ניקוב של בלוטות לימפה אזוריות
העור מעל בלוטות הלימפה מטופל עם 96% אלכוהול ותמיסת אלכוהול 3-5% של יוד. ואז 1 ו -2 אצבעות של יד שמאל לתקן את בלוטת הלימפה. יד ימיןקח מזרק סטרילי עם כמה טיפות של תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית, המוזרקת במקביל ציר אורךבלוטת לימפה. המחט נדחפת לכיוונים שונים לדופן הנגדי של קפסולת הצומת ותכולת המזרק מוזרקת באיטיות. באצבעות יד שמאל מעסים קלות את בלוטת הלימפה. עם נסיגה איטית של המחט, הבוכנה של המזרק מתקדמת בו זמנית, שואבת את תוכן בלוטת הלימפה. החומר מוחל על שקופית זכוכית (עם כמות קטנה של חומר, מוסיפים טיפה של תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית), מכוסה בכוס כיסוי. המחקר של התרופה המקומית מתבצע בשדה הראייה האפל באמצעות מיקרוסקופ אור אופטי עם מעבה שדה כהה (אובייקט 40, 7x, 10x או 15x). ניתן למצוא טרפונמות חיוורות גם בתכשירים מוכתמים. כאשר צובעים לפי רומנובסקי-גימסה, טרפונמות חיוורות מוכתמות בוורוד, לפי פונטן ומורוזוב בחום (שחור), לפי שיטת בורי, מתגלות טרפונמות לא מוכתמות על רקע כהה.אבחון סרולוגי
חשיבות באבחון עגבת, הערכת יעילות הטיפול, קביעת קריטריון לריפוי, זיהוי נסתר, צורות עמידותמחובר לתגובות סרולוגיות סטנדרטיות (קלאסיות) וספציפיות. בדיקות סרולוגיות סטנדרטיות או קלאסיות (SSRs) כוללות:- תגובת וסרמן (RV),
- תגובות משקע של קאהן וזקס-ויטבסקי (ציטוכולית),
- תגובה על זכוכית (שיטת אקספרס),
- תגובת אימוביליזציה של treponema pallidum (RIBT),
- תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF).
תגובת וסרמן (RV)
- פותח על ידי A. Wasserman יחד עם A. Neisser ו C. Bruck בשנת 1906. תגובת וסרמן מבוססת על תופעת קיבוע המשלים (תגובת Borde-Gangu) ומאפשרת קביעת נוגדנים אנטי שומנים (reagins). לפי רעיונות מודרניים, בתגובת וסרמן נקבעים נוגדנים לליפידים מאקרואורגניזמים, ולא טרפונמה חיוורת, והתגובה חושפת תהליך אוטואימוני הנגרם על ידי דנטורציה של רקמות מאקרואורגניזם על ידי טרפונמות חיוורות עם היווצרות קומפלקס ליפופרוטאין (מצומד), שבו השומנים (הפטנים) הם הקובעים.בדרך כלל RV ממוקם עם שניים או שלושה אנטיגנים. הנפוצים ביותר בשימוש הם אנטיגן הקרדיוליפין הרגיש ביותר (תמצית לב בקר מועשר בכולסטרול ולציטין) ואנטיגן טרפונמל (תרחיף מקול של treponema pallidum מתורבת אנטוגנית). יחד עם החזרות של סרום הדם של המטופל, אנטיגנים אלו יוצרים קומפלקס חיסוני המסוגל לספוג ולקשר משלים. לקביעה ויזואלית של הקומפלקס שנוצר (reagins + אנטיגן + משלים), מערכת המוליטית משמשת כאינדיקטור (תערובת של אריתרוציטים של רם עם סרום המוליטי). אם המשלים נקשר בשלב הראשון של התגובה (reagins + אנטיגן + משלים), המוליזה אינה מתרחשת - האריתרוציטים משקעים למשקע שניתן להבחין בו בקלות (PB חיובי). אם המשלים לא נקשר בשלב 1 עקב היעדר reagins בסרום הבדיקה, הוא ישמש את המערכת ההמוליטית ותתרחש המוליזה (PB שלילי). דרגת החומרה של המוליזה במצב של RV מוערכת לפי הפלוסים: היעדר מוחלט של המוליזה ++++ או 4+ (RV חיובי בחדות); המוליזה בקושי התחילה +++ או 3+ (PB חיובי); המוליזה משמעותית ++ או 2+ (PB חיובי חלש); תמונה לא מובנת של המוליזה ± (RV בספק); המוליזה מלאה - (תגובת וסרמן שלילית).
בנוסף להערכה האיכותית של RV, קיים ניסוח כמותי עם דילולים שונים בסרום (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). הטיטר של reagins נקבע על ידי הדילול המקסימלי, אשר עדיין נותן תוצאה חיובית חדה (4+). ניסוח כמותי של RV חשוב באבחון של כמה צורות קליניות של זיהום עגבת, כמו גם בניטור יעילות הטיפול. נכון לעכשיו, תגובת וסרמן מבוימת עם שני אנטיגנים (קרדיוליפין וטרפונמל זן רייטר). ככלל, RV הופך חיובי 5-6 שבועות לאחר ההדבקה ב-25-60% מהחולים, ב-7-8 שבועות - ב-75-96%, ב-9-19 שבועות - ב-100%, אם כי ב- השנים האחרונותלפעמים במוקדם או במאוחר. במקביל, טיטר של reagins עולה בהדרגה ומגיע לערך מרבי (1:160-1:320 ומעלה) במקרה של הופעת פריחות כלליות (עגבת טרייה משנית). כאשר RV חיובי, מתבצעת אבחנה של עגבת סרו-חיובית ראשונית.
עם טרי משניועגבת חוזרת משנית, RV חיובי ב-100% מהחולים, אך עשויה להופיע תוצאה שלילית בחולים עם תת-תזונה לקוי חיסון. לאחר מכן, טיטר ה-reagins יורד בהדרגה ובעגבת חוזרת משנית בדרך כלל אינו עולה על 1:80-1:120.
עם עגבת שלישונית RV חיובי ב-65-70% מהחולים ובדרך כלל נצפה טיטר נמוך של reagins (1:20-1:40). עם צורות מאוחרות של עגבת (עגבת איברים פנימיים, מערכת עצבים) RV חיובי נצפה ב-50-80% מהמקרים. הטיטר מחדש נע בין 1:5 ל-1:320.
עם עגבת סמויה RV חיובי נצפה ב-100% מהחולים. הטיטר מחדש הוא מ-1:80 עד 1:640, ועם עגבת סמויה מאוחרת מ-1:10 עד 1:20. ירידה מהירה בטיטר של reagins (עד שליליות מוחלטת) במהלך הטיפול מעידה על יעילות הטיפול.
חסרונות של תגובת וסרמן- חוסר רגישות שלב ראשוניעגבת ראשונית היא שלילית). זה שלילי גם ב-1/3 מהחולים, אם טופלו באנטיביוטיקה בעבר, בחולים עם עגבת פעילה שלישונית עם נגעים של העור והריריות, מנגנון אוסטיאוארטיקולרי, איברים פנימיים, מערכת העצבים המרכזית, עם עגבת מולדת מאוחרת. .
חוסר ספציפיות- תגובתו של וסרמן עשויה להיות חיובית באנשים שלא היו חולים בעבר ואינם סובלים מעגבת. בפרט, תוצאות RV חיוביות שגויות (לא ספציפיות) נצפות בחולים הסובלים מזאבת אדמנתית מערכתית, צרעת, מלריה, ניאופלזמות ממאירות, נזק לכבד, אוטמים נרחבים בשריר הלב ומחלות נוספות, ולעיתים באנשים בריאים לחלוטין.
מזוהה תגובת וסרמן חיובית כוזבת לטווח קצראצל חלק מהנשים לפני או אחרי לידה, אצל אנשים שמתעללים בסמים, לאחר הרדמה, צריכת אלכוהול. ככלל, RV חיובי כוזב מתבטא בצורה חלשה, לרוב עם טיטר נמוך של ריאגינים (1:5-1:20), חיובי (3+) או חיובי חלש (2+). בבדיקות סרולוגיות המוניות, השכיחות של תוצאות חיוביות כוזבות היא 0.1-0.15%. כדי להתגבר על חוסר הרגישות, הם משתמשים בהגדרה בקור (תגובת קולארד) ובמקביל היא מוגדרת עם תגובות סרולוגיות אחרות.
תגובות משקע של קאהן וזקס-ויטבסקי
תגובת וסרמן משמשת בשילוב עם שניים תגובות משקע (קאהן וזקס-ויטבסקי), במהלך ייצורם מכינים אנטיגנים מרוכזים יותר. שיטת אקספרס (מיקרו-תגובה על זכוכית) - מתייחסת לתגובות שומנים ומבוססת על תגובת משקעים. הוא ממוקם עם אנטיגן קרדיוליפין ספציפי, טיפה אחת שלו מעורבבת עם 2-3 טיפות של סרום הדם הנחקר בבארות של צלחת זכוכית מיוחדת.יתרון- מהירות קבלת התגובה (ב-30-40 דקות). התוצאות מוערכות לפי כמות המשקעים וגודל הפתיתים. החומרה מוגדרת כ-CSR - 4+, 3+, 2+ ושלילי. יש לציין כי תוצאות חיוביות כוזבות נצפות לעתים קרובות יותר מאשר עם RV. ככלל, שיטת האקספרס משמשת לבדיקות המוניות לעגבת, במהלך בדיקות במעבדות אבחון קליניות, מחלקות סומטיות ובתי חולים. בהתבסס על תוצאות השיטה המפורשת, אבחון עגבת אסור, השימוש בו בנשים בהריון, תורמים וגם לשליטה לאחר הטיפול אינו נכלל.
Treponema pallidum immobilization response (RIBT)
Treponema pallidum immobilization response (RIBT)- הוצע בשנת 1949 על ידי R.W.Nelson ומ.Mayer. זוהי בדיקת האבחון הספציפית ביותר לעגבת. עם זאת, המורכבות והעלות הגבוהה של ההגדרה מגבילות את היישום שלה. בסרום הדם של החולים נקבעים נוגדנים ספציפיים לווידאו (אימוביליזינים), אשר מובילים לחוסר תנועה של טרפונמות חיוורות בנוכחות משלים. האנטיגן הוא treponema pallidum חי פתוגניים שבודד מארנבות שנדבקו בעגבת. בעזרת מיקרוסקופ סופרים את מספר הטרפונמות החיוורות המשומקות (משומקות) ומעריכים את התוצאות של RIBT: אימוביליזציה של טרפונמות חיוורות מ-51 עד 100% היא חיובית; מ-31 ל-50% - חיובי חלש; מ-21 עד 30% - ספק; מ-0 עד 20% - שלילי.RIBT משנה מתי אבחנה מבדלת להבחין בין תגובות סרולוגיות חיוביות שגויות לתגובות עקב עגבת. הופך חיובי מאוחר יותר מאשר RV, RIF ולכן לאבחון צורות שונותלא משתמשים בעגבת, אם כי בתקופה המשנית של עגבת היא חיובית ב-85-100% מהחולים.
בתקופה השלישונית של עגבת עם פגיעה באיברים פנימיים, במערכת השרירים והשלד ובמערכת העצבים, RIBT חיובי ב-98-100% מהמקרים ( RV הוא לעתים קרובות שלילי).
יש לזכור ש-RIBT עלול להתברר כ-false-positive אם תרופות טרפונמוצידיות (פניצילין, טטרציקלין, מקרוליטים וכו') קיימות בסרום הבדיקה, הגורמות לקיבוע לא ספציפי של טרפונמה חיוורת. לשם כך, דם עבור RIBT נבדק לא לפני שבועיים לאחר סיום הטיפול באנטיביוטיקה ותרופות אחרות.
RIBT, כמו RIF, הוא שלילי לאט במהלך הטיפול, ולכן הוא אינו משמש כביקורת במהלך הטיפול.
תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF)
תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF)- פותח בשנת 1954 על ידי A.Coons ושימשו לראשונה לאבחון זיהום עגבת על ידי Deacon, Falcone, Harris בשנת 1957. RIF מבוסס על שיטה עקיפה לקביעת נוגדנים פלואורסצנטיים. האנטיגן לשלב הוא טרפונמות חיוורות פתוגניות לרקמות המקובעות על שקופיות זכוכית, עליהן מורחים את סרום הבדיקה. אם הסרום הנבדק מכיל נוגדנים אנטי-טרפונמאליים הקשורים ל-IgM ו-IgG, הם נקשרים בחוזקה לאנטיגן - טרפונמה, המתגלה במיקרוסקופ פלואורסצנטי באמצעות סרום פלואורסצנטי אנטי-מינים ("אנטי-אנושי").תוצאות RIFנלקחים בחשבון על ידי עוצמת הזוהר של טרפונמה חיוורת בתכשיר (זוהר צהוב-ירוק). בהיעדר נוגדנים אנטי-טרפונמאליים בסרום, טרפונמות חיוורות אינן מתגלות. בנוכחות נוגדנים, זוהר של טרפונמה חיוורת מזוהה, שדרגתו מתבטאת בפלוסים: 0 ו-1+ - תְגוּבָה חֲרִיפָה; מ-2+ ל-4+ - חיובי.
RIF מתייחס לתגובות טרפונמל קבוצתיות והוא ממוקם בדילול של סרום הבדיקה פי 10 ו-200 (RIF-10 ו-RIF-200). RIF-10 נחשב לרגיש יותר, אך לעיתים קרובות נופלות תוצאות חיוביות לא ספציפיות מאשר עם RIF-200 (יש לו סגוליות גבוהה יותר). בְּדֶרֶך כְּלַל, RIF הופך חיובי מוקדם יותר מ-RW- חיובי בעגבת סרונגטיבית ראשונית ב-80% מהחולים, ב-100% בתקופה המשנית של עגבת, תמיד חיובי בעגבת סמויה וב-95-100% מהמקרים בצורות מאוחרות ועגבת מולדת.
ספציפיות RIFעולה לאחר טיפול מקדים של סרום הבדיקה עם אנטיגן טרפונמל סורבנטי-אולטראסוני הקושר נוגדנים קבוצתיים (RIF - abs).
אינדיקציות לבימוי RIBT ו-RIF- אבחנה של עגבת סמויה כדי לאשר את הספציפיות של קומפלקס תגובות השומנים במקרה של זיהום עגבת על בסיס RV חיובי. RIBT ו-RIF חיוביים הם עדות לעגבת סמויה. עם RV חיובי שגוי מחלות שונות(זאבת אריתמטוזוס מערכתית, ניאופלזמות ממאירותוכו') ואם התוצאות החוזרות ונשנות של RIBT ו-RIF שליליות, זה מצביע על האופי הלא ספציפי של RV. חשד לנגעים עגבתיים מאוחרים של האיברים הפנימיים, מערכת השרירים והשלד, מערכת העצבים בנוכחות RV שלילי בחולים. חשד לעגבת סרונגטיבית ראשונית, כאשר בחולים עם מחקרים חוזרים ונשנים של הפרשות מפני השחיקה (אולקוס), עם ניקוב מבלוטות לימפה אזוריות מוגדלות, טרפונמה חיוורת לא מזוהה - במקרה זה, רק RIF מוגדר - 10.
כאשר בודקים אנשים עם קרוואן שלילישהיה להם מגע מיני וביתי ארוכי טווח עם חולים עם עגבת, בהינתן האפשרות לטפל בהם בעבר הקרוב בתרופות אנטי עגבת שגרמו ל-RV שלילי. Assay immunosorbent-enzyme-linked (ELISA, ELISA - enzymelinked immunosorbent assay) - השיטה פותחה על ידי E.Engvall et al., S.Avrames (1971). המהות מורכבת משילוב של אנטיגן עגבת הנספג על פני השטח של נשא בפאזה מוצקה עם נוגדן של סרום הדם הנחקר וזיהוי של קומפלקס אנטיגן-נוגדנים ספציפי באמצעות סרום דם חיסון אנטי-מינים מסומן באנזים. זה מאפשר לך להעריך את התוצאות של ELISA חזותית לפי מידת השינוי בצבע המצע תחת פעולת האנזים שהוא חלק מהמצומד. תוצאות ELISA לא מהימנות עלולות להתרחש כתוצאה מדילול לא מספיק של המרכיבים, הפרה של משטרי הטמפרטורה והזמן, חוסר עקביות ב-pH של התמיסות, זיהום של כלי זכוכית מעבדה וטכניקה לא נכונה לשטיפת המנשא.
תגובת המגלוטינציה פסיבית (RPHA)
הוצע כבדיקת אבחון לעגבת T. Rathlev (1965.1967), T. Tomizawa (1966). המאקרומודיפיקציה של התגובה נקראת TRHA, המיקרומודיפיקציה היא MHA-TR, הגרסה האוטומטית היא AMNA-TR, התגובה עם מקפסולות פוליאוריאה במקום אריתרוציטים היא MSA-TR. הרגישות והספציפיות של RPHA דומות ל-RIBT, RIF, אך RPHA פחות רגיש בצורות מוקדמות של עגבת בהשוואה ל-RIF-abs ורגיש יותר בצורות מאוחרות, עם עגבת מולדת. RPGA מונח בגרסאות איכותיות וכמותיות.טכניקת איסוף דם לתגובות סרולוגיות
לצורך מחקר על RV, RIF, RIBT, דם נלקח מהווריד הקוביטלי על בטן ריקה או לא לפני 4 שעות לאחר ארוחה עם מזרק סטרילי או מחט אחת (על ידי כוח הכבידה). במקום הדגימה, העור מטופל מראש ב-70% אלכוהול. יש לשטוף את המזרק והמחט בתמיסת נתרן כלורי איזוטונית. 5-7 מ"ל מדם הבדיקה מוזגים למבחנה נקייה, יבשה וקרה. על המבחנה מודבק נייר ריק עם שם המשפחה של המטופל, ראשי תיבות, מספר ההיסטוריה הרפואית או כרטיס האשפוז, תאריך דגימת הדם. לאחר נטילת דם, הצינור מוכנס למקרר עם משטר טמפרטורה+4°+8°C עד למחרת. למחרת, הסרום מרוקן למחקר. אם לא משתמשים בדם למחרת, יש לנקז את הסרום מהקריש ולאחסן במקרר לא יותר משבוע. למחקר על RIBT, המבחנה חייבת להיות מוכנה במיוחד וסטרילית. במקרה של הפרת כללי נטילת דם למחקר, אי עמידה בתנאים עלולה לגרום לעיוות בתוצאות.לא מומלץ לקחת דם למחקר לאחר אכילה, אלכוהול, שונות תרופות, לאחר הכנסת חיסונים שונים, במהלך מחזור חודשיבקרב נשים.
לצורך מחקר על שיטת האקספרס, דם נלקח מקצה האצבע, כפי שנעשה כאשר הוא נלקח עבור ESR, אך דם נלקח על ידי 1 נימי נוסף. ניתן לבצע את שיטת האקספרס גם עם סרום דם המתקבל על ידי ניקור ורידים. במידה ויש צורך בבדיקות דם במעבדות מרוחקות, ניתן לשלוח סרום יבש במקום דם (שיטת טיפה יבשה). לשם כך, למחרת לאחר נטילת הדם, הסרום מופרד מהקריש ונמשך למזרק סטרילי בכמות של 1 מ"ל. לאחר מכן יוצקים את הסרום בצורה של 2 עיגולים נפרדים על גבי רצועה של נייר כתיבה עבה (נייר שעווה או צלופן) בגודל 6X8 ס"מ. שם המשפחה, ראשי התיבות של הנבדק ותאריך דגימת הדם כתובים בקצה החופשי של הנייר. נייר סרום מוגן מאור שמש ישיר ונשאר בטמפרטורת החדר עד למחרת. הסרום מתייבש בצורה של עיגולים קטנים של סרט זגוגי צהבהב מבריק. לאחר מכן, רצועות נייר עם סרום מיובש מגולגלות כמו אבקת תרופות ונשלחות למעבדה, המעידות על האבחנה ולאיזו מטרה היא נחקרת.
עמידות סרולוגית
בחלק (2% או יותר) מהחולים עם עגבת, למרות הטיפול האנטי-עגבת המלא, ישנה האטה (היעדר) של תגובות סרולוגיות שליליות לאחר סיום הטיפול עד 12 חודשים או יותר. יש מה שנקרא עמידות סרולוגית, שבשנים האחרונות נצפתה לעתים קרובות. ישנן צורות של עמידות סרולוגית:- נָכוֹן(מוחלט, ללא תנאי) - יש צורך לבצע טיפול אנטי עגבת נוסף, בשילוב עם טיפול לא ספציפי להגברת כוחות החיסון של הגוף.
- קרוב משפחה- לאחר טיפול מלא, טרפונמות חיוורות יוצרות ציסטות או צורות L, הנמצאות בגוף במצב של ארסיות נמוכה וכתוצאה מכך, טיפול נוסףאינו משנה את האינדיקטורים של תגובות סרולוגיות, במיוחד RIF ו-RIBT.
פסאודו התנגדות- לאחר הטיפול, למרות תגובות סרולוגיות חיוביות, אין טרפונמה חיוורת בגוף. אין אנטיגן בגוף, אך נמשך ייצור הנוגדנים, שמתקבעים בעת הגדרת תגובות סרולוגיות.
עמידות סרולוגית יכולה להתפתח עקב:
- טיפול לא הולם מבלי לקחת בחשבון את משך ושלב המחלה;
- מינון לא מספיק ובפרט בשל אי התחשבות במשקל הגוף של החולים;
- הפרות של המרווח בין החדרת סמים;
- שימור של טרפונמות חיוורות בגוף למרות המלאות טיפול ספציפי, בשל עמידותם לפניצילין ותרופות כימותרפיות אחרות בנוכחות נגעים נסתרים, מעוטרים באיברים הפנימיים, במערכת העצבים, בלוטות לימפה, אשר אינם נגישים אליהם תרופות אנטיבקטריאליות(לעיתים קרובות נמצאות טרפונמות חיוורות ברקמות הצלקת שנים רבות לאחר סיום הטיפול, בבלוטות הלימפה ניתן לעיתים לזהות טרפונמות חיוורות 3-5 שנים לאחר טיפול אנטי עגבת);
- הפחתת כוחות ההגנה במחלות ושיכרון שונות (אנדוקרינופתיה, אלכוהוליזם, התמכרות לסמים וכו');
- תשישות כללית (אכילה דלה בויטמינים, חלבונים, שומנים).
- מתלווה מחלות לא ספציפיותאיברים פנימיים, הפרעות במערכת הלב וכלי הדם, שיגרון, תפקוד לקוי של מערכת האנדוקרינית והעצבים, דרמטוזות כרוניות חמורות, ניאופלזמות ממאירות;
- נגעים של מערכת העצבים (פציעות קשות, זעזוע מוח, טראומה נפשית);
- הֵרָיוֹן שיכרון כרוניאלכוהול, תרופות ניקוטין; מחלות זיהומיות (מלריה, שחפת, דלקת כבד נגיפית, דיזנטריה, טיפוס, טיפוס וחום חוזר).
אבחון מעבדהמשתמש במספר בדיקות לעגבת בבת אחת כדי לקבל את התוצאה המדויקת ביותר. זה לוקח יותר זמן, אבל נותן את התשובה המדויקת ביותר.
לרוב, התוצאה של ניתוח RIF מוצגת במספרים. לפענוח יש את הכינויים הבאים:
- חַד תוצאה חיוביתמסומן ב-4 פלוסים (++++);
- תוצאה חיובית מסומנת על ידי 3 פלוסים (+++);
- תוצאה חיובית חלשה 2 פלוסים (++);
- תוצאה מסופקת 1 פלוס (+);
- תוצאה שלילית מסומנת ב-1 מינוס (-).
התוצאה של RIF עבור עגבת מוצגת גם כאחוז, התלוי באינדיקטור הכמותי של החיידקים הקשורים:
- עם תוצאה שלילית, immobilization עד 20%;
- עם תוצאה חיובית חלשה, immobilization משתנה בין 20 ל 50%;
- עם תוצאה חיובית, immobilization הוא מעל 50%.
אם התוצאה היא חִיוּבִיתשובה, זה מציין את נוכחות המחלה.
אם התוצאה חיובי חלש, זה מצביע על כמות בודדת של שאריות נוגדנים בדם.
שליליהתוצאה מצביעה על היעדר טרפונמה חיוורת, מה שאומר שהמטופל בריא.
רופאים מנוסים במרפאתנו יאבחנו עגבת במהירות ובדיוק גבוה של קריאות. לכן אנו מוכוונים חברתית לכל שכבות האוכלוסייה העלות של ניתוח RIF היא זולה. המחיר מופיע בטבלה באתר שלנו.
באבחון סרולוגי של עגבת, חשוב מאוד לקבל תוצאה אמינה ומדויקת.
ננקטות פעולות מסוימות כדי לשפר את איכות הנתונים:
- סרום הבדיקה מדולל 200 פעמים (1:200) כדי למנוע תגובות חיוביות כוזבות. ואז אומרים שזה בעיצומו ניתוח עבור עגבת RIF 200.
- בגרסה אחרת, כאשר הסרום מדולל 1:5, נעשה שימוש נוסף בחומר ספיגה מיוחד, שאוסף על עצמו נוגדנים "מיותרים" כדי שלא יעוותו את התוצאות.
גדלי הטרפונמות משחקים גם לידי החוקרים. גופים מיקרוביאליים גדולים של ספירוצ'טים נראים בבירור תחת מיקרוסקופ פלורסנט. אם הם "מחוברים" לחלבונים המסומנים בזרחן מסרום. השימוש באנטיגן וסרה סטנדרטיים מאפשר למקסם את הרגישות והספציפיות של RIF באבחון של עגבת.
אפשרויות ניתוח פרטי RIF: קליטת RIF
אחד מ דרכים חלופיותשנקרא RIF-Abs. הוא שונה מהטכניקה הרגילה בדילול נמוך של הסרום הנחקר - 1:5 לעומת 1:200, כרגיל.
דגימה מרוכזת מכילה הרבה מולקולות חלבון פעילות.
כדי למנוע ולהגביר את הרגישות, הסרום מטופל בחומר ספיגה מיוחד משברי ספירוצ'טים עגבתיים. הסורבנט אוסף על עצמו נוגדנים פעילים יתר על המידה, ולאחר מכן הדגימה מטופלת בסרום תעשייתי עם תווית זרחן. הודות להכנה מקדימה זו, כל המולקולות המיותרות שעלולות להשפיע על תוצאות הבדיקה מבוטלות.
הם הציבו את זה לפי האינדיקציות הבאות:
- חיובי על רקע של רווחה קלינית והיעדר סיכונים לזיהום בהיסטוריה.
- RV חיובי בחולים עם מחלות כרוניות.
- RV שלילי כאשר מופיעים תסמינים חשודים לעגבת.
התוצאות החיוביות הראשונות מופיעות כבר 15-16 ימים לאחר ההדבקה. אם התגובה מחיובית הופכת לשלילית, זה מסמן תרופה מלאה לעגבת. ההסתברות לתוצאה חיובית כוזבת היא פחות מ-0.4%.
מצב זה יכול להתרחש כאשר בודקים חולי סרטן, אלכוהוליסטים, נשים בהריון ואנשים הסובלים מהפרעות חיסוניות.
שיעור מסוים נופל על טעויות טכניות, שכן הייצור די מסובך. ישנם מקרים בהם יש צורך להבחין בין פתולוגיה מולדת לבין נרכשת. אתה יכול לעשות זאת אם אתה מחפש סוגים שוניםנוגדנים בדם החולה.
נוגדנים נגד עגבת מסוג M (IgM) מופיעים זמן קצר לאחר ההדבקה והם הרבה יותר מהירים מאשר IgG. מאפשר לזהות אותם ניתוח לקליטת RIF של עגבת IgM. אם התוצאות של תגובה זו חיוביות, אז אנחנו יכולים לדבר על זיהום לאחרונה. כך שניתן להבחין בין מקרים של זיהום חוזר לבין הישנות או זיהום של הילד לאחר הלידה.
בהתבסס על התוצאות של שיטה זו של ניתוח RIF, הם גם מסיקים כי הטיפול בעגבת מוקדמת יעיל.
אם אתה חושד בעגבת, פנה לרופא מנוסים מנוסה.
עגבת מלווה בתסמינים רבים ויש לה מספר גדול שלצורות קליניות. ההכרה בה מבוססת על בדיקה קלינית ומעבדתית מקיפה של המטופל. ניתוח כללידם לעגבת נושא מעט מידע, ולכן הוא אינו משמש לאבחון המחלה.
ניתן לקחת את החומרים הבאים לניתוח:
- דם מאצבע ווריד;
- משקה חריף - נוזל מוחי;
- צ'נקר קשה (אולקוס) ניתנת להסרה;
- אזורים של בלוטות לימפה אזוריות.
בחירת החומר ושיטת האבחון תלויה בשלב המחלה. על אילו בדיקות ניתנות לעגבת נדבר בחלק הבא.
סיווג שיטות לאבחון מעבדתי של המחלה
בשלב הראשוני ניתן להשתמש בשיטה הבקטריוסקופית, המבוססת על קביעת הפתוגן - טרפונמה חיוורת - במיקרוסקופ. בעתיד, נעשה שימוש נרחב בבדיקות סרולוגיות המבוססות על קביעת אנטיגנים מיקרוביאליים ונוגדנים המיוצרים על ידי הגוף בחומר ביולוגי.
מחקר בקטריולוגי אינו מבוצע, שכן הגורם הסיבתי של עגבת גדל בצורה גרועה מאוד במדיה תזונתית בתנאים מלאכותיים.
כל השיטות לגילוי טרפונמה, כלומר סוגי בדיקות לעגבת, מחולקות לשתי קבוצות גדולות:
1. ישיר, שמזהה ישירות את החיידק עצמו:
- מיקרוסקופיה של שדה כהה (זיהוי של טרפונמה על רקע כהה);
- RIT-test - הדבקה של ארנבות בחומר הבדיקה;
- פולימראז תגובת שרשרת(PCR) שמזהה חלקים מהחומר הגנטי של מיקרואורגניזם.
2. עקיף (סרולוגי), מבוסס על זיהוי נוגדנים לחיידק, המיוצרים על ידי הגוף בתגובה לזיהום.
בדיקות סרולוגיות מחולקות לשתי קבוצות
לא עסקית:
- תגובה לקיבוע משלים עם אנטיגן קרדיוליפין (RSKk);
- תגובה מיקרו-משקעים (RMP);
- בדיקת פלזמה מחודשת מהירה (RPR);
- בדיקה עם טולואידין אדום.
טרפונמל:
- תגובה לקיבוע משלים עם אנטיגן טרפונמל (RSKt);
- תגובת immobilization treponem (RIT או RIBT);
- תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF);
- תְגוּבָה המאגלוטינציה פסיבית(RPGA);
- בדיקת אנזים חיסונית (ELISA);
- אימונובלוטינג.
שיטות הניתוחים הללו מורכבות למדי, ולכן נתמקד בעיקר במתי הן מבוצעות ובאיזה מידע מדויק הן נותנות.
נגיד מיד שהבסיס לאבחון עגבת הוא שיטות סרולוגיות. מה שם הבדיקה לעגבת: בכל מקרה הבדיקה עשויה לכלול טכניקות שונות. להלן נתאר אותם ביתר פירוט.
מבחנים ישירים
הגילוי שלהם תחת מיקרוסקופ מוכיח באופן משכנע את נוכחות טרפונמה. ההסתברות לעגבת במקרה זה מגיעה ל-97%. עם זאת, ניתן לזהות חיידקים רק ב-8 חולים מתוך 10, כך שבדיקה שלילית אינה שוללת את המחלה.
האבחון מתבצע בתקופות ובתקופות שבהן יש צ'אנקר קשה או פריחה בעור. בשחרור של אלמנטים מדבקים אלה, הם מחפשים פתוגנים.
יותר יעיל, אבל גם יקר יותר ו ניתוח מורכב- איתור טרפונמות לאחר טיפול מקדים בהן בנוגדנים פלואורסצנטיים. אלו חומרים ש"נדבקים" לחיידקים ויוצרים את ה"זוהר" שלהם בשדה המיקרוסקופ.
רגישות השיטות יורדת עם משך זמן ארוך של המחלה, טיפול בכיבים ופריחה בחומרי חיטוי וכן לאחר הטיפול.
השיטה הביולוגית לאבחון RIT היא מאוד ספציפית, אך יקרה, והתוצאה מתקבלת רק באמצעות במשך זמן רבכאשר בעל חיים נגוע מפתח מחלה. נכון לעכשיו, השיטה כמעט ואינה בשימוש, אם כי היא למעשה המדויקת מכולן. בדיקת דם מצוינת לעגבת לאיתור חומר גנטי טרפונמה - PCR. המגבלה היחידה שלו היא העלות הגבוהה היחסית של אבחון.
שיטות סרולוגיות
בדיקות לא טרפונמאליות
RSKk ו-RMP
המפורסמת מבין הבדיקות הללו היא תגובת וסרמן. זו הדרך אבחון מהיר(ניתוח מהיר לעגבת), המבוסס על תגובה דומה של נוגדנים מדם של אדם חולה לטרפונמות עצמם ולקרדיוליפין המתקבל מלב בקר. כתוצאה מאינטראקציה זו של נוגדנים וקרדיוליפין, נוצרים פתיתים.
ברוסיה הניתוח הזהכמעט לא בשימוש. הוא הוחלף בתגובת המיקרו-משקעים. החיסרון של השיטה הוא הספציפיות הנמוכה שלה. ניתוח חיובי כוזבדם לעגבת נמצא בשחפת, מחלות דם, זאבת אדמנתית מערכתית, במהלך הריון, לאחר לידת ילד, במהלך דימום וסת ובמקרים רבים אחרים. לכן, עם RW חיובי, יותר שיטות מדויקותאבחון.
לאחר ההדבקה, התגובה הופכת חיובית לאחר חודשיים. עם עגבת משנית, זה חיובי כמעט בכל החולים.
לתגובת המיקרו-משקעים, שהחליפה את תגובת וסרמן, יש מנגנון דומה. זה זול, קל לביצוע, מהיר להערכה, אבל יכול גם לתת תוצאה חיובית שגויה. שתי בדיקות אלו משמשות כמבחני מיון.
RMP הופך חיובי חודש לאחר הופעת צ'אנקר קשה. ליישומו, נעשה שימוש בדם מאצבע.
האם בדיקת עגבת יכולה להיות שגויה? בהחלט כן, במיוחד כשמשתמשים בבדיקות לא טרפונמאליות.
גורמים לבדיקות חיוביות כוזבות חריפות בעת שימוש ב-RMP:
- מחלות זיהומיות חריפות;
- דלקת ריאות;
- אוטם שריר הלב;
- שבץ;
- פציעה והרעלה.
תוצאות חיוביות כוזבות כרוניות מתרחשות לעתים קרובות עם המחלות הבאות:
- שַׁחֶפֶת;
- ברוצלוזיס;
- לפטוספירוזיס;
- סרקואידוזיס;
- מחלות ראומטיות;
- מחלת הנשיקה מדבקת;
- גידולים ממאירים;
- סוכרת;
- שחמת הכבד ואחרים.
אם יש ניתוחים שנויים במחלוקת, נעשה שימוש בבדיקות סרולוגיות טרפונמל כדי להבהיר את האבחנה.
בדיקת RPR וטולואידין אדום
בדיקת הפלזמה המהירה מחדש (בדיקת rpr עגבת) היא סוג נוסף של תגובה עם אנטיגן קרדיוליפין. הוא משמש במקרים הבאים:
- מיון אוכלוסין;
- חשד לעגבת;
- בדיקת תורמים.
אנו מזכירים גם את הבדיקה עם טולואידין אדום. כל השיטות הללו משמשות להערכת יעילות הטיפול. הם חצי כמותיים, כלומר, הם יורדים עם ההחלמה ומתגברים עם הישנות הזיהום.
תוצאות שליליות של בדיקות שאינן טרפונמל מצביעות ככל הנראה על כך שלנבדק אין עגבת. לכן, בדיקות לא טרפונמל משמשות להערכת הריפוי. הניתוח הראשון כזה צריך להיעשות 3 חודשים לאחר השלמת מהלך הטיפול.
בדיקות טרפונמל
בדיקות טרפונמל מבוססות על שימוש באנטיגנים טרפונמלים, מה שמעלה משמעותית את ערכם האבחוני. הם חלים במצבים הבאים:
- בדיקת סקר חיובית (תגובת מיקרו-משקעים);
- זיהוי תוצאת סקר חיובית כוזבת;
- חשד לעגבת;
- אבחון של צורות סמויות;
- אבחון רטרוספקטיבי כאשר החולה חלה במחלה מוקדם יותר.
RIT ו-RIF
האיכות הגבוהה ביותר (רגישים מאוד וספציפיים מאוד) הם RIT ו-RIF. החסרונות של שיטות אלו הם מורכבות, משך זמן, הצורך בציוד מודרני וכוח אדם מיומן. ברוב החולים הנרפאים, בדיקות הטרפונמל נשארות חיוביות במשך שנים רבות ולכן לא ניתן להשתמש בהן כקריטריון לריפוי.
RIF הופך חיובי חודשיים לאחר ההדבקה. אם הוא שלילי, החולה בריא; אם הוא חיובי, ההסתברות למחלה גבוהה.
RIT משמש לעתים קרובות במיוחד בחולים עם סרטן שלפוחית השתן חיובי כדי לשלול או לאשר מחלה. זה רגיש מאוד ומאפשר לך לדעת בדיוק רב אם החולה סובל עגבת או לא. עם זאת, הניתוח הופך חיובי רק שלושה חודשים לאחר ההדבקה.
אימונובלוטינג
אימונובלוטינג רגיש אפילו יותר מ-RIF, אך פחות רגיש מ-RPHA. הוא משמש לעתים רחוקות, בעיקר לאבחון של עגבת יילודים.
השיטות המפורטות אינן מתאימות להקרנה, כלומר לזיהוי מהיר של המחלה, מכיוון שהן הופכות לחיוביות מאוחר יותר מתגובת המיקרו-משקעים.
ELISA ו-RPGA
שיטות מודרניות ואינפורמטיביות סטנדרטיות לאבחון עגבת - ELISA ו- RPHA. הם זולים, מותקנים במהירות ונבדקים בכמויות גדולות. בדיקות אלו עשויות לשמש כדי לאשר את האבחנה.
הניתוח של RPHA הופך חיובי עם עגבת סרו-חיובית ראשונית, כלומר, עם הופעת צ'אנקר קשה (חודש לאחר ההדבקה). זה חשוב במיוחד באבחון של מאוחר, ו צורות מולדותמחלות. עם זאת, יש להוסיף ל-RPHA לפחות בדיקה אחת שאינה טרפונמלית ואחת טרפונמלית לאבחון מדויק. בדיקה משולשת כזו היא הניתוח המהימן ביותר עבור עגבת. החיסרון של RPGA הוא השימור תגובה חיוביתבמשך זמן רב, מה שלא מאפשר להשתמש בבדיקה כקריטריון לריפוי.
בדיקת ELISA לאיתור עגבת הופכת לחיובית כבר שלושה שבועות לאחר המחלה. החיסרון של ELISA הוא שהיא יכולה להיות שקר. תגובה חיובית כוזבת מתרחשת כאשר מחלות מערכתיות, הפרעות מטבוליות, כמו גם בילדים שנולדו לאמהות חולות.
פגמים שיטות סרולוגיותהוביל לפיתוח השיטות המתקדמות ביותר שאינן נותנות שגיאות, אך עד כה הן יקרות ונעשה בהן שימוש נדיר - כרומטוגרפיה גז וספקטרומטריית מסה.
אלגוריתם לאבחון זיהום עגבת בשלבים שונים
בתקופה הסרונגטיבית הראשונית (עד חודשיים לאחר ההדבקה), חיפוש אחר טרפונמה מתבצע בשדה חשוך או באמצעות נוגדנים ניאון.
בעגבת סרו-חיובית ראשונית, שניונית וסמויה, משתמשים ב-RMP ו-ELISA, ו-RPHA משמש כבדיקת אישור.
בחולים עם הישנות של עגבת משנית, נבדקים אלמנטים של הפריחה, ומנסים לבודד מהם טרפונמה לבדיקה מיקרוסקופית.
בתקופה השלישונית RMP בשליש מהחולים הוא שלילי. ELISA ו-RPHA חיוביים, אך הם עשויים שלא להצביע על עגבת שלישונית, אלא על מחלה קודמת. ניתוח חיובי חלש עשוי להצביע על החלמה מאשר עגבת שלישונית.
בעת אבחנה של "עגבת מולדת", נלקחים בחשבון נוכחות המחלה אצל האם, ההבדל בשיעורי ה-RMP אצל האם והילד, ELISA ו-RPHA חיוביים ביילוד ואימונובלוטינג.
נשים בהריון חייבות להיבדק לאיתור עגבת, במיוחד כאלו שכבר עברו לידה עם עובר מת, הריון לא מתפתח, הפלות מוקדמות. הם מבצעים RMP, ELISA, RPGA. יש לבדוק את נוכחות המחלה ולפני הפסקת הריון.
כללים לקבלת ניתוח לעגבת
כדי לקבל הפניה למעבדה, עליך לפנות לרופא המחוזי שלך. אם רוצים לבצע את הבדיקה מהר יותר, ניתן לעשות זאת במעבדה פרטית ללא הפניה (למשל, מעבדות אינביטרו עושות ניתוח לעגבת במהירות ובאנונימיות).
איך להיבדק לעגבת?דם ניתן בבוקר, על קיבה ריקה. אתה יכול לשתות רק מים טהורים.
הכנה:יומיים לפני הבדיקה יש להוציא מהתזונה מזונות שומניים ובעיקר אלכוהול.
איך מתבצע הניתוח?בדרך הרגילה מאצבע או וריד קוביטלי.
כמה עושים בדיקת עגבת?תוצאת הבדיקה מוכנה בדרך כלל למחרת. את התמליל ניתן לקחת מרופא או במעבדה.
עד כמה הניתוח תקף?עד שלושה חודשים.
ניתוח נוזל מוחי
במקרים מסוימים, ניתוח CSF נלקח כדי לאבחן neurosyphilis.
בדיקה זו נקבעת לכל החולים עם עגבת סמויהאם יש להם סימנים לפתולוגיה של מערכת העצבים, כמו גם עם נוירוסיפיליס סמוי ומאוחר.
בנוסף, הניתוח מתבצע בכל החולים לאחר ההחלמה, תוך שמירה על תגובותיהם הסרולוגיות החיוביות. כבר כתבנו במאמר שלנו שתופעה זו מתרחשת לעתים קרובות למדי.
ניתוח CSF עבור עגבת נקבע ומבוצע רק על ידי רופא.
נוזל מוחי מתקבל על ידי ניקור בין שתי חוליות מוֹתָנִי. הוא נאסף ב-4 מ"ל בשתי מבחנות. לאחר מכן מטפלים באתר הניקוב ביוד ומכוסים בתחבושת סטרילית. לאחר הדקירה, המטופל צריך לשכב על הבטן עם קצה הרגל המורם של המיטה לפחות 3-4 שעות, ואז הוא יכול לשכב על הצד. מנוחה במיטהלאחר פנצ'ר זה מוצג תוך יומיים.
נוזל המוח השדרתי מהמבחנה הראשונה נבדק באמצעות תגובות מקובלות לתכולת חלבון, תאים וקביעת סימני דלקת קרום המוח (דלקת קרומי המוח).
נוזל המוח השדרתי מהמבחנה השנייה נבדק לאיתור תכולת נוגדנים לטרפונמה באמצעות תגובת Wasserman, RMP, RIF ו-RIBT, עליהן עמדנו לעיל.
על פי חומרת ההפרות, ישנם ארבעה סוגים של שינויים בנוזל השדרה. בניתוחם, הרופא יכול להסיק שיש צורות שונות של נזק למערכת העצבים (נוירוסיפיליס וסקולרי, דלקת קרום המוח עגבת, עגבת מנינג-וסקולרית, טבליות גב, נוירוסיפיליס מזנכימלי מאוחר), כמו גם התאוששות של המטופל עם בדיקות סרולוגיות חיוביות.
גודל גופן
צו משרד הבריאות של ברית המועצות מיום 02-09-85 1161 על שיפור האבחון הסרוולוגי של עגבת (יחד עם הנחיות ל... רלוונטי לשנת 2018
שיטת הגדרת RIF - ABS
סרום דם נבדק
דם להשגת סרום דם נלקח מהווריד הקוביטלי למבחנה נקייה ויבשה בנפח 5 מ"ל ומעובד באותו אופן כמו להגדרת תגובת וסרמן. סרום הדם מושבת פעם אחת בטמפרטורה של 56 מעלות למשך 30 דקות. בשל העובדה ש-RIF-abs ממוקם לא סטרילי, אין צורך בשימוש בכלים סטריליים ועמידה בתנאי סטריליות בעת אחסון סרת דם. זה חשוב רק לשימור ארוך יותר של סרת הדם לפני המחקר.
כאנטיגן, משתמשים בהשעיה של טרפונמות חיוורות פתוגניות של זן ניקולס מאורכיטיס של ארנב בן 7 ימים. ארנבות זכרים בריאים עם תוצאות שליליות של Wasserman ו-RIT נדבקים תוך אשכים, וכאשר מתרחשת אורכיטיס, מוסרות טרפונמות חיוורות מהאשכים באותו אופן כמו במקרה של קבלת אנטיגן ל-RIT. ההשעיה המתקבלת של טרפונמות חיוורות נשפכת מחתיכות האשך למבחנות סטריליות עם פקקי כותנה ונשארת במקרר בטמפרטורה של 4 מעלות למשך יממה, ולאחר מכן היא מופרדת מהמשקעים ומאוחסנת באותם תנאים לכל אורך החיים. תקופת השימוש.
השגת ואחסון האנטיגן דורשת עמידה בתנאי הסטריליות, tk. עם אותו אנטיגן, התגובה יכולה להתבצע תוך 2-4 חודשים. עבור האנטיגן, יש לבחור את התרחיף שבו לא נצפית אגלוטינציה של טרפונמה ויש כמות מספקת מהם. את האנטיגן ניתן להשיג באמפולות ממעבדות אחרות. לפני כל תגובה, התרחיף מעורבב היטב ונבדק במיקרוסקופ עם מעבה שדה כהה כדי לקבוע את צפיפותו. כדי להגדיר RIF-abs, יש צורך להחזיק תרחיף המכיל 40-60 טרפונמות בשדה הראייה הכהה; אם יש תרחיף עבה יותר, יש לדלל אותו.
כחומר ספיגה עבור RIF-abs, ניתן להשתמש באנטיגן טרפונמל בעל צלילים עבור RSK, המיוצר על ידי מפעל קובנה לייצור תכשירים חיידקיים של משרד הבריאות של ברית המועצות. זוהי תרחיף של תערובת של טרפונמות חיוורות תרבותיות של זנים V, VII, VIII, IX ו- Reiter שהושמדו באולטרסאונד. יש לבצע טיטרציה של כל סדרה של סורבנט לפני השימוש ב-RIF-abs למטרות אבחון.
טיטרציה של חומרי ספיגה
סורבנטים עוברים טיטרציה על סרת הדם של חולים עם עגבת, ונותנים תוצאה חיובית חדה (4+) וחלשה (2+) ב-RIF בדילול של 1:5, כמו גם על סרת הדם של אנשים חופשיים ממחלת העגבת. זיהום, נותן תוצאה שלילית ב-RIF-5 וחיוביות לא ספציפית (2+ או יותר).
דוגמה לקביעת טיטר של סורבנט
כל הסורבנט מדולל במאגר פוספט, pH = 7.2, 2, 3, 4 פעמים או יותר. 3 סרחי דם נלקחים מחולי עגבת, אחד מהם נותן תוצאה חיובית מאוד (4+) ב-RIF-5, 2 - חיובי חלש (2+), ו-5 סרחי דם מאנשים נקיים מזיהום עגבת, 3 מהם לתת תוצאות לא ספציפיות ו-RIF-5 (2+ ועוד). כל סרום הדם מדוללים 5 פעמים עם חומר סופג מדולל 2, 3, 4 פעמים או יותר עם חיץ פוספט. לאחר מכן נבדק סרום הדם בתגובה. לאחר התחשבות בתוצאות, נבחר דילול הסורבנט, בו סרבת הדם הנספג של חולי עגבת שומרת על דרגת חיוביות דומה לזו המתקבלת עם סרת דם מדוללת במאגר פוספט, וסרת הדם של אנשים חופשיים מ. זיהום עגבת לא זוהר. דילול זה של הסורבנט הוא הטיטר שלו.
הטיטר של הסורבנט במקרה זה היה דילול של 1: 3, שבו כל סמת הדם של חולים עם עגבת שמרה על מידת החיוביות שהושגה בביקורת, ובמקביל, החיוביות הלא ספציפית של דם לא עגבת. sera הוסר בצורה מהימנה.
סרום זוהר נגד מינים
סרום דם מסומן פלואורוכרום מבעלי חיים שחוסנו בחלבון סרום אנושי נדרש כדי לחקור סרום דם אנושי ב-RIF-abs. סרום זוהר מיובש בהקפאה מומס בתנאים סטריליים במים מזוקקים בנפח המצוין על תווית האמפולות, מוזג לשפופרת סטרילית עם פקק גומי ומאחסן ב-4 מעלות צלזיוס למשך 1-2 חודשים במהלך השימוש.
ביום התגובה, הכמות הנדרשת של סרום זה מדוללת לפי הטיטר במים מזוקקים. דילול סרום העבודה המצוין על התווית אינו מתאים להגדרת תגובה למטרת סרודיאגנוזיס של עגבת, ולכן יש לקבוע מחדש את הטיטר של כל סדרה.
טבלה מס' 13
תוצאות של טיטרציה של סופגים
| סרת דם נבדקה | תוצאות RIF-5 | |||
| דילול של סרת דם 1: 5 חיץ (K) | דילול סרת דם 1:5 סורבנט בדילול | |||
| 1: 2 | 1: 3 | 1: 4 | ||
| סרום דם של חולה עם עגבת | ||||
| N 1 | 4+ | 3+ | 4+ | 4+ |
| N 2 | 2+ | 1+ | 2+ | 2+ |
| N 3 | 2+ | 2+ | 2+ | |
| סרום דם לא עגבת | ||||
| N 1 | 3+ | 1+ | 2+ | |
| N 2 | 2/3+ | 2+ | ||
| N 3 | 2+ | 2+ | ||
| N 4 | 2+ | 2+ | ||
| N 5 | ||||
טיטרציה של סרום זוהר נגד מינים
הם לוקחים 5 סרי דם מחולי עגבת ו-5 סרי דם מאנשים בריאים, מדללים אותם 5 פעמים בחומר סופח (בהתחשב בטיטר שלו) ומגיבים באמצעות דילולים שונים של סרום זוהר בשלב II נגד גלובולינים בסרום אנושי מהסדרה שלהם. טיטר נקבע. יש לקחת בחשבון שהטיטר של סרה זוהרת המיוצר כיום על ידי IEM. N.F. Gamalei, משתנה כאשר RIF-abs מוגדר מ- 1: 100 ל- 1: 140. כאשר לוקחים בחשבון את התגובה, יש להתייחס לטיטר המקדים של סרום זוהר שדילול, בשימוש עם סרת דם חיובית, זוהר טוב של טרפונמות התקבל, ועם זוהר שלילי של האנטיגן לא התקבל. דילול גבוה יותר של סרום זוהר מהטיטר מוביל לירידה ברגישות התגובה, וקטן יותר לירידה בספציפיות. לאחר קביעת הטיטר המקדים, יש לחדד אותו על ידי יותרסרחי דם חיוביים ושליליים. הטיטר הסופי יכול להיחשב זה שנבדק על 100 סרי דם, ולפחות 20 מהם צריכים להיות מחולי עגבת.
כדי למנוע נביטה לאחר דילול של סרום זוהר יבש במים מזוקקים, יש צורך להוסיף לו מורתיולט בשיעור של 1 נפח מתמיסת 1:1000 שלו ל-9 נפחים של סרום זוהר. בעת נטילת אמפולות חדשות מאותה סדרה, יש לבדוק ולברר את הטיטר רק עבור 10 סרי דם חיוביים ושליליים ידועים.
דוגמה לקביעת הטיטר הראשוני של סרום אנטי-מינים זוהר
הכן 60 תרופות, מספר אותן מ-1 עד 60. קח 10 סרחי דם - 5 מחולי עגבת, 5 מאנשים בריאים. כל סרת הדם מדוללת 5 פעמים עם חומר סופח מדולל אך טיטר.
על ממוספרים 1-10, 11-20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60 תרופות מוחלות בשלב הראשון של התגובה עם אותם 10 סרי דם, מדוללים 5 פעמים עם חומר סופח. בשלב השני של התגובה, סרום זוהר מדולל 1:100 מוחל על 1-10 תכשירים, 1: 110 עד 11-20, 1: 120 עד 21-30, 1: 130 עד 31-40, 1: 130 עד 41-50: 140, ב-51-60 - 1: 150.
טכניקת הגדרת RIF-abs
מכינים תכשירים מהאנטיגן על שקופיות זכוכית דקות, נטולות שומן היטב, על צד הפוךאילו עיגולים בקוטר 0.7 ס"מ מסומנים בחותך זכוכית (10 עיגולים על שקף זכוכית 1). בתוך המעגל מוחל על הזכוכית תרחיף אנטיגן של טרפונמות חיוורות. קצה אטום של פיפטת פסטר בתנועה מעגליתהתרחיף מופץ בתוך המעגל, מיובש באוויר ומקובע במשך 10 דקות באצטון טהור מבחינה כימית. ואז התרופות ממוספרות. סרת דם בדיקה לא פעילה מדוללת 5 פעמים עם חומר סופג מדולל בטיטר עם תמיסת חיץ. במתלה מניחים מספר מבחנות, שמספרן ומספרן תואמים למספר ולמספר של סרה הדם שנבדקה. הסורבנט המדולל בטיטר נשפך למבחנות עם פיפטה ב-0.2 מ"ל, ואז מוסיפים 0.05 מ"ל מכל סרום הדם הנבדק ומערבבים היטב. דילול סרום הדם יכול להתבצע באמצעות מכשיר פלורינסקי. סרום דם מדולל בסופח נמרח על האנטיגן כך שיכסה באופן אחיד את המריחה, ואת התכשירים מכניסים לתא לח, שנסגר במכסה ומכניסים לתרמוסטט ב-37° למשך 30 דקות (שלב התגובה הראשון). ). לאחר השלב הראשון, התכשירים נשטפים בקפידה ב-2 מנות חיץ פוספט, ובחלק השני מניחים את התכשירים למשך 10 דקות, מיובשים ולאחר מכן שוב שמים בתא לח, מורחים סרום זוהר מדולל בטיטר. ונשאר בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות (תגובות שלב II). בסיום השלב השני, התכשירים נשטפים במאגר פוספט כמתואר לעיל, מיובשים ומורחים על פני המריחות טיפה אחר טיפה של שמן טבילה לא זוהר (דימתיל פתלט).
בדיקת התכשירים מתבצעת במיקרוסקופ פלורסנט עם מנורת כספית-קוורץ DRSh-250 עם מערכת טבילה, עינית 4X או 5X, מסננים SZS-7 או 14, FS-1. BS-8 ו-ZhS-18 או T-2N. החשבון על התגובה מתבצע על ידי הערכת הזוהר של טרפונמה חיוורת. ב-RIF-abs, סרי דם נחשבים חיוביים, המעניקים זוהר ב-4+, 3+ ו-2+. זוהר ירוק-צהוב מבריק מדורג 4+, בהיר - 3+, זוהר חלש 2+. סרי דם נחשבים שליליים אם הם נותנים זוהר של 1+ (טרפונמות בתכשיר צבועים בעוצמה רבה יותר מהרקע) או לא נותנים אותו.
בכל ניסוח של RIF-abs, יש להשתמש בפקדים הבאים:
שליטה חיובית חדה. סרום הדם של חולה עם עגבת, נותן זוהר של 4+ בדילול עם חוצץ 5 פעמים. בדילול 5 פעמים עם חומר סופג, סרום הדם לא אמור לאבד את מידת החיוביות ביותר מ-1+.
שליטה חיובית חלשה. סרום דם מלא או מדולל של חולה עם עגבת, נותן דרגה חלשה של זוהר אנטיגן של 2+ בדילול עם חיץ 5 פעמים. כאשר מדולל בחומר סופג, יש לשמר את החיוביות שלו.
בקרה לא ספציפית. סרום דם לא עגבת, אשר בדילול עם חוצץ נותן פלואורסצנטי של לפחות 2+. כאשר מדולל בחומר סופג, יש לבטל את החיוביות שלו.
ניתן להגדיר בקרות של אנטיגן, סרום סורבנטי, זוהר רק כאשר משתמשים בסדרות חדשות של מרכיבים אלה.
שיטת הגדרת RIF-abs עם דם נימי
הגדרת RIF-abs אפשרית לא רק עם סרום דם, אלא גם עם דם שנלקח מאצבע. ניתן להשתמש בשינוי זה של ה-RIF-abs בעת בדיקת ילדים לאיתור עגבת, כאשר קשה להשיג דם מוריד במבוגרים, וכאשר מבצעים בדיקות המוניות של מחלות שונות לאיתור עגבת.
בעת קביעת RIF-abs עם דם, משתמשים באותם מרכיבי תגובה כמו בעת קביעת RIF-abs עם סרום דם (אנטיגן, סורבנט, סרום זוהר). הטיטר של סרום זוהר נקבע על פי התכנית לעיל, אך כאשר מגדירים תגובה עם דם. לאחר ניקוב האצבע של המטופל, הדם לבדיקה נלקח במיקרופיפטה לסימון של 0.1 מ"ל, נשף במהירות למבחנה המכילה 0.3 מ"ל מים מזוקקים, מערבבים היטב בפיפטה ומסננים דרך מסנן נייר הלח במים מזוקקים . הגדרת תגובה עם דם מדולל אפשרית הן ביום נטילתו, והן לאחר 1-2 ימים, בתנאי שהוא מאוחסן ב-4 מעלות.
מיד לפני הגדרת התגובה מוסיפים 0.1 מ"ל מכל הסורבנט לכל דגימות הדם הכלולות בהגדרת התגובה, מערבבים עם פיפטה ומנערים ומכניסים לתרמוסטט ב-37° למשך 30 דקות. לאחר מכן מורחים את הדם שטופל בסורבנט על מריחות אנטיגן ומניחים בתא לח ב-37 מעלות (שלב 1 של התגובה). לאחר תום תקופת החשיפה, התכשירים נשטפים בחלק הראשון של חיץ פוספט כך שלא יהיו עקבות דם על השקופיות והם מונחים למשך 10 דקות בחלק השני של המאגר. לאחר ייבוש המריחות, השלב השני של התגובה מתבצע. במקביל, מורחים על התכשירים סרום זוהר כנגד גלובולינים אנושיים, מדולל לפי הטיטר שנקבע לשינוי זה של ה-RIF. השקופיות בתא הלחות ממוקמות שוב בתרמוסטט ב-37 מעלות.
לאחר 30 דקות, התכשירים נשטפים שוב ב-2 מנות של חיץ פוספט למשך 10 דקות, מיובשים ומורכבים למיקרוסקופ פלואורסצנטי. חקר התרופות ורישום תוצאות התגובה מתבצע באותו אופן כמו בעת הגדרת RIF-abs עם סרום דם.
שיטת הגדרת RIF-200
שיטת ההגדרה של RIF-abs ו-RIF-200 קרובה. בעת הגדרת ה-RIF-200, עיבוד סרום הדם הנבדק, הכנת האנטיגן, הכנת הסרום הזוהר נגד המינים והטיטרציה שלו מתבצעים באותו אופן כמו בעת הגדרת ה-RIF-abs. יש לקחת בחשבון רק שהטיטרים של הסרום הזוהר המיוצר כיום ב-RIF-200 נעים בין 1:20 ל-1:50.
טכניקת הגדרה RIF-200
סרחי הדם שנבדקו מדוללים 200 פעמים עם חיץ פוספט. לשם כך מניחים 3 שורות של מבחנות במתלה, שמספרן ומספורן בכל שורה תואמים למספר ולמספור של סרת הדם הנבדקת ביומן העבודה. בשורה הראשונה יוצקים סרחי דם מלאים בבדיקה, בשורה השנייה יוצקים 0.45 מ"ל חיץ למבחנות, בשורה השלישית 0.95 מ"ל חוצץ. בשורה השנייה מכינים דילול פי 10 של סרום דם, עבורו נלקחים 0.05 מ"ל מסרום הדם הנבדק מכל צינורית בשורה הראשונה עם פיפטה מדורגת נפרדת של 1 מ"ל, המועברת לשפופרת המתאימה של השנייה. שורה ומעורבבת עם המאגר הזמין שם. מכל צינורית בשורה השנייה משתמשים באותה פיפטה להעברת 0.05 מ"ל מסרום הדם הנבדק מדולל פי 10 לתוך המבחנה המתאימה בשורה השלישית ומתקבל דילול של פי 200.
בעת הגדרת תגובה לתכשירים המונחים בתא לח, מורחים את סרום הדם הנבדק מדולל 200 פעמים כך שמספרם המצוין על המבחנות תואם את המספרים על שקופיות הזכוכית. לאחר מריחה על תכשירי סרום דם, החדר הלח מונח למשך 30 דקות בתרמוסטט בטמפרטורה של 37° (שלב I של התגובה). לאחר מכן שוטפים את התכשירים במשך 10 דקות ב-2 מנות של המאגר ומייבשים. לאחר מכן, הם ממוקמים שוב בתא לח וסרום זוהר מדולל בטיטר מוחל על הכל (שלב II של התגובה). השלב השני מתבצע במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן שוטפים את התכשירים למשך 10 דקות, מיובשים ומותקנות למיקרוסקופ פלואורסצנטי.
ההתחשבנות בתוצאות של RIF-200 מתבצעת באותו אופן כמו RIF-abs.
במקרה שבו רופאים מעוניינים בטיטר של נוגדנים פלואורסצנטיים בסרום הדם של המטופל, יש להשתמש ב-RIF-abs וב-RIF-200 עם דילול סדרתי של סרום הדם שנבדק, ויש לראות בדילול הגבוה ביותר של נוגדנים פלואורסצנטיים. סרום דם, שעדיין נותן תוצאה חיובית של התגובה. נהוג לייעד טיטר כמספר המאפיין את דרגת הדילול של סרום הדם הנבדק, למשל 5, 10, 20, 40 וכו'. (RIF-abs) או 200, 400, 800 וכו'. (RIF-200).
בעת הגדרת שני השינויים של התגובה לדילול של סרום הדם שנבדק ולשטיפת התכשירים לאחר שלבים I ו-II, יש להשתמש במאגר פוספטים בהרכב הבא: 1 ליטר מים מזוקקים, 6.8 גרם נתרן כלורי, 1.48 גרם של נתרן פוספט מוחלף, 0. 43 גרם של אשלגן פוספט חד-מוחלף (PH = 7.2). הפתרון המוכן מאוחסן בטמפרטורת החדר לא יותר משבוע.
בשל האפשרות לקבל תוצאות שליליות בנוכחות נוגדנים פלואורסצנטיים, אין לבדוק דם וסרום דם ב-RIF-abs ו-RIF-200 במהלך הטיפול בחולים עם פניצילין.
טכניקת הגדרת RIF-c
אבחון מוקדם של נגעים במערכת העצבים בעגבת הוא נושא דחוף במאבק במחלה זו. בשל העובדה ש-RIF-c רגיש יותר מכל הבדיקות האחרות המשמשות לאבחון CSF של עגבת, ניתן להמליץ על שינוי זה של RIF לאבחון של נגעים עגבתיים של מערכת העצבים המרכזית בכל צורות העגבת.
לשלב RIF-c, אותו אנטיגן, סרום זוהר, משמש לשלב RIF-abs ו-RIF-200 עם סרום דם. גם קביעת נוגדנים פלואורסצנטיים בנוזל השדרה ובנסיוב הדם ורישום התגובה דומים.
נוזל המוח השדרתי מוכנס לתגובה ללא הפעלה ושלם. לפני הגדרת התגובה, ניתן לאחסן אותו בתא ההקפאה של המקרר במבחנות מתחת לפקקי גומי עד שבועיים. ההפשרה מתבצעת בטמפרטורת החדר.
טכניקת הגדרת RIF-c
בשלב I של התגובה, מורחים על האנטיגן 0.05 מ"ל של נוזל מוחי שדרתי לא מדולל, התכשירים ממוקמים בתא לח למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן הם נשטפים עם חיץ פוספט, pH = 7.2, למשך 10 דקות, מיובשים. בשלב II, סרום זוהר מדולל בטיטר מוחל על התכשירים, אשר עובר טיטרציה בעת הגדרת תגובה עם נוזל מוחי. התכשירים נשמרים בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות בתא לח, שוטפים, מיובשים, מותקן למיקרוסקופ פלואורסצנטי.
מקורות לטעויות
1. אי עמידה בתנאים להכנה, אחסון ריאגנטים והגדרת התגובה.
2. איכות נמוכה של סרום זוהר וקביעה לא מדויקת של הטיטר שלו.
3. מריחת חומר הבדיקה או הסרום הזוהר בעת הגדרת התגובה לא על התרופה, אלא על הצד השני של שקף הזכוכית.
4. הגדרת תאורה שגויה במיקרוסקופ הפלורסנט.
5. איכות ירודה של האנטיגן.
