalna krvavitev). Prvi porod praviloma poteka brez zapletov, naslednji pa so obremenjeni s hemolitično boleznijo novorojenčka v prvih dneh po rojstvu.

Simptomi hemolitične bolezni novorojenčka:

• porumenelost kože
• , in sluznice
• povečana jetra in vranica
• težave z dihanjem
• otekanje celega telesa
• vzbujanje in postopna depresija centralnega živčnega sistema

Anemija po transfuziji krvi

Indirektni Coombsov test pred transfuzijo krvi za oceno združljivosti in neposredni Coombsov test - po njem, če obstaja sum na posttransfuzijsko hemolizo, tj. v prisotnosti simptomov, kot so zvišana telesna temperatura, solzenje (preberite spodaj). Namen analize je odkriti protitelesa proti transfuziranim rdečim krvnim celicam, ki so se vezala na rdeče krvne celice prejemnika in so vzrok za potransfuzijsko hemolizo ter prezgodnjo odstranitev rdečih krvničk darovalca iz krvnega obtoka. prejemnik (tisti, ki je prejel kri).

Simptomi:

• zvišanje telesne temperature
• kožni izpuščaj
• bolečine v hrbtu
• rdeča
• slabost
• omotica

Dekodiranje

Treba je spomniti, da so osnovna pravila za dešifriranje neposrednih in posrednih antiglobulinskih testov enaka. Razlika je le v lokaciji protiteles – v krvi ali na rdečih krvničkah.

• če direktni Coombsov test je negativen– to pomeni, da protitelo ne »sedi« na rdeče krvne celice in je treba nadalje iskati vzrok simptomov ter opraviti indirektni Coombsov test
• če se odkrije pozitiven rezultat Coombsovega testa po transfuziji krvi, okužbah, zdravilih - pozitivnost traja do 3 mesece (življenjska doba rdečih krvničk je 120 dni - 3 mesece)
• pozitiven rezultat antiglobulinskega testa za avtoimunsko bolezen traja mesece ali celo leta

Norma

• direktni Coombsov test - negativen
• indirektni Coombsov test - negativen

Kvalitativno pozitiven rezultat se meri v številu plusov od ena do štiri (+, ++, +++, ++++), kvantitativno pa v digitalni obliki - 1:16, 1:256 itd.

ja Vaš zdravnik bi vsekakor moral vedeti, da ste prejeli transfuzijo krvi, saj to zdaj vpliva na pravilno razlago rezultatov testov. Pri prejemu tuje (čeprav večkrat testirane) krvi vedno obstaja možnost, da vaše telo razvije protitelesa proti transfuzirani krvi. Ta protitelesa bodo zagotovila slab vpliv na zdravstveno stanje. Pri naslednjih transfuzijah krvi mora zdravnik vedeti, da ste transfuzijo že prejeli, kar pomeni, da je bil čas za sintezo protiteles. Za nosečnice je ta podatek še kako pomemben.

3. Ali bodo vsi otroci bolni, če pride do neskladja Rh faktorja med materjo in otrokom?

Odvisno od tega, ali je otrok Rh pozitiven ali negativen (RhD). Nosilci krvnih skupin I, II, III in IV so lahko Rh pozitivni ali negativni. V primeru, da je mati Rh negativna, otrok pa Rh pozitiven, bodo protitelesa nastala že ob prvi nosečnosti, vendar šele po prvem porodu (ali prekinitvi nosečnosti) pride do neposrednega stika med krvjo matere in matere. otrok. Hemolitični učinek protiteles bo uresničen šele med drugim in naslednjimi porodi, kar bo povzročilo hemolitično bolezen pri novorojenčku.

Vsako žensko z negativnim Rh faktorjem je treba skrbno pregledati med nosečnostjo in po porodu preventivno zdravljenje za preprečitev pojava protiteles in nadaljnjih zapletov.

4. Ali je med nosečnostjo treba poznati krvno skupino mojega moža, preden opravim Coombsov test?

Med nosečnostjo morate ne samo poznati, ampak tudi preveriti krvno skupino otrokovega biološkega očeta.

podatki

• prvič predlagan v Cambridgeu leta 1945
• prag občutljivosti - vsaj 300 fiksiranih molekul protiteles na eni rdeči krvni celici
• število protiteles, ki sprožijo hemolizo - individualno za vsako osebo (od 16-30 do 300)
• dinamika drugih laboratorijskih kazalcev hemolitične anemije (hemoglobin, bilirubin, retikulociti) se lahko normalizira, Coombsov test pa ostane na enaki ravni

Coombsov test je nazadnje spremenil: 16. marec 2018 avtor Marija Bodjan

Coombs, Morant, Reis leta 1945 so predlagali antiglobulinski test, namenjen odkrivanju nepopolnih protiteles proti eritrocitom, kasneje pa so ga poimenovali Coombsov test. Bistvo ta metoda je, da antiglobulinski serum, ki vsebuje protitelesa proti človeškim imunoglobulinom, pri reakciji z rdečimi krvničkami, senzibiliziranimi z nepopolnimi protitelesi, povzroči njihovo aglutinacijo.

Glede na to, ali so protitelesa fiksirana na površini rdečih krvnih celic ali so v prostem stanju v krvni plazmi, se uporablja neposredni ali posredni Coombsov test.

Neposreden Coombsov test se izvede v primerih, ko obstaja razlog za domnevo, da so rdeče krvne celice, ki se proučujejo, že in vivo so bili senzibilizirani z ustreznimi protitelesi, tj. prva faza reakcije - fiksacija protiteles na površini rdečih krvničk - se je zgodila v telesu in kasnejši dodatek antiglobulinskega seruma povzroči aglutinacijo senzibiliziranih celic.

Z indirektnim Coombsovim testom se odkrijejo nepopolna protitelesa v testnem serumu. V tem primeru reakcija poteka v dveh fazah. Prva faza je inkubacija testnih eritrocitov s testnim serumom, pri kateri se protitelesa v vzorcu testnega seruma fiksirajo na površini eritrocitov. Drugi korak je dodajanje antiglobulinskega seruma.

Do sedaj se Coombsov test pogosto uporablja v laboratorijski praksi za diagnozo imunopatoloških stanj, zlasti pri avtoimunski hemolitični anemiji, za katero je značilno uničenje rdečih krvnih celic zaradi vezave celične membrane na protitelesa in (ali) sestavine sistem komplementa. Uporablja se za ugotavljanje prisotnosti Ig G na membrani eritrocitov (običajno Ig G1 in Ig G3), ki lahko aktivirajo komplement, včasih pa tudi komplement (C3d). Vendar pa je v akutnem obdobju bolezni zaradi uničenja rdečih krvnih celic, na katerih je veliko število protiteles, s hemolitično krizo, pa tudi z nezadostno količino protiteles med kroničnim potekom bolezni, lahko opazimo negativen neposredni Coombsov test.

Poudariti je treba, da posredni Coombsov test ostaja najboljša metoda individualna izbira transfuzijskih medijev, saj vam omogoča najbolj natančno določitev individualne združljivosti darovalca in prejemnika z eritrocitnimi antigeni.

Pri pregledu vseh prejemnikov organov in tkiv v predtransplantacijskem obdobju in prejemnikov hematopoetskih matičnih celic tudi po presaditvi je priporočljiv dodaten direktni antiglobulinski test na prisotnost avtoprotiteles.

Poleg imunohematologije in transfuziologije se antiglobulinski testi pogosto uporabljajo pri diagnostiki številnih patoloških stanj: hematoloških bolezni, vključno z limfoproliferativnimi boleznimi, sistemske bolezni vezivnega tkiva, Sjogrenova bolezen, kronični aktivni hepatitis itd.

Coombsov test se aktivno uporablja v medicinski genetiki in sodni medicini za določanje površinskih eritrocitnih antigenov.

Coombsov test je precej delovno intenzivna raziskovalna metoda, ki zahteva posebno skrb pri izvajanju. Pri uporabi je nekaj težav, povezanih zlasti z razlago šibko pozitivnih reakcij. Znano je, da so lahko lažne šibko pozitivne ali negativne reakcije pri izvajanju Coombsovih testov posledica nezadostno učinkovitega pranja rdečih krvnih celic, nevtralizacije antiglobulinskega reagenta s sledovi seruma, pa tudi stika z nemastno površino, na kateri je antiglobulin. se lahko popravi in ​​s tem izgubi svojo aktivnost. Druga pomanjkljivost Coombsovega testa je nestabilnost antiglobulinskega reagenta, katerega priprava in shranjevanje ima določene značilnosti, zaradi česar je tudi težko kvantificirati hemaglutinacijsko reakcijo z antiglobulinskim serumom.

Poleg tega so študije, ki so jih izvedli A. Holburn, D. Voak et al. , so pokazali, da je lahko vzrok za lažno negativne rezultate čezmerno tresenje pri resuspendiranju suspenzije rdečih krvnih celic. Napačne rezultate pri izvajanju antiglobulinskih testov lahko povzroči tudi prisotnost v antiglobulinskem reagentu primesi protikomplementarnih protiteles, zlasti proti komponentam komplementa C3d-, C3c-, C4c- in C4d-, ki so adsorbirana na površini testirajte rdeče krvne celice med inkubacijo in ustvarite videz pozitivnega rezultata.

Te pomanjkljivosti je mogoče enostavno odpraviti s temeljitim pranjem proučevanih vzorcev in spremljanjem reakcijskih pogojev.

V zadnjem desetletju je bila uporabljena izotonična fiziološka raztopina z nizko ionsko močjo (LISS) za skrajšanje časa, potrebnega za izvedbo indirektnega Coombsovega testa, in povečanje njegove občutljivosti.

Nesporna prednost antiglobulinskih testov je po mnenju številnih avtorjev njihova visoka občutljivost, ki bistveno presega njihovo ločljivost. alternativne metode testi, ki se uporabljajo za odkrivanje neaglutinacijskih protiteles.

Primerjali smo ločljivost metod za preučevanje krvnih serumov na prisotnost nepopolnih protiteles s poliglucinom, želatino in antiglobulinskim serumom. Med študijo so spremljali titre nepopolnih protiteles proti D v 140 vzorcih krvnega seruma izoimunskih darovalcev z uporabo želatinskih, poliglucinskih in indirektnih antiglobulinskih testov. Oblikovanje teh metod je bilo izvedeno v skladu s splošno sprejetimi metodami.

Ugotovljeno je bilo, da so metode za ugotavljanje senzibilizacije eritrocitov s protitelesi anti-D po svoji ločljivosti razvrščene takole: najbolj občutljiv je indirektni Coombsov test, nato želatinski test in najmanj informativen poliglucinski test. Rezultati, dobljeni v tej seriji poskusov, popolnoma ustrezajo literaturnim podatkom, kar nam omogoča sklepati, da visoka stopnja občutljivost Coombsovih testov, ki omogoča z visoko stopnjo gotovosti ugotavljanje prisotnosti protiteles proti eritrocitom v telesu, ki ne povzročajo aglutinacije rdečih krvnih celic.

Vendar pa pri izvajanju Coombsovih testov v praksi obstajajo primeri, ko nepopolnih protiteles ne odkrijemo, čeprav klinična slika bolezni ali predhodna imunizacija kaže na njihovo morebitno prisotnost. V takšnih primerih se lahko domneva, da je količina protiteles nezadostna, da bi jih lahko oborila protitelesa antiglobulinskega seruma.

To ugotovitev smo potrdili z lastnim eksperimentom, v katerem smo z metodo analizne mikroelektroforeze celic ugotovili prisotnost protiteles anti-D na testnih eritrocitih, ki jih posredni Coombsov test ni zaznal. V tej seriji poskusov je bil antiglobulinski serum dodan eritrocitom, predhodno inkubiranim s serumi, pridobljenimi iz krvi imuniziranih darovalcev med obdobjem antitelesogeneze v teku, tj. v obdobju, ko v njih z znanimi metodami, vključno s Coombsovim testom, niso odkrili protiteles.

V izvedenih študijah so bili zagotovljeni statistični dokazi o prisotnosti nepopolnih protiteles na površini rdečih krvničk. pomembna sprememba velikost elektroforetske mobilnosti senzibiliziranih rdečih krvničk po dodatku antiglobulinskega seruma. Opozoriti je treba, da so protitelesa anti-D naknadno določili pri vseh imuniziranih darovalcih z indirektnim Coombsovim testom v krvnem serumu.

Gillerand et al. je tudi pokazalo, da je za antiglobulinske teste značilen določen prag občutljivosti: pozitiven rezultat je zabeležen le, če je na površini ene rdeče krvne celice zabeleženih najmanj 500 molekul Ig G.

Poleg tega literatura ponuja dokaze, da je morebiten negativen rezultat Coombsovega testa lahko povezan z nizko afiniteto protiteles, ki senzibilizirajo rdeče krvne celice, zaradi česar se med postopkom pranja zlahka eluirajo s površine rdečih krvnih celic. .

Ob upoštevanju zgoraj navedenega lahko sklepamo, da v nekaterih primerih negativen rezultat Coombsovega testa še ni dokaz odsotnosti protiteles, pritrjenih na površini rdečih krvničk.

Znano je, da so Coombsove reakcije zelo specifične in lahko zaznajo večino vrst nepopolnih protiteles. Kot pa kažejo nekateri eksperimentalni podatki, so lahko antiglobulinski testi pozitivni tudi v neimunoloških stanjih. E. Muirhead et al. drugi dan po dajanju fenilhidrazina psom so opazili pozitiven Coombsov test. Tako hiter pojav pozitivne reakcije nasprotuje njeni imunološki naravi in ​​je bolj povezan z nespecifično adsorpcijo beljakovin na površini eritrocitov.

M. Williams et al. ugotovili, da lahko klavulanska kislina povzroči tudi pozitivno reakcijo, ki je po mnenju avtorjev povezana z nespecifično adsorpcijo plazemskih proteinov na površini eritrocitov. Podoben učinek so opazili pri zdravljenju s cefalosporinskimi antibiotiki.

Avtorji zgornjih študij poudarjajo neimunološko naravo pozitivnih rezultatov Coombsovih testov in vztrajajo, da so te snovi sposobne povzročiti modifikacijo membran rdečih krvnih celic, zaradi česar lahko rdeče krvne celice adsorbirajo beljakovine (zlasti albumin), ki so običajno prisotni v krvni plazmi in nimajo lastnosti protiteles. Poleg tega je možno, da ksenobiotik, adsorbiran na površini celice, služi kot povezava med celično membrano in plazemskimi proteini.

Za pravilno razlago rezultatov antiglobulinskih testov je treba upoštevati tudi kvantitativno razmerje med mladimi in zrelimi eritrociti v periferni krvi. Ugotovljeno je bilo, da lahko retikulocite, izolirane iz telesa v obdobju povečane regeneracije eritrona, aglutinira antiglobulinski serum.

Pozitiven rezultat neposrednega antiglobulinskega testa pojavlja z različnimi patološka stanja, ki ga spremljajo motnje imunskega sistema, vnetni procesi, ki vodijo do nespecifične adsorpcije protiteles različnih specifičnosti na membranah eritrocitov. To nakazuje, da molekule Ig G ne interagirajo s specifičnimi antigeni eritrocitov, ampak so le pritrjene na površini proučevanih celic.

Upoštevati je treba, da je pri izvajanju Coombsovega testa v primerih bolezni, za katere je značilen razvoj disproteinemije ali pojav paraproteinov, pozitiven rezultat posledica prisotnosti beljakovin na površini eritrocitov, ki nimajo lastnosti protiteles, kar kaže tudi na pomanjkanje specifičnosti antiglobulinskih testov glede na naravo proteina, odkritega z njihovo pomočjo.

Tako, kot so pokazale številne študije, pozitivni rezultati neposrednih in posrednih antiglobulinskih testov niso absoluten dokaz prisotnosti protiteles, saj pozitivne reakcije lahko opazimo tudi pri različnih patoloških stanjih, ki niso povezana z izosenzibilizacijo ali avtosenzibilizacijo telesa. Zato le primerjava rezultatov več imunoseroloških metod z klinična slika bolezni nam omogoča, da v celoti ocenimo razvoj patološkega procesa.

Pozitivni indirektni antiglobulinski test z negativnim neposrednim testom običajno kaže na prisotnost prostih aloprotiteles v testnem serumu, povezanih s prejšnjimi transfuzijami krvi ali nosečnostjo.

Coombsov test je med poslabšanjem paroksizmalne nočne hemoglobinurije pogosto pozitiven; pozitiven Coombsov test z anti-C3 in anti-C3dg je marker bolezni hladnega aglutinina.

V primerih, ko obstaja veliko tveganje za razvoj hemolitične bolezni novorojenčka, velik pomen Za postavitev diagnoze (najpogosteje med nosečnostjo) in po potrebi dinamičnega spremljanja pojava in spremembe titra protiteles so na voljo rezultati neposrednih in posrednih antiglobulinskih testov. Najpogosteje je hemolitična bolezen novorojenčkov povezana z nezdružljivostjo matere in ploda za antigen D, manj pogosto za antigene sistema ABO in še redkeje za druge antigene (C, c, K itd.). Med tem procesom nastanejo protitelesa La, ki so praviloma nepopolna protitelesa razreda Ig G, so jasno odkrita v indirektnem antiglobulinskem testu. Pri tej bolezni sta zelo pomembna pravilno ugotovljen titer in specifičnost ugotovljenih protiteles, saj obstaja določena korelacija med nivojem protiteles proti eritrocitom v krvi nosečnice in možna prognoza resnost hemolitične bolezni.

Potreben je tudi posredni Coombsov test klinična praksa da bi zagotovili varno transfuzijsko zdravljenje. Njegovo izvajanje je obvezna sestavina imunohematoloških študij darovalcev in različnih kategorij prejemnikov, pa tudi rutinskih pregledov vseh bolnikov v zdravstvenih ustanovah, ki lahko potrebujejo transfuzijo krvi in ​​njenih komponent.

Indirektni antiglobulinski test se uporablja v naslednjih primerih:

Za natančnejšo določitev Rh pripadnosti (antigen D) v primeru nejasnih rezultatov določanja Rh faktorja z drugimi metodami (poliglukin, želatina itd.);

Za prepoznavanje šibkih eritrocitnih antigenov (sistemi Kell, Duffy, Kidd, Lewis itd.) in protiteles proti tem antigenom;

Za odkrivanje in identifikacijo aloimunskih antieritrocitnih protiteles, vključno s protitelesi, ki povzročajo hemolitične posttransfuzijske reakcije;

Ugotavljanje prisotnosti imunskih protiteles sistema AB0 med transfuzijskimi hemolitičnimi zapleti;

Kot test združljivosti za individualno izbiro transfuzirane krvi in ​​njenih sestavin.

Tako je Coombsov test pomemben diagnostični test, ki se uporablja na različnih področjih medicine (hematologija, porodništvo, revmatologija, transfuziologija, klinična in laboratorijska diagnostika itd.). Poznavanje posebnosti izvajanja Coombsovega testa bo pomagalo povečati zanesljivost dobljenih rezultatov in prispevalo k pravilni interpretaciji laboratorijskih podatkov.

Literatura

1. Protitelesa. Metode / ur. D. Katie. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadžijev A.B.. // Transfuzijsko zdravljenje anemije: učbenik. priročnik za zdravnike. - M.: Prakt. Medicina, 2005. - Str. 105-106.

3. Volkova O.Y., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - št. 2. — Str. 39—62.

4. Donskov S.I.// Krvne skupine sistema Rhesus: teorija in praksa. - M.: VINITI RAS, 2005. - Str. 180-186, 195.

5.Imunoserologija (regulativni dokumenti) / comp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAS, 1998.

6.Študija krvnega sistema v klinični praksi / ed. G.I. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. O mehanizmu eritrodiereze in eritropoeze med akutnim posthemoragična anemija: avtorski povzetek. dis. ...kand. med. Sci. - Minsk, 1968.

8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Osnove diagnoze, preprečevanja in zdravljenja anemije. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - Str. 204-209.

9. Čumakova E.D.. // Dejanske težave hematologija in transfuziologija: zbornik VI kongresa hematologov in transfuziologov Republike Belorusije, Minsk, 24. in 25. maja 2007 / ur. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapneva. - Minsk: Republiški znanstveni in praktični center za hematologijo in transfuziologijo, 2007. - Str. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - Letn. 2. - Str. 15.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Letn. 32. - Str. 1014-1018.

12. Holburn A.M.. Kontrola kakovosti. Metode v hematologiji/ur. I. Cavill. - Edinburgh: Churchill Livingstone, 1982. - Zv. 4. - Str. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - letn. 175, N 8. - Str. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Letn. 63 (dodatek 7). - Str. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Letn. 63 (dodatek 7). — Str. 716—718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Nova angl. J. Med. —1976. - Vol. 277. - Str. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. med. —1954. - Vol. 44. - Str. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prak. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., MooreB. et al. //Biotests Bull. - 1986. - Letn. 1. - Str. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Stroji za pranje celic za antiglobulinske teste. Ponovljeno testiranje - nova metoda, ki dokazuje neučinkovitost enega pogosto uporabljenega stroja - Sorvall CW1-AF2: poročilo tehničnemu oddelku DHSS, februar 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. et al. //Protimikrobna sredstva in kemoterapija. —1985. - Str. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - letn. 174, N 3. - Str. 305-307.

Medicinske novice. - 2008. - št. 3. - strani 33-36.

Pozor! Članek je namenjen zdravnikom specialistom. Ponatis tega članka ali njegovih fragmentov na internetu brez hiperpovezave do vira se šteje za kršitev avtorskih pravic.

- študija, ki pomaga določiti vsebnost nepopolnih protiteles proti eritrocitom v krvi. Ta antiglobulinski test vam omogoča odkrivanje protiteles pri nosečnicah.

Poleg tega vam omogoča, da začetnih fazah diagnosticiranje hemolitične anemije pri novorojenčkih z Rh konfliktom. To pomaga preprečiti uničenje rdečih krvnih celic, potrebnih za normalno tvorbo krvi. Ta test je leta 1945 ustvaril Robert Coombs, zato je dobil tako ime.

Coombsov test je vsestranski test, ki omogoča pravočasno diagnosticiranje hematopoetskih motenj pri odraslih in otrocih.

Obstajajo naslednje vrste takih testov:

1. Neposredni Coombsov test– omogoča določanje protiteles, ki se nahajajo na površini rdečih krvnih celic. Običajno je takšna študija predpisana za sum na hemolizo, avtoimunsko hemolitično anemijo ali druge avtoimunske bolezni. Poleg tega se izvaja po zdravljenje z zdravili zdravila na osnovi kinina, penicilina ali metildope ali po transfuziji krvi. Za natančnejše rezultate morate popolnoma prenehati jemati zdravila vsaj 1 teden pred študijo.
2. Indirektni Coombsov test– test, ki se lahko uporablja za odkrivanje protiteles proti eritrocitom v plazmi. Običajno se izvaja med nosečnostjo in pred transfuzijo krvi. Protitelesa proti eritrocitom se pojavijo v človekovi krvi med reaktivnim imunskim sistemom ali kot reakcija na določena zdravila. Za natančnejšo študijo se izvede več vzorčenj hkrati z intervalom 2 ur.

Indikacije za uporabo

Coombsov test se izvaja le, če obstajajo resne indikacije. To je drag in dolgotrajen študij, ki je specifičen test.

Običajno se naslednje situacije štejejo za indikacije za njegovo izvajanje:

1. Med transfuzijo krvi. Test vam omogoča, da ugotovite, ali se bo kri prejemnika ukoreninila v človeškem telesu in ali je darovanje možno. V tem primeru je treba pregledati material tako darovalca kot prejemnika. Pomembno je določiti naravo protiteles, ker če so nezdružljiva v telesu v ozadju konflikta Rh, imunski sistem. To vodi do razvoja hude bolezni, in v v redkih primerih celo smrt.
2. prej kirurški posegi kadar obstaja nevarnost izgube krvi. To se naredi tako, da lahko zdravnik takoj uvede ustrezno kri za obnovo telesa.
3. Za odkrivanje Rh preobčutljivosti. Rhesus je specifičen antigen, ki se pojavi v telesu vsake ženske med nosečnostjo. Če ima mati pozitiven Rh in oče negativen ali obratno, za otroka ni odvisnosti - lahko podeduje kogar koli. Če otrok prejme nasprotni rezus od matere, obstaja veliko tveganje za preobčutljivost. Za ta pojav je značilno mešanje krvi matere in otroka. To se lahko zgodi tako med nosečnostjo kot med porodom.

Če pride do Rhesus konflikta v telesu nosečnice, potem materin imunski sistem začne zaznavati njen plod kot tuje telo. Zaradi tega obstaja velika nevarnost, da ga bo začel napadati.

Zaradi takšnih dejanj lahko otrok razvije resne patologije. Najpogosteje se pojavi eritroblastoza - pojav, pri katerem otrokovo telo ne more proizvesti zadostnega števila rdečih krvnih celic.

Poleg tega lahko zaradi Rh konflikta pride do smrti ploda v maternici ali takoj po rojstvu. S pravilnim pristopom k zdravljenju se je tako resnim posledicam zlahka izogniti.

Odstopanja od norme

pri pozitiven rezultat Na podlagi Coombsove reakcije zdravnik sklepa, da so v krvnem serumu protitelesa proti eritrocitom. To pomeni, da kri darovalca morda ni združljiva s krvjo bolnika.

Če je v telesu nosečnice z Rh-negativno krvjo diagnosticiran pozitiven rezultat, potem njeno telo vsebuje protitelesa proti krvi ploda.

To kaže na Rh konflikt, ki zahteva izjemno previden pristop k vodenju nosečnosti s strani zdravnika, pa tudi upoštevanje vseh navodil in priporočil ženske.

Če so protitelesa prisotna v krvi otroka, se diagnosticira hemolitična bolezen novorojenčka. V tem primeru se izvede ponovna študija, da se ugotovi, ali pride do povečanja ravni protiteles v krvi bodoče matere ali ne.

Možni zapleti zaradi Coombsovega testa

Coombsov test je dokaj varen test, ki omogoča diagnosticiranje številnih avtoimunske bolezni. Običajno redko povzroča zaplete negativne posledice povezana z odvzemom krvi.

To so:

• Krvavitve ali krvavitve pod kožo
• Omotica in omedlevica
• Nalezljiva okužba

7 295

– antiglobulinski test, namenjen odkrivanju v Rh-negativni krvi nepopolnih antieritrocitnih protiteles proti Rh faktorju - specifičnemu proteinu, ki se nahaja na površini eritrocitov Rh-pozitivne krvi. Obstajata dve vrsti tega testa: neposredno - odkrivanje protiteles na površini rdečih krvničk, posredno - odkrivanje protiteles v krvnem serumu. Neposredno testiranje se izvaja pri diagnostiki in spremljanju zdravljenja krvnih bolezni: hemolitične anemije, hemolitične bolezni novorojenčkov in drugih. Posredni test se izvede za oceno združljivosti krvi darovalca in prejemnika med transfuzijo ter za določitev prisotnosti in tveganja Rh konflikta pri načrtovanju in vodenju nosečnosti. Material za Coombsov test je venska kri, študija se izvaja z metodami, ki temeljijo na reakciji aglutinacije. Običajno sta oba testa negativna. Analiza je končana v enem dnevu.

Coombsov test – klinično preskušanje Rh-negativna kri, namenjena odkrivanju protiteles proti Rh faktorju. Test se uporablja za ugotavljanje tveganja za razvoj Rh konflikta in hemolitičnih reakcij. Pri vsaki osebi površina rdečih krvnih celic vsebuje določen niz antigenov ali aglutinogenov - spojin različnih narav, katerih prisotnost ali odsotnost se uporablja za določanje krvne skupine in Rh faktorja. Obstaja veliko vrst antigenov, vključno z zdravniška praksa Največji praktični pomen imata aglutinogena A in B, ki določata krvno skupino, ter aglutinogen D, Rh faktor. S pozitivnim Rh faktorjem se antigeni D odkrijejo na zunanji membrani eritrocitov, z negativnim faktorjem pa ne.

Coombsov test, imenovan tudi antiglobulinski test, je namenjen odkrivanju nepopolnih antieritrocitnih protiteles proti sistemu Rh faktorja v krvi. Protitelesa proti faktorju Rh so specifični imunoglobulini, ki nastanejo v Rh-negativni krvi, ko vanjo vstopijo rdeče krvne celice z aglutinogeni D. To se lahko zgodi pri mešanju krvi ploda in nosečnice, med transfuzijo krvi brez predhodne krvi. tipkanje. Coombsov test obstaja v dveh različicah - neposredni in posredni. Z početjem direktni test Coombs zazna protitelesa, pritrjena na površino rdečih krvnih celic. Študija se uporablja za določitev vzroka hemolitične reakcije. Indirektni Coombsov test je namenjen odkrivanju protiteles proti eritrocitom v krvni plazmi. Treba je določiti združljivost krvi med darovalcem in prejemnikom ali materjo in plodom ter pomaga preprečiti razvoj Rh konflikta in posledično hemolizo rdečih krvnih celic.

Kri za obe različici Coombsovega testa se vzame iz vene. Analiza poteka z aglutinacijo z antiglobulinskim serumom. Rezultati študije se uporabljajo v hematologiji za odkrivanje vzrokov hemolitičnih reakcij, v kirurgiji in oživljanju pri izvajanju transfuzije krvi, v porodništvu in ginekologiji pri spremljanju nosečnosti pri ženskah z Rh-negativno krvjo.

Indikacije

Direktni Coombsov test, ki odkriva protitelesa, pritrjena na površino rdečih krvnih celic, je predpisan za hemolitične reakcije (uničenje rdečih krvničk) različnega izvora. Študija je indicirana za primarno avtoimunsko hemolitično anemijo, posttransfuzijsko hemolitično anemijo, hemolitično bolezen novorojenčka, hemolizo eritrocitov, ki jo povzroča avtoimunska, tumorska ali nalezljive bolezni, kot tudi recepcija zdravila, na primer kinidin, metildopa, prokainamid. Indirektni Coombsov test, ki določa protitelesa v krvni plazmi, se uporablja za preprečevanje razvoja Rh konflikta. Indicirano je za bolnike, ki se pripravljajo na transfuzijo krvi, pa tudi za nosečnice z negativnim Rh faktorjem, pod pogojem, da ima bodoči oče otroka pozitiven Rh faktor.

Za določitev Rh združljivosti Coombsov test ni predpisan bolnikom z Rh pozitivno krvjo. V teh primerih so na površini rdečih krvničk že prisotni antigeni, nastajanja protiteles ne moremo izzvati s transfuzijo krvi ali vstopom plodove krvi v krvni obtok nosečnice. Tudi študija ni indicirana za nosečnice, če imata oba starša negativen Rh faktor - dedno recesivno lastnost. Otrok v takih parih ima vedno Rh negativno kri, imunološki konflikt z materjo je nemogoč. Pri hemolitičnih patologijah se antiglobulinski test ne uporablja za spremljanje uspešnosti terapije, saj rezultati ne odražajo aktivnosti procesa uničenja rdečih krvnih celic.

Omejitev Coombsovega testa je težavnost raziskovalnega postopka - za pridobitev zanesljivih rezultatov je potrebno upoštevati temperaturne in časovne pogoje, pravila za pripravo reagentov in biomateriala. Prednosti Coombsovega testa so njegova visoka občutljivost. Pri hemolitični anemiji ostanejo rezultati tega testa pozitivni, tudi če so vrednosti hemoglobina, bilirubina in retikulocitov normalizirane.

Priprava na analizo in zbiranje materiala

Material za izvedbo Coombsovega testa je venska kri. Za čas postopka odvzema krvi in ​​pripravo pacienta ni posebnih zahtev. Kot pri vsaki študiji je priporočljivo, da si po jedi vzamete vsaj 4-urni odmor in v zadnjih 30 minutah prenehate kaditi. telesna aktivnost, izogibajte se čustveni stres. Prav tako je vredno vnaprej razpravljati s svojim zdravnikom o potrebi po prenehanju jemanja zdravil - nekatera zdravila lahko izkrivljajo rezultate Coombsovega testa. Kri se odvzame z brizgo iz kubitalne vene ali redkeje iz vene na zadnji strani roke. V nekaj urah je material dostavljen v laboratorij.

Pri izvajanju neposrednega Coombsovega testa pacientovemu krvnemu serumu dodamo antiglobulinski serum. Po določenem času se mešanica pregleda na prisotnost aglutinatov - nastanejo, če so protitelesa na rdečih krvnih celicah. Če je rezultat pozitiven, se določi aglutinacijski titer. Indirektni Coombsov test je sestavljen iz več korakov. Najprej se protitelesa, prisotna v serumu, med inkubacijo pritrdijo na vbrizgane rdeče krvne celice. Nato vzorcu dodamo antiglobulinski serum, čez nekaj časa določimo prisotnost in titer aglutinatov. Obdobje analize je 1 dan.

Normalni rezultati

Običajno je rezultat neposrednega Coombsovega testa negativen (-). To pomeni, da v krvi ni protiteles, povezanih z rdečimi krvnimi celicami, in ne morejo povzročiti hemolize. Normalen rezultat Indirektni Coombsov test je tudi negativen (-), to pomeni, da v krvni plazmi ni protiteles proti faktorju Rh. Pri pripravi na transfuzijo krvi za prejemnika to pomeni združljivost s krvjo darovalca; pri spremljanju nosečnosti to pomeni odsotnost Rh senzibilizacije matere, nizko tveganje za nastanek imunološkega konflikta. Fiziološki dejavniki, kot sta prehrana ali telesna aktivnost, ne morejo vplivati ​​na rezultat testa. Če je rezultat pozitiven, je torej potrebno posvetovanje z zdravnikom.

Diagnostična vrednost analize

Pozitiven rezultat Coombsovega testa je izražen kvalitativno, od (+) do (++++), ali kvantitativno, s titri od 1:16 do 1:256. Določanje koncentracije protiteles na rdečih krvničkah in v krvnem serumu se izvaja v obeh vrstah vzorcev. Če je direktni Coombsov test pozitiven, se na zunanji membrani rdečih krvničk odkrijejo protitelesa, ki povzročijo uničenje teh krvnih celic. Vzrok je lahko transfuzija krvi brez predhodne tipizacije - potransfuzijska hemolitična reakcija, pa tudi eritroblastoza novorojenčka, hemolitična reakcija zaradi uporabe zdravil, primarna ali sekundarna avtoimunska hemolitična anemija. Sekundarno uničenje rdečih krvnih celic lahko povzroči sistemski eritematozni lupus, Evansov sindrom, Waldenströmova makroglobulinemija, paroksizmalna hladna hemoglobinurija, kronična limfocitna levkemija, limfom, infekcijska mononukleoza, sifilis, mikoplazma pljučnica.

Pozitiven rezultat indirektnega Coombsovega testa kaže na prisotnost protiteles proti faktorju Rh v plazmi. V praksi to pomeni, da je prišlo do Rh senzibilizacije in obstaja možnost razvoja Rh konflikta po infuziji krvi darovalca med nosečnostjo. Za preprečevanje zapletov v nosečnosti se ženske s pozitivnim rezultatom Coombsovega testa vpišejo v poseben register.

Zdravljenje nepravilnosti

Coombsov test se nanaša na izoserološke študije. Njegovi rezultati omogočajo prepoznavanje hemolitične reakcije, pa tudi določitev združljivosti krvi darovalca in prejemnika, matere in ploda, da se prepreči razvoj Rh konflikta. Če je rezultat testa pozitiven, se morate posvetovati z lečečim zdravnikom - porodničarjem-ginekologom, hematologom, kirurgom.

Odobreno z ukazom Roszdravnadzorja

o uporabi "Sklopa reagentov za določanje antigenov in protiteles Rhesus sistema v človeški krvi"
(AGS za Coombsov test)

TU 9398-102-51203590-2012

RU št. RZN 2013/1255 z dne 10.11.2013

I. UVOD

Standardni serum za Coombsov test vsebuje specifična heteroimunska protitelesa proti beljakovinam v človeški krvi in ​​je namenjen uporabi v dveh možnostih reakcije - neposrednem in posrednem Coombsovem testu.

Neposredni Coombsov test uporabljamo za ugotavljanje senzibilizacije eritrocitov in vivo pri hemolitični bolezni novorojenčkov in pri bolnikih z avtoimuno obliko kronične hemolitične anemije ter pri nekaterih drugih stanjih. Izvedba neposrednega Coombsovega testa je sestavljen iz dejstva, da se serum za Coombsov test doda preučevanim rdečim krvnim celicam, ki so bile predhodno oprane iz beljakovin lastne plazme. Če so bile rdeče krvne celice senzibilizirane in vivo, reakcija povzroči njihovo aglutinacijo.

Indirektni Coombsov test uporablja se kot test za ugotavljanje stanja preobčutljivosti telesa, kar omogoča odkrivanje protiteles, ki so v prostem stanju v krvnem serumu testirane osebe; kot test združljivosti transfuzirane krvi, ko se preučuje učinek seruma prejemnika na rdeče krvne celice predvidenega darovalca; in kot test za določanje različnih skupinskih antigenov v eritrocitih z uporabo predhodne izpostavljenosti standardnim serumom, ki vsebujejo protitelesa znane specifičnosti. Indirektni Coombsov test (vse možnosti) proizvedeno v dveh fazah, od katerih je prva inkubacija testnega (ali standardnega) seruma s standardnimi (ali testnimi) eritrociti, to je senzibilizacija eritrocitov in vitro. Druga stopnja je dejanska reakcija s serumom za Coombsov test, ki se izvede na enak način kot direktni Coombsov test.

Končni rezultat reakcije pri neposrednem in posrednem Coombsovem testu nastane zaradi interakcije standardni serum za Coombsov test s protitelesi (človeške krvne beljakovine), pritrjenimi na rdeče krvne celice. Ta rezultat se kaže kot aglutinacija rdečih krvnih celic. Za opazovanje aglutinacije uporabite bel porcelan ali katero koli belo ploščo z mokro površino, tako da se kapljice, ki jih nanesete nanjo, dobro premešajo in se ne razširijo po površini plošče. Zmešane kapljice je treba rahlo razporediti po krožniku, približno do velikosti kovanca za 2 kopejka.
II. PRIPRAVA REAKCIJSKIH SESTAVIN

Testni serum za ugotavljanje prisotnosti in specifičnosti protiteles v njem se pridobi iz krvi pregledane osebe brez dodajanja konzervansa. Shranjujte pri temperaturi + 4–8 0 C največ 2 dni ali zamrznjeno 1 mesec.

Serum za testiranje združljivosti se pridobi na enak način, vendar se uporablja z rokom uporabnosti največ 2 dni.

Rdeče krvne celice, namenjene za določanje določenih izoantigenov v njih, pripravimo z nekakšnim konzervansom od osebe, ki ji preiskujemo kri. Uporabite lahko tudi usedlino rdečih krvnih celic iz krvi, odvzete brez konzervansa.

Pri testiranju združljivosti se uporablja kri darovalca, ki se vzame skozi iglo iz viale, pripravljene za transfuzijo.

V vseh primerih se rdeče krvne celice 3-4 krat sperejo v epruvetah iz plazme tako, da se enemu volumnu rdečih krvnih celic doda 8-10 volumnov izotonične raztopine natrijevega klorida, čemur sledi mešanje in centrifugiranje pri 1500-2000 obratih na minuto 5-krat. 10 minut (do popolne sedimentacije eritrocitov). Po vsakem centrifugiranju se supernatant odsesa.
III. REAKCIJSKE TEHNIKE

Testne eritrocite pripravimo v obliki 5% suspenzije, za katero eno kapljico štirikrat izpranih eritrocitov v epruveti zmešamo z 19 kapljicami izotonične raztopine natrijevega klorida.

Eno kapljico (0,05 ml) 5% suspenzije rdečih krvničk prenesemo na belo ploščo in razmažemo. Ploščo stresamo in opazujemo 3 minute, da vidimo, ali je prišlo do aglutinacije rdečih krvnih celic. Če do aglutinacije ni prišlo, dodajte 1-2 kapljici standardnega seruma za Coombsov test, kapljice temeljito premešajte, nato ploščo rahlo pretresite, nato pustite eno ali dve minuti pri miru in ponovno pretresite. Hkrati se rezultat spremlja 10 minut, kar se izraža v prisotnosti ali odsotnosti aglutinacije.
Interpretacija rezultatov neposrednega Coombsovega testa.

Brez aglutinacije – negativen test

Prisotnost aglutinacije – pozitiven test, ki kaže na senzibilizacijo testiranih rdečih krvničk, to je absorpcijo protiteles na njih, ki se je zgodila in vivo v človeškem telesu (novorojenček, bolnik). Če pride do aglutinacije testiranih rdečih krvničk zgodilo pred dodajanjem serum za Coombsov test, rezultat neposrednega testa se ne upošteva.
2. Indirektni Coombsov test

Namenjen za dokazovanje izoprotiteles v krvnem serumu preiskovane osebe

Uporablja se v primerih, ko je treba ugotoviti, ali kri bolnika, nosečnice, darovalca itd. vsebuje izoimunska protitelesa nepopolne oblike in ugotoviti njihovo specifičnost. Za reakcijo se uporabi krvni serum preiskovane osebe in standardne rdeče krvne celice znane specifičnosti. Med temi 8-10 ali več vzorci rdečih krvnih celic bi morale biti razlike v dejavnikih iz drugih sistemov in zelo pomembno je, da je vsak od teh faktorjev vsebovan v vsaj enem vzorcu rdečih krvnih celic. Panel vključuje tudi vzorce Rh-negativnih eritrocitov z različnimi kombinacijami antigenov drugih sistemov, tako da so med njimi Duffy-pozitivni in Duffy-negativni, ki bi jih delili na Kell-pozitivne in Kell-negativne, Kidd-pozitiven in Kidd-negativen itd. Kot negativno kontrolo se po možnosti vključijo v reakcijo eritrociti osebe, katere serum testiramo.

Reakcijska tehnika

V stojalo je nameščenih več centrifugalnih ali drugih epruvet s prostornino 3-10 ml, glede na število vzorcev eritrocitov, vključenih v reakcijo. Epruvete označimo in v skladu z oznako dodamo 1 majhno kapljico (0,01 ml) opranih standardnih rdečih krvničk. V vsako epruveto nakapamo tri kapljice testnega seruma, epruvete močno pretresemo, da se rdeče krvne celice pomešajo s serumom, in postavimo v termostat pri 37 0 C za 45 minut. Po inkubaciji se epruvete odstranijo iz termostata in rdeče krvne celice se sperejo z dodajanjem izotonične raztopine natrijevega klorida na vrh epruvete, premešajo in nato centrifugirajo. Izpiranje ponovimo 3-4 krat, vsakič previdno izsesamo supernatant, nato pa opranim rdečim krvnim celicam dodamo 2 kapljici izotonične raztopine natrijevega klorida, da dobimo približno 5% suspenzije (pri uporabi centrifugalnih epruvet se lahko omejite na dvakratno pranje).

1 kapljico 5% suspenzije eritrocitov iz vsake epruvete prenesemo na belo ploščo, dodamo 1-2 kapljici standardnega seruma za Coombsov test in serum temeljito premešamo z eritrociti. Ploščo rahlo pretresemo, nato pustimo pri miru 1-2 minuti in ponovno občasno pretresemo, hkrati pa 20 minut opazujemo rezultat reakcije.

Interpretacija rezultatov

Brez znakov aglutinacije (negativen rezultat) v vseh vzorcih pomeni, da testni serum ne vsebuje nepopolnih protiteles proti skupinskim antigenom, ki jih vsebujejo standardne rdeče krvničke, vključene v raziskavo.

Če pri nekaterih ali večini padcev, poleg nadzora, opazili aglutinacija , to pomeni, da testni serum vsebuje nepopolna protitelesa proti eritrocitnim antigenom. Vprašanje specifičnosti teh protiteles se odloči s primerjavo pozitivnih in negativne reakcije z antigensko strukturo rdečih krvničk, vključenih v reakcijo. Vprašanje aktivnosti teh protiteles se reši s titracijo.

Primer 1. Aglutinacija se je pojavila pri vseh vzorcih eritrocitov, ki so vsebovali faktor Rh 0 (D), ne glede na prisotnost ali odsotnost drugih faktorjev tega sistema in drugih sistemov, medtem ko pri vseh Rh 0 (D) - negativnih vzorcih aglutinacije ni bilo (tj. ne glede na prisotnost ali odsotnost drugih dejavnikov) - to pomeni, da testni serum vsebuje nepopolna anti-Rhesus protitelesa - Rh 0 (D).

Primer 2. Aglutinacija se je pojavila pri vseh vzorcih eritrocitov, ki vsebujejo Duffyjev faktor, ne glede na prisotnost ali odsotnost antigenov Rhesus sistema in drugih sistemov, pri vseh Duffy-negativnih vzorcih pa ni bilo aglutinacije, kar pomeni, da testni serum vsebuje nepopolne anti- protitelesa. -Duffy.

Dodatek.Če ustanova nima popolne plošče standardnih rdečih krvnih celic, vendar je treba testirati serum na prisotnost protiteles, je priporočljivo izvesti študijo s 25-30 naključnimi vzorci rdečih krvnih celic zdravih posameznikov. skupina 0 (I) ali serum z istim imenom kot testni serum. To bo omogočilo rešitev vprašanja prisotnosti ali odsotnosti protiteles proti večini antigenov sistema Rh-Hr, Duffy, Kell, Kidd.

Če dobimo pozitiven rezultat, lahko o nadaljnjem sklepu o specifičnosti odkritih protiteles odloča posebna študija s celotno ploščo standardnih rdečih krvnih celic.

3. Tehnika izvajanja indirektnega Coombsovega testa kot testa združljivosti transfuzirane krvi

Da bi preprečili nezdružljivost med transfuzijo krvi, je treba pred transfuzijo opraviti naslednje teste združljivosti:

1. 
   Test združljivosti za krvne skupine ABO, ki se izvaja na letalu pri sobni temperaturi.
2. 
   Testi združljivosti za Rh faktor in druge izoantigene.

Inkompatibilnost za Rh faktor in nekatere druge izoantigene je lahko odvisna tako od prisotnosti popolnih protiteles (določenih v slanem okolju pri 37 0 C v epruvetah) kot najpogosteje od nepopolnih protiteles, za kar je najbolj posredni Coombsov test. občutljiva.

Eno majhno (0,01 ml) kapljico opranih donorjevih eritrocitov, odvzetih skozi iglo iz stekleničke s krvjo za transfuzijo, prenesemo na dno centrifuge ali druge epruvete s prostornino 3-4 ml in 3 kapljice bolnikovega ji dodamo serum. Epruveto pretresemo, da se eritrociti pomešajo s serumom, nakar jo postavimo v termostat pri 37 0 C za 45 minut. Po inkubaciji dodamo na vrh epruvete izotonično raztopino natrijevega klorida, vsebino epruvete premešamo in centrifugiramo 5-10 minut. To izpiranje rdečih krvnih celic ponovimo 3-krat, pri čemer vsakič previdno odstranimo supernatant. Pri uporabi centrifugalnih epruvet se lahko omejite na dvakratno pranje. Opranim rdečim krvnim celicam dodajte 2 kapljici izotonične raztopine natrijevega klorida, da dobite približno 5 % suspenzijo.

1 kapljico 5% suspenzije rdečih krvnih celic prenesemo na belo ploščo, dodamo 1-2 kapljici standardnega seruma za Coombsov test in serum temeljito premešamo z rdečimi krvničkami. Nato ploščo rahlo pretresemo, pustimo stati 1-2 minuti in občasno ponovno pretresemo, medtem ko opazujemo rezultat 20 minut.

Opomba: V primeru Rh inkompatibilnosti se aglutinacija običajno pojavi v prvi minuti, vendar z nizkim titrom Rh protiteles (ali drugih protiteles) lahko pride do aglutinacije kasneje, včasih do dvajsete minute.
Razlaga rezultata:

Vidni so aglutinati v obliki grudic na očiščenem ali popolnoma beljenem ozadju - to pomeni, da krv darovalca nezdružljivo s prejemnikovo krvjo in mu je ni mogoče transfuzirati.

Odsotnost znaki aglutinacije pomenijo, da bolnikova kri ne vsebuje nepopolnih protiteles proti rdečim krvnim celicam darovalca glede na Rh faktor in druge izoantigene, na katere bi lahko nastala nepopolna protitelesa.

Indirektni Coombsov test je občutljiv le na nepopolna protitelesa.
4. Tehnika indirektnega Coombsovega testa za določanje antigenska struktura rdeče krvne celice

Ta test se uporablja za ugotavljanje prisotnosti ali odsotnosti katerega koli antigena skupine rdečih krvnih celic z uporabo standardnega seruma, ki vsebuje ustrezna protitelesa v nepopolni obliki.

Najpogosteje se indirektni Coombsov test uporablja za določanje antigenov Kell (K), Duffy (Fy), Kidd (Jk) in tudi za določanje šibkega antigena sistema Rh (Du).

Preden nadaljujete z določanjem antigenov, je treba proučevane rdeče krvne celice testirati z neposrednim Coombsovim testom. Če je rezultat neposrednega testa pozitiven, določanja antigenov z indirektnim Coombsovim testom ni mogoče izvesti, temveč je treba v ta namen uporabiti druge reakcije.

Za reakcijo uporabimo centrifugalne ali druge epruvete s prostornino 3-4 ml v količini treh: eno za testni vzorec eritrocitov in dve za 1 majhno (0,01 ml) kapljico trikrat opranih testnih eritrocitov. na dno prve epruvete dodamo kontrolne eritrocite v drugo epruveto, ki vsebuje želeni antigen (npr. Duffy-pozitivno) in v tretjo epruveto - negativno kontrolo (Duffy-negativno). V vse epruvete dodajte 2-3 kapljice standardnega seruma (v tem primeru anti-Duffy). Epruvete pretresemo, da se vsebina premeša, in postavimo v termostat pri 37 0 C za 45 minut. Po takšni inkubaciji epruvete odstranimo iz termostata, na vrh dodamo izotonično raztopino natrijevega klorida, vsebino temeljito premešamo in centrifugiramo pri 1500-2000 tisoč obratih na minuto 5-10 minut. Po centrifugiranju supernatant previdno odsesamo in to izpiranje rdečih krvnih celic ponovimo 4-krat. (Pri uporabi centrifugalnih epruvet se lahko omejite na dvakratno pranje).

Opranim rdečim krvnim celicam dodajte 2 kapljici izotonične raztopine natrijevega klorida, da dobite približno 5 % suspenzijo. Po 1 kapljico 5% suspenzije eritrocitov iz vsake epruvete prenesemo na belo ploščo, na vsako kapljico eritrocitov dodamo 1-2 kapljici standardnega seruma za Coombsov test in premešamo. Ploščo rahlo pretresemo, nato pustimo pri miru 1-2 minuti in ponovno občasno pretresemo, hkrati pa 20 minut opazujemo potek reakcije.
Interpretacija rezultatov

Prisotnost aglutinacije rdeče krvne celice (pozitiven rezultat) pomeni, da kri vsebuje želeni antigen (v tem primeru Duffy-pozitivna kri).

Brez aglutinacije (negativen rezultat) pomeni, da testirana kri ne vsebuje želenega antigena (Duffy negativen).

Rezultat se upošteva kot resničen po kontroli kontrolnih vzorcev, to je v primeru, če je rezultat pozitiven pri Duffy-pozitivnem vzorcu in negativen pri Duffy-negativnem vzorcu.

5. Obrazec za sprostitev

Reagent je na voljo v tekoči obliki v plastenkah po 5 ali 10 ml (1 ml vsebuje 10 odmerkov). Kot konzervans se uporablja natrijev azid v končni koncentraciji 0,1%.

6. Shranjevanje

Rok uporabnosti: dve leti v hladilniku pri 2-8°C. Odprta steklenička je primerna za uporabo, če je shranjena v hladilniku, hermetično zaprta, do konca roka uporabnosti.

Razlogi za pritožbo so: pomanjkanje aktivnosti, nespecifičnost, kršitev celovitosti steklenice, prisotnost kosmičev, potekel rok uporabnosti reagenta. Ob reklamaciji navedite datum prejema, dobavitelja (če izdelek niste prejeli od proizvajalca), številko serije in razloge, zakaj je bil reagent neustrezen. Priložite protokol z rezultati testiranja reagenta in 2-3 neodprte stekleničke z reagentom
Pritožbo je treba poslati proizvajalcu LLC "MEDICLON": 127276