Kumbso testas– prie paviršiaus pritvirtintų arba plazmoje ištirpusių antikūnų nustatymo tyrimas. Jis naudojamas imunizacijai ir antikūnams prieš raudonuosius kraujo kūnelius nustatyti. Antrasis titulas antiglobulino testas. Jis gali būti tiesioginis arba netiesioginis.

At tiesioginis antiglobulino tyrimas aptinka raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje fiksuotus antikūnus. Atliekama, jei yra įtarimas dėl kitų autoimuninių ligų, pavartojus vaistų (metildopos, penicilino, chinino) ir kt.

Raudonieji kraujo kūneliai buvo įjautrinti in vivo – prie jų jau tvirtai prisirišę antikūnai, o pridėjus antiglobulino serumo (anti-IgG) įjautrintos ląstelės sulipa, o tai matoma plika akimi.

Netiesioginis Kumbso testas nustato anti-eritrocitinius antikūnus kraujo plazmoje, jis atliekamas prieš kraujo perpylimą ir jo metu.

Anti-eritrocitų antikūnai – tai autoantikūnų rūšis, t.y. antikūnų prieš savo audinius. Autoantikūnas atsiranda, kai imuninė sistema nenormaliai reaguoja į tam tikrus vaistus, pavyzdžiui, dideles penicilino dozes.

Raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra įvairių cheminės struktūros(glikolipidai, sacharidai, glikoproteinai ir baltymai), medicinoje vadinami antigenais. Žmogus iš savo tėvų paveldi specifinį antigenų žemėlapį ant kiekvieno raudonojo kraujo kūnelio.

Antigenai sujungiami į grupes ir tada kraujas skirstomas į kelias grupes – pagal AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy sistemą. Žymiausi ir reikšmingiausi gydytojo darbe yra AB0 ir Rh faktorius (Rh).

AB0 sistema

Žmogaus Rh būsena nustatoma pagal šių antigenų buvimą. Ypač svarbus eritrocitų antigenas yra antigenas D. Jei jis yra, tada jie kalba apie Rh teigiamas kraujo RhD, o jei jo nėra – oi Rh neigiamas Rhd.

Jei atitinkamas antikūnas prisijungia prie eritrocitų antigenų, eritrocitas sunaikinamas - hemolizė.

Indikacijos

Pagrindinė indikacija, skirta tiesioginisantiglobulino testas- įtarus hemolizinę anemiją. Dažniausiai atliekama esant pirminėms autoimuninėms ligoms. hemolizinė anemija, hemolizė sergant reumatinėmis, navikinėmis, infekcinėmis ligomis, vaistų sukelta hemolizė.

Jei anemija atsiranda praėjus kelioms dienoms ar mėnesiams po kraujo perpylimo arba užsitęsus geltai naujagimiui, taip pat atliekamas tiesioginis Kumbso testas.

Netiesioginisatliekamas antiglobulino tyrimas prieš kraujo perpylimą ir Rh neigiamos moters nėštumo metu.

Autoimuninė hemolizinė anemija

Autoimuninė hemolizinė anemija (pirminė)– klasikinė autoimuninė liga, kurios priežastys nežinomos. Sutrinka imuninės sistemos sąveika, todėl savo raudonieji kraujo kūneliai suvokiami kaip svetimi. Limfmazgiuose sintetinami IgG klasės (reaguoja esant t 37°C) ir (arba) IgM (esant t 40°C) antikūnai, kurie, prisitvirtinę prie eritrocito paviršiaus, sužadina daugybę fermentų ( komplemento sistema) ir „perforuoja“ eritrocito sienelę, o tai sukelia jo sunaikinimą – hemolizę.

Pirmuosius simptomus sukelia ir raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimas, ir hemoglobino kiekio sumažėjimas. Tarp jų:

• nuovargis, bendras silpnumas, dirglumas
• dusulys
• pilvo ir krūtinės skausmas, pykinimas
• tamsi šlapimo spalva
• nugaros skausmas
• icterinis odos ir gleivinių spalvos pasikeitimas
• raudonųjų kraujo kūnelių skaičiaus sumažėjimas ir

Tiesioginis teigiamas rezultatas Kumbso testai 100% patvirtina autoimuninės hemolizinės anemijos diagnozę, įrodant jos autoimuninę kilmę. Tuo pačiu metu neigiamas rezultatas neleidžia pašalinti diagnozės.

Antrinė hemolizinė anemija

Antrinė autoimuninė hemolizinė anemija ir teigiamas testas Kombai gali pasireikšti sergant šiomis ligomis:

• Evanso sindromas
• pneumonijos infekcija

Teigiamas šių ligų antiglobulino testas yra vienas iš simptomų, o ne diagnozės kriterijus.

Naujagimio hemolizinė liga

Priežastis hemolizinė liga naujagimiai - motinos ir vaisiaus kraujo grupės nesuderinamumas, daugeliu atvejų pagal Rh sistemą, pavieniais atvejais - pagal AB0 sistemą, kazuistiškai - pagal kitus antigenus.

Rh konfliktas išsivysto, jei Rh neigiamos moters vaisius paveldi Rh teigiamą kraują iš tėvo.

Liga naujagimiui išsivysto tik tuo atveju, jei motina jau sukūrė antikūnus prieš atitinkamus antigenus, o tai atsitinka po ankstesnių nėštumų, abortų ir nesuderinamų kraujo perpylimų. Dauguma bendra priežastis suaktyvinanti antikūnų prieš eritrocitų membranos antigenus sintezę – gimdymą (vaisiaus ir motinos kraujavimas). Pirmas gimdymas paprastai vyksta be komplikacijų, tačiau vėlesniais jau pirmomis dienomis po gimimo atsiranda naujagimio hemolizinė liga.

Naujagimio hemolizinės ligos simptomai:

• odos pageltimas
• , ir gleivinės
• padidėjusios kepenys ir blužnis
• kvėpavimo problemos
• viso kūno patinimas
• sužadinimas ir laipsniškas centrinės nervų sistemos slopinimas

Anemija po kraujo perpylimo

Netiesioginis Kumbso testas atliekamas prieš kraujo perpylimą suderinamumui įvertinti, o tiesioginis Kumbso testas – po jo, jei įtariama hemolizė po perpylimo, t.y. esant tokiems simptomams kaip karščiavimas, laistymas (skaitykite toliau). Analizės tikslas – nustatyti antikūnus prieš perpiltus raudonuosius kraujo kūnelius, kurie prisijungė prie recipiento raudonųjų kraujo kūnelių ir yra hemolizės po perpylimo priežastis, taip pat priešlaikinį donoro raudonųjų kraujo kūnelių pašalinimą iš paciento kraujotakos. recipientas (tas, kuris gavo kraują).

Simptomai:

• kūno temperatūros padidėjimas
• odos bėrimas
• nugaros skausmas
• raudona
• pykinimas
• galvos svaigimas

Dekodavimas

Verta prisiminti, kad pagrindinės tiesioginių ir netiesioginių antiglobulino tyrimų iššifravimo taisyklės yra vienodos. Skiriasi tik antikūnų vieta – kraujyje ar ant raudonųjų kraujo kūnelių.

• Jeigu tiesioginis Kumbso testas yra neigiamas– tai reiškia, kad antikūnas „nesėdi“ ant raudonųjų kraujo kūnelių, todėl reikia toliau ieškoti simptomų priežasties ir atlikti netiesioginį Kumbso testą.
• jei teigiamas Kumbso testo rezultatas nustatomas po kraujo perpylimo, infekcijų, vaistų – pozityvumas išlieka iki 3 mėnesių (raudonųjų kraujo kūnelių gyvenimo trukmė 120 dienų – 3 mėn.)
• teigiamas antiglobulino tyrimo rezultatas autoimuninei ligai nustatyti trunka mėnesius ar net metus

Norm

• tiesioginis Kumbso testas – neigiamas
• netiesioginis Kumbso testas – neigiamas

Kokybiškai teigiamas rezultatas matuojamas pliusų skaičiumi nuo vieno iki keturių (+, ++, +++, ++++), o kiekybiškai skaitmenine forma - 1:16, 1:256 ir kt.

Taip. Jūsų gydytojas tikrai turėtų žinoti, kad jums buvo perpiltas kraujas, nes tai turi įtakos teisingam tyrimo rezultatų aiškinimui dabar. Gavus kažkieno kito (nors daug kartų tirto) kraują, visada yra tikimybė, kad jūsų organizme atsiras antikūnų prieš perpiltą kraują. Būtent šie antikūnai suteiks bloga įtaka apie sveikatos būklę. Vėlesniems kraujo perpylimams gydytojas turi žinoti, kad jums jau buvo perpylimas, o tai reiškia, kad buvo laiko antikūnų sintezei. Nėščioms moterims ši informacija yra dar aktualesnė.

3. Jei motinos ir vaiko Rh faktorius nesutampa, ar visi vaikai sirgs?

Priklauso nuo to, ar vaikas Rh teigiamas, ar neigiamas (RhD). I, II, III ir IV kraujo grupių nešiotojai gali būti Rh teigiami arba neigiami. Esant situacijai, kai motina yra Rh neigiama, o vaikas Rh teigiamas, antikūnai bus gaminami jau pirmojo nėštumo metu, tačiau tik po pirmojo gimdymo (arba nėštumo nutraukimo) bus tiesioginis kontaktas tarp motinos ir motinos kraujo. vaikas. Hemolizinis antikūnų poveikis pasireikš tik antrojo ir vėlesnių gimdymų metu, o tai sukels naujagimio hemolizinę ligą.

Kiekviena moteris, kurios Rh faktorius yra neigiamas, turi būti atidžiai ištirtas nėštumo metu ir po gimdymo profilaktinis gydymas išvengti antikūnų atsiradimo ir tolesnių komplikacijų.

4. Ar nėštumo metu prieš atliekant Kumbso testą būtina žinoti vyro kraujo grupę?

Nėštumo metu reikia ne tik žinoti, bet ir pasitikrinti vaiko biologinio tėvo kraujo grupę.

Duomenys

• pirmą kartą pasiūlyta Kembridže 1945 m
• jautrumo slenkstis – mažiausiai 300 fiksuotų antikūnų molekulių ant vieno raudonojo kraujo kūnelio
• antikūnų, sukeliančių hemolizę, skaičius - kiekvienam asmeniui individualiai (nuo 16-30 iki 300)
• kitų laboratorinių hemolizinės anemijos rodiklių (hemoglobino, bilirubino, retikulocitų) dinamika gali normalizuotis, o Kumbso testas išliks tokio paties lygio.

Kumbso testas paskutinį kartą buvo pakeistas: 2018 m. kovo 16 d Marija Bodyan

Antiglobulino testą, skirtą nepilniems anti-eritrocitų antikūnams aptikti, pasiūlė Coombs, Morant, Reis 1945 m., o vėliau jis buvo pavadintas Kumbso testu. Esmė šis metodas yra tai, kad antiglobulino serumas, kuriame yra antikūnų prieš žmogaus imunoglobulinus, reaguodamas su raudonaisiais kraujo kūneliais, įjautrintais nepilnais antikūnais, sukelia jų agliutinaciją.

Priklausomai nuo to, ar antikūnai yra fiksuoti raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, ar yra laisvos būklės kraujo plazmoje, naudojamas tiesioginis ar netiesioginis Kumbso testas.

Tiesioginis Kumbso testas atliekamas tais atvejais, kai yra pagrindo manyti, kad tiriami raudonieji kraujo kūneliai jau yra in vivo buvo įjautrinti atitinkamais antikūnais, t.y. organizme įvyko pirmoji reakcijos fazė – antikūnų fiksacija raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, o vėlesnis antiglobulino serumo pridėjimas sukelia įjautrintų ląstelių agliutinaciją.

Naudojant netiesioginį Kumbso testą, tiriamame serume aptinkami nepilni antikūnai. Tokiu atveju reakcija vyksta dviem etapais. Pirmasis etapas – tiriamųjų eritrocitų inkubavimas su tiriamuoju serumu, kurio metu tiriamojo serumo mėginyje esantys antikūnai fiksuojami eritrocitų paviršiuje. Antrasis žingsnis yra antiglobulino serumo pridėjimas.

Iki šiol Kumbso testas buvo plačiai naudojamas laboratorinėje praktikoje imunopatologinių būklių diagnostikai, ypač autoimuninei hemolizinei anemijai, kuriai būdingas raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimas dėl ląstelės membranos prisijungimo prie antikūnų ir (arba) komponentų. komplemento sistema. Jis naudojamas nustatyti Ig G buvimą eritrocitų membranoje (dažniausiai Ig G1 ir Ig G3), kuris gali aktyvuoti komplementą, o kartais ir komplementą (C3d). Tačiau ūminiu ligos periodu dėl raudonųjų kraujo kūnelių naikinimo, ant kurių didelis skaičius antikūnų, esant hemolizinei krizei, taip pat esant nepakankamam antikūnų kiekiui lėtinės ligos eigos metu, gali būti stebimas neigiamas tiesioginis Kumbso testas.

Reikia pabrėžti, kad netiesioginis Kumbso testas išlieka geriausias metodas individualus perpylimo terpės pasirinkimas, nes leidžia tiksliausiai nustatyti individualų donoro ir recipiento suderinamumą pagal eritrocitų antigenus.

Tiriant visus organų ir audinių recipientus prieštransplantacijos laikotarpiu ir kraujodaros kamieninių ląstelių recipientus taip pat po transplantacijos, rekomenduojamas papildomas tiesioginis antiglobulino tyrimas autoantikūnams nustatyti.

Be imunohematologijos ir transfuziologijos, antiglobulino tyrimai plačiai naudojami diagnozuojant daugybę patologinių būklių: hematologinių ligų, įskaitant limfoproliferacines ligas, sisteminės ligos jungiamasis audinys, Sjogreno liga, lėtinis aktyvus hepatitas ir kt.

Kumbso testai aktyviai naudojami medicinos genetikoje ir teismo medicinoje, siekiant nustatyti paviršiaus eritrocitų antigenus.

Kumbso testas yra gana daug darbo reikalaujantis tyrimo metodas, kurio įgyvendinimas reikalauja ypatingo kruopštumo. Naudojant jį, kyla tam tikrų sunkumų, ypač susijusių su silpnai teigiamų reakcijų aiškinimu. Yra žinoma, kad klaidingai silpnai teigiamos arba neigiamos reakcijos atliekant Kumbso testus gali būti nepakankamai veiksmingo raudonųjų kraujo kūnelių plovimo, antiglobulino reagento neutralizavimo serumo pėdsakais, taip pat kontakto su neriebiu paviršiumi, ant kurio yra antiglobulinas, pasekmė. gali būti pataisytas, todėl praras savo veiklą. Kitas Kumbso testo trūkumas – antiglobulino reagento, kurio paruošimas ir laikymas turi tam tikrų ypatybių, nestabilumas, dėl ko taip pat sunku kiekybiškai įvertinti hemagliutinacijos reakciją su antiglobulino serumu.

Be to, tyrimai, atlikti A. Holburn, D. Voak ir kt. , parodė, kad klaidingai neigiamų rezultatų priežastis gali būti per didelis purtymas sumaišant raudonųjų kraujo kūnelių suspensiją. Klaidingus rezultatus atliekant antiglobulino tyrimus taip pat gali sukelti antiglobulino reagento anti-komplementarių antikūnų, ypač C3d-, C3c-, C4c- ir C4d-komplemento komponentų, kurie yra adsorbuoti ant kūno paviršiaus. inkubacijos metu ištirkite raudonuosius kraujo kūnelius ir sukurkite teigiamo rezultato vaizdą.

Šiuos trūkumus galima lengvai pašalinti kruopščiai nuplaunant tiriamus mėginius ir stebint reakcijos sąlygas.

Pastarąjį dešimtmetį mažo jonų stiprumo izotoninis druskos tirpalas (LISS) buvo naudojamas siekiant sutrumpinti laiką, reikalingą atlikti netiesioginį Kumbso testą ir padidinti jo jautrumą.

Neabejotinas antiglobulino testų pranašumas, pasak daugelio autorių, yra didelis jų jautrumas, kuris žymiai viršija jų skiriamąją gebą. alternatyvūs metodai testai, naudojami neagliutinuojantiems antikūnams aptikti.

Palyginome kraujo serumo tyrimo metodų skiriamąją gebą dėl nepilnų antikūnų, naudojant poligliuciną, želatiną ir antiglobulino serumą. Tyrimo metu 140 izoimuninių donorų kraujo serumo mėginių buvo stebimi nepilnų anti-D antikūnų titrai, naudojant želatinos, poligliucino ir netiesioginius antiglobulino tyrimus. Šių metodų formuluotė buvo atlikta pagal visuotinai priimtus metodus.

Nustatyta, kad pagal jų skiriamąją gebą eritrocitų jautrinimo anti-D antikūnais nustatymo metodai yra išdėstyti taip: jautriausias yra netiesioginis Kumbso testas, po to – želatinos testas, o mažiausiai informatyvus – poligliucino testas. Šios eksperimentų serijos rezultatai visiškai atitinka literatūros duomenis, kas leidžia daryti tokią išvadą aukštas lygis Kumbso testų jautrumas, leidžiantis labai tiksliai nustatyti, ar organizme yra anti-eritrocitų antikūnų, kurie nesukelia raudonųjų kraujo kūnelių agliutinacijos.

Tačiau praktikoje atliekant Kumbso tyrimus, pasitaiko atvejų, kai nepilnų antikūnų neaptinkama, nors klinikinis ligos vaizdas ar ankstesnė imunizacija rodo galimą jų buvimą. Tokiais atvejais galima daryti prielaidą, kad antikūnų kiekis yra nepakankamas, kad juos nusodintų antiglobulino serumo antikūnai.

Šią išvadą patvirtino ir mūsų pačių atliktas eksperimentas, kurio metu, taikant analitinės ląstelių mikroelektroforezės metodą, buvo nustatytas anti-D antikūnų buvimas ant tiriamųjų eritrocitų, kurių netiesioginiame Kumbso teste neaptikta. Šioje eksperimentų serijoje antiglobulino serumas buvo dedamas į eritrocitus, iš anksto inkubuotus su serumais, gautais iš imunizuotų donorų kraujo vykstančios antikūnų genezės laikotarpiu, t.y. laikotarpiu, kai antikūnai juose nebuvo aptikti naudojant žinomus metodus, įskaitant Kumbso testą.

Atliktų tyrimų metu buvo pateikti statistiniai įrodymai, kad raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra nepilnų antikūnų. reikšmingas pokytisįjautrintų raudonųjų kraujo kūnelių elektroforezinio mobilumo dydis, pridėjus antiglobulino serumo. Reikėtų pažymėti, kad anti-D antikūnai vėliau buvo nustatyti visiems imunizuotiems donorams atliekant netiesioginį Kumbso testą kraujo serume.

Gillerand ir kt. taip pat parodė, kad antiglobulino tyrimams būdingas tam tikras jautrumo slenkstis: teigiamas rezultatas pastebimas tik tada, kai vieno raudonojo kraujo kūnelio paviršiuje užfiksuojama ne mažiau kaip 500 Ig G molekulių.

Be to, literatūroje pateikiama įrodymų, kad galimas neigiamas Kumbso testo rezultatas gali būti susijęs su mažu antikūnų, kurie jautrina raudonuosius kraujo kūnelius, afinitetu, dėl kurio jie lengvai išsivalo nuo raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus plovimo proceso metu. .

Atsižvelgdami į tai, kas išdėstyta pirmiau, galime daryti išvadą, kad kai kuriais atvejais neigiamas Kumbso testo rezultatas dar nėra įrodymas, kad raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje nėra fiksuotų antikūnų.

Yra žinoma, kad Kumbso reakcijos yra labai specifinės ir gali aptikti daugumą neišsamių antikūnų tipų. Tačiau, kaip rodo kai kurie eksperimentiniai duomenys, antiglobulino testai gali būti teigiami ir neimunologinėmis sąlygomis. E. Muirhead ir kt. antrą dieną po fenilhidrazino skyrimo šunims buvo pastebėtas teigiamas Kumbso testas. Toks greitas teigiamos reakcijos atsiradimas prieštarauja jos imunologiniam pobūdžiui ir, veikiau, yra susijęs su nespecifine baltymo adsorbcija eritrocitų paviršiuje.

M. Williams ir kt. nustatė, kad klavulano rūgštis taip pat gali sukelti teigiamą reakciją, kuri, pasak autorių, yra susijusi su nespecifine plazmos baltymų adsorbcija eritrocitų paviršiuje. Panašus poveikis buvo pastebėtas gydant cefalosporinų grupės antibiotikais.

Minėtų tyrimų autoriai pabrėžia teigiamų Kumbso testų rezultatų neimunologinį pobūdį ir tvirtina, kad šios medžiagos gali modifikuoti raudonųjų kraujo kūnelių membranas, dėl kurių raudonieji kraujo kūneliai gali adsorbuoti baltymus. ypač albuminas), kurių paprastai yra kraujo plazmoje ir kurie neturi antikūnų savybių. Be to, gali būti, kad ksenobiotikas, adsorbuotas ant ląstelės paviršiaus, yra ryšys tarp ląstelės membranos ir plazmos baltymų.

Norint teisingai interpretuoti antiglobulino tyrimų rezultatus, taip pat reikia atsižvelgti į kiekybinį jaunų ir subrendusių raudonųjų kraujo kūnelių santykį periferiniame kraujyje. Nustatyta, kad sustiprėjusio eritrono regeneracijos laikotarpiu iš organizmo išskirtus retikulocitus gali agliutinuoti antiglobulino serumas.

Teigiamas tiesioginio antiglobulino tyrimo rezultatas pasitaiko su skirtingais patologinės būklės, lydimas imuninės sistemos sutrikimų, uždegiminių procesų, lemiančių nespecifinę skirtingo specifiškumo antikūnų adsorbciją ant eritrocitų membranų. Tai rodo, kad Ig G molekulės nesąveikauja su specifiniais eritrocitų antigenais, o yra tik fiksuotos tiriamų ląstelių paviršiuje.

Reikėtų atsižvelgti į tai, kad atliekant Kumbso testą sergant ligomis, kurioms būdinga disproteinemijos išsivystymas arba paraproteinų atsiradimas, teigiamas rezultatas gaunamas dėl to, kad eritrocitų paviršiuje yra baltymų, kurie neturi antikūnų, o tai taip pat rodo antiglobulino tyrimų specifiškumo trūkumą dėl jų pagalba aptikto baltymo pobūdžio.

Taigi, kaip parodė daugybė tyrimų, teigiami tiesioginių ir netiesioginių antiglobulino tyrimų rezultatai nėra absoliutus antikūnų buvimo įrodymas, nes teigiamų reakcijų gali būti stebimas ir esant įvairioms patologinėms būsenoms, nesusijusioms su organizmo izosensibilizacija ar autosensibilizacija. Todėl tik kelių imunoserologinių metodų rezultatų palyginimas su klinikinis vaizdas ligos leidžia visapusiškai įvertinti besivystantį patologinį procesą.

Teigiamas netiesioginis antiglobulino testas su neigiamu tiesioginiu testu dažniausiai rodo, kad tiriamajame serume yra laisvų aloantikūnų, susijusių su ankstesniais kraujo perpylimais ar nėštumu.

Kumbso testas dažnai būna teigiamas paūmėjus paroksizminei nakčiai hemoglobinurijai; teigiamas Kumbso testas su anti-C3 ir anti-C3dg yra šalto agliutinino ligos žymuo.

Tais atvejais, kai yra didelė rizika susirgti naujagimio hemolizine liga, didelę reikšmę Norėdami nustatyti diagnozę (dažniausiai nėštumo metu) ir, jei reikia, dinamiškai stebėti antikūnų titro išvaizdą ir pokyčius, turite tiesioginių ir netiesioginių antiglobulino tyrimų rezultatus. Dažniausiai naujagimių hemolizinė liga siejama su motinos ir vaisiaus nesuderinamumu su antigenu D, rečiau – su AB0 sistemos antigenais, dar rečiau – su kitais antigenais (C, c, K ir kt.). Šio proceso metu susidaro antikūnai La, kaip taisyklė, yra nepilni Ig G klasės antikūnai, aiškiai aptinkami atliekant netiesioginį antiglobulino testą. Sergant šia liga, teisingai nustatytas nustatytų antikūnų titras ir specifiškumas turi didelę reikšmę, nes yra tam tikra koreliacija tarp antieritrocitų antikūnų kiekio nėščios moters kraujyje ir galima prognozė hemolizinės ligos sunkumas.

Taip pat būtinas netiesioginis Kumbso testas klinikinė praktika siekiant užtikrinti saugią transfuzijos terapiją. Jo įgyvendinimas yra privalomas donorų ir įvairių kategorijų recipientų imunohematologinių tyrimų, taip pat visų gydymo įstaigų pacientų, kuriems gali prireikti kraujo ir jo komponentų perpylimo, įprastinių tyrimų komponentas.

Netiesioginis antiglobulino testas naudojamas šiais atvejais:

Tikslesniam Rh priklausomybės (antigeno D) nustatymui, esant neaiškiems Rh faktoriaus nustatymo kitais metodais (poligliucinu, želatina ir kt.) rezultatams;

Nustatyti silpnus eritrocitų antigenus (Kell, Duffy, Kidd, Lewis ir kt. sistemas) ir antikūnus prieš šiuos antigenus;

Alioimuniniams anti-eritrocitiniams antikūnams, įskaitant antikūnus, sukeliančius hemolizines reakcijas po transfuzijos, aptikti ir identifikuoti;

Nustatyti AB0 sistemos imuninių antikūnų buvimą perpylimo hemolizinių komplikacijų metu;

Kaip suderinamumo testas, skirtas individualiam perpilto kraujo ir jo komponentų atrankai.

Taigi Kumbso testas yra svarbus diagnostinis testas, naudojamas įvairiose medicinos srityse (hematologijoje, akušerijoje, reumatologijoje, transfuziologijoje, klinikinėje ir laboratorinėje diagnostikoje ir kt.). Kumbso testo atlikimo ypatumų išmanymas padės padidinti gautų rezultatų patikimumą ir prisidės prie teisingo laboratorinių duomenų interpretavimo.

Literatūra

1. Antikūnai. Metodai / red. D. Katie. - M.: Mir, 1991 m.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadžijevas A.B.. // Anemijos transfuzinė terapija: vadovėlis. vadovas gydytojams. - M.: Prakt. Medicina, 2005. - P. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - Nr. 2. - P. 39-62.

4. Donskovas S.I.// Rezus sistemos kraujo grupės: teorija ir praktika. - M.: VINITI RAS, 2005. - P. 180-186, 195.

5.Imunoserologija (reguliaciniai dokumentai) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskovas. - M.: VINITI RAS, 1998 m.

6.Kraujo sistemos tyrimas klinikinėje praktikoje / red. G.I. Kozinetsas, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997 m.

7. Levinas V.I.. Į eritrodierezės ir eritropoezės mechanizmą ūminiu laikotarpiu pohemoraginė anemija: autoriaus santrauka. dis. ...kand. medus. Sci. – Minskas, 1968 m.

8. Ragimovas A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Anemijos diagnostikos, profilaktikos ir gydymo pagrindai. - M.: GOU VUNMC Rusijos Federacijos sveikatos ministerija, 2002. - P. 204-209.

9. Chumakova E.D.. // Faktinės problemos hematologija ir transfuziologija: VI Baltarusijos Respublikos hematologų ir transfuziologų kongreso medžiaga, Minskas, 2007 m. gegužės 24-25 d. / red. A.I. Svirnovskis, M.P. Potapneva. - Minskas: Respublikinis mokslinis ir praktinis hematologijos ir transfuziologijos centras, 2007. - P. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancetas. - 1945. - T. 2. - P. 15.

11. Freedmanas J. // J. Klinas. Pathol. - 1979. - T. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburnas A.M.. Kokybės kontrolė. Methods in Hematology / red. I. Cavill. - Edinburgas: Churchill Livingstone, 1982. - T. 4. - P. 34-50.

13. Khanas S.// CMAJ. - 2006. - T. 175, N 8. - P. 919.

14. Komatsu F.// Nipponas Rinsho. - 2005. - T. 63 (7 priedas). - P. 719-721.

15. Komatsu F.// Nipponas Rinsho. - 2005. - T. 63 (7 priedas). - P. 716-718.

16. Molthanas L., Reidenbergas M.M., Eihmanas M.F.// Naujoji angl. J. Med. – 1976 m. – t. 277. - P. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brianas S. // J. Lab. Clin. Med. – 1954 m. – t. 44. - P. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., Moore'asB. ir kt. //Biotests Bull. - 1986. - T. 1. - P. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. ir kt. Ląstelių plovimo mašinos antiglobulino tyrimams. Pakartotinis bandymas – naujas metodas, parodantis vienos plačiai naudojamos mašinos – Sorvall CW1-AF2 – neefektyvumą: ataskaita DHSS techniniam skyriui, 1991 m. vasario mėn.

21. Williamsas M.E., Thomas D., Harmanas C.P.. ir kt. //Antimikrobiniai agentai ir chemoterapija. – 1985 m. - P. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - T. 174, N 3. - P. 305-307.

Medicinos naujienos. - 2008. - Nr. 3. - 33-36 p.

Dėmesio! Straipsnis skirtas medicinos specialistams. Šio straipsnio ar jo fragmentų perspausdinimas internete be hipersaito į šaltinį laikomas autorių teisių pažeidimu.

- tyrimas, padedantis nustatyti nepilnų anti-eritrocitų antikūnų kiekį kraujyje. Šis antiglobulino tyrimas leidžia nustatyti nėščių moterų antikūnus.

Be to, tai leidžia jums pradiniai etapai diagnozuoti hemolizinę anemiją naujagimiams, turintiems Rh konfliktą. Tai padeda išvengti raudonųjų kraujo kūnelių, reikalingų normaliam kraujo formavimuisi, sunaikinimo. Šį testą 1945 metais sukūrė Robertas Coombsas, todėl jis ir gavo savo pavadinimą.

Kumbso testas yra universalus testas, leidžiantis laiku diagnozuoti kraujodaros sutrikimus tiek suaugusiems, tiek vaikams.

Yra šie tokių testų tipai:

1. Tiesioginis Kumbso testas– leidžia nustatyti antikūnus, esančius raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje. Paprastai toks tyrimas skiriamas įtariant hemolizę, autoimuninę hemolizinę anemiją ar kitas autoimunines ligas. Be to, jis atliekamas po vaistų terapija vaistai, kurių pagrindą sudaro chininas, penicilinas arba metildopa, arba po kraujo perpylimo. Norėdami gauti tikslesnius rezultatus, turite visiškai nutraukti vaistų vartojimą bent 1 savaitę prieš tyrimą.
2. Netiesioginis Kumbso testas– testas, kuriuo galima nustatyti anti-eritrocitų antikūnus plazmoje. Paprastai jis atliekamas nėštumo metu ir prieš kraujo perpylimą. Anti-eritrocitų antikūnų atsiranda žmogaus kraujyje reaktyvios imuninės sistemos metu arba kaip reakcija į tam tikrus vaistus. Norint atlikti tikslesnį tyrimą, iš karto imami keli mėginiai su 2 valandų intervalu.

Naudojimo indikacijos

Kumbso testas atliekamas tik esant rimtiems požymiams. Tai brangus ir daug laiko reikalaujantis tyrimas, kuris yra specifinis testas.

Paprastai jos įgyvendinimo indikacijomis laikomos šios situacijos:

1. Kraujo perpylimo metu. Testas leidžia nustatyti, ar recipiento kraujas prigis žmogaus organizme, taip pat ar galima donorystė. Tokiu atveju būtina ištirti ir donoro, ir recipiento medžiagą. Svarbu nustatyti antikūnų pobūdį, nes jei jie yra nesuderinami organizme Rh konflikto fone, imuninę sistemą. Tai veda prie vystymosi rimtos ligos, ir į retais atvejais net mirtį.
2. Prieš chirurginės intervencijos kai yra kraujo netekimo pavojus. Tai daroma tam, kad gydytojas galėtų nedelsiant įvesti tinkamą kraują kūnui atkurti.
3. Norint nustatyti Rh jautrinimą. Rezusas yra specifinis antigenas, kuris atsiranda kiekvienos moters kūne nėštumo metu. Jei motina turi teigiamą Rh, o tėvas neigiamas, arba atvirkščiai, vaikui nėra priklausomybės – jis gali paveldėti bet ką. Jei vaikas iš motinos gauna priešingą rezusą, kyla didelis įsijautrinimo pavojus. Šiam reiškiniui būdingas motinos ir vaiko kraujo maišymasis. Tai gali atsitikti tiek nėštumo, tiek gimdymo metu.

Jei nėščios moters kūne įvyksta rezus konfliktas, motinos imuninė sistema pradeda suvokti savo vaisius kaip svetimas kūnas. Dėl šios priežasties yra didelė rizika, kad jis pradės jį pulti.

Dėl tokių veiksmų kūdikiui gali išsivystyti rimtos patologijos. Dažniausiai pasireiškia eritroblastozė - reiškinys, kai vaiko kūnas negali pagaminti pakankamai raudonųjų kraujo kūnelių.

Be to, dėl Rh konflikto vaisiaus mirtis gali įvykti gimdoje arba iškart po gimimo. Taikant tinkamą požiūrį į gydymą, tokių rimtų pasekmių galima lengvai išvengti.

Nukrypimai nuo normos

At teigiamas rezultatas Remdamasis Kumbso reakcija, gydytojas daro išvadą, kad kraujo serume yra antikūnų prieš raudonuosius kraujo kūnelius. Tai reiškia, kad donoro kraujas gali būti nesuderinamas su paciento krauju.

Jei nėščios moters, turinčios Rh neigiamą kraują, organizme diagnozuojamas teigiamas rezultatas, jos organizme yra antikūnų prieš vaisiaus kraują.

Tai rodo Rh konfliktą, dėl kurio gydytojas turi atidžiai stebėti nėštumo valdymą, taip pat laikytis visų moters nurodymų ir rekomendacijų.

Jei vaiko kraujyje yra antikūnų, diagnozuojama naujagimio hemolizinė liga. Tokiu atveju atliekamas pakartotinis tyrimas, siekiant nustatyti, ar antikūnų kiekis nėščios motinos kraujyje padidėja, ar ne.

Galimos Kumbso testo komplikacijos

Kumbso testas yra gana saugus testas, leidžiantis diagnozuoti daugybę autoimuninės ligos. Tai retai sukelia komplikacijų, dažniausiai neigiamų pasekmių susiję su kraujo paėmimu.

Jie yra:

• Kraujavimas arba kraujavimas po oda
• Galvos svaigimas ir alpimas
• Infekcinė infekcija

7 295

– antiglobulino testas, skirtas Rh neigiamame kraujyje nustatyti nepilnus anti-eritrocitų antikūnus prieš Rh faktorių – specifinį baltymą, esantį Rh teigiamo kraujo eritrocitų paviršiuje. Yra du šio tyrimo tipai: tiesioginis – antikūnų nustatymas raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, netiesioginis – antikūnų nustatymas kraujo serume. Tiesioginiai tyrimai atliekami diagnozuojant ir gydant kraujo ligas: hemolizinę anemiją, naujagimių hemolizinę ligą ir kt. Netiesioginis tyrimas atliekamas siekiant įvertinti donoro ir recipiento kraujo suderinamumą perpylimo metu, taip pat nustatyti Rh konflikto buvimą ir riziką planuojant ir valdant nėštumą. Kumbso testo medžiaga yra veninis kraujas. Tyrimas atliekamas naudojant agliutinacijos reakcija pagrįstus metodus. Paprastai abu testai duoda neigiamą rezultatą. Analizė atliekama per vieną dieną.

Kumbso testas – klinikinis tyrimas Rh neigiamas kraujas, skirtas aptikti antikūnus prieš Rh faktorių. Testas naudojamas Rh konflikto ir hemolizinių reakcijų atsiradimo rizikai nustatyti. Kiekvieno žmogaus raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra tam tikras antigenų arba agliutinogenų rinkinys – įvairios prigimties junginiai, kurių buvimas ar nebuvimas naudojamas kraujo grupei ir Rh faktoriui nustatyti. Yra daug rūšių antigenų, įskaitant Medicininė praktika Didžiausią praktinę reikšmę turi agliutinogenai A ir B, lemiantys kraujo grupę, ir agliutinogenas D, Rh faktorius. Esant teigiamam Rh faktoriui, D antigenai aptinkami ant išorinės eritrocitų membranos, o esant neigiamam faktoriui – ne.

Kumbso testas, dar vadinamas antiglobulino testu, skirtas kraujyje nustatyti nepilnus anti-eritrocitinius antikūnus prieš Rh faktoriaus sistemą. Antikūnai prieš Rh faktorių yra specifiniai imunoglobulinai, kurie gaminasi Rh neigiamame kraujyje, kai į jį patenka raudonųjų kraujo kūnelių su agliutinogenu D. Tai gali atsitikti, kai vaisiaus ir nėščios moters kraujas susimaišo, kraujo perpylimo metu be išankstinio kraujo spausdinant. Kumbso testas egzistuoja dviem versijomis – tiesioginiu ir netiesioginiu. Darant tiesioginis testas Kumbsas aptinka antikūnus, pritvirtintus prie raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus. Tyrimas naudojamas hemolizinės reakcijos priežasčiai nustatyti. Netiesioginis Kumbso testas skirtas anti-eritrocitų antikūnų aptikimui kraujo plazmoje. Būtina nustatyti kraujo suderinamumą tarp donoro ir recipiento arba motinos ir vaisiaus ir padeda išvengti Rh konflikto išsivystymo ir vėlesnės raudonųjų kraujo kūnelių hemolizės.

Abiejų Kumbso testo versijų kraujas imamas iš venos. Analizė atliekama agliutinacijos būdu, naudojant antiglobulino serumą. Tyrimo rezultatai naudojami hematologijoje hemolizinių reakcijų priežastims nustatyti, chirurgijoje ir reanimacijoje atliekant kraujo perpylimus, akušerijoje ir ginekologijoje stebint nėštumą moterims, turinčioms Rh neigiamą kraują.

Indikacijos

Esant įvairios kilmės hemolizinėms reakcijoms (raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimui), skiriamas tiesioginis Kumbso testas, aptinkantis prie raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus prisitvirtinusius antikūnus. Tyrimas skirtas pirminei autoimuninei hemolizinei anemijai, potransfuzinei hemolizinei anemijai, naujagimio hemolizinei ligai, eritrocitų hemolizei, kurią sukelia autoimuninė, naviko ar užkrečiamos ligos, taip pat priėmimas vaistai pavyzdžiui, chinidinas, metildopa, prokainamidas. Netiesioginis Kumbso testas, nustatantis antikūnus kraujo plazmoje, naudojamas siekiant užkirsti kelią Rh konflikto vystymuisi. Jis skirtas pacientams, besiruošiantiems kraujo perpylimui, taip pat nėščiosioms, turinčioms neigiamą Rh faktorių, jei būsimas vaiko tėvas turi teigiamą Rh faktorių.

Norint nustatyti Rh suderinamumą, Kumbso testas neskiriamas pacientams, kurių kraujas Rh teigiamas. Tokiais atvejais raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje jau yra antigenų, kurių negalima išprovokuoti kraujo perpylimu ar vaisiaus kraujo patekimu į nėščiosios kraują. Taip pat tyrimas neindikuotinas nėščiosioms, jei abu tėvai turi neigiamą Rh faktorių – paveldimą recesyvinį požymį. Tokių porų vaikas visada turi Rh neigiamą kraują, imunologinis konfliktas su motina yra neįmanomas. Esant hemolizinėms patologijoms, antiglobulino testas nenaudojamas gydymo sėkmei stebėti, nes rezultatai neatspindi raudonųjų kraujo kūnelių naikinimo proceso aktyvumo.

Kumbso testo apribojimas yra tyrimo procedūros sudėtingumas – norint gauti patikimus rezultatus, būtina laikytis temperatūros ir laiko sąlygų, reagentų ir biomedžiagos paruošimo taisyklių. Kumbso testo pranašumai yra didelis jautrumas. Sergant hemolizine anemija, šio tyrimo rezultatai išlieka teigiami, net jei hemoglobino, bilirubino ir retikulocitų kiekis normalizuojasi.

Pasirengimas analizei ir medžiagos rinkimas

Medžiaga, naudojama Kumbso tyrimui atlikti, yra veninis kraujas. Specialių reikalavimų kraujo paėmimo procedūros laikui ir paciento paruošimui nėra. Kaip ir bet kurio tyrimo metu, pavalgius rekomenduojama padaryti bent 4 valandų pertrauką, o per paskutines 30 minučių mesti rūkyti. fizinė veikla, vengti emocinis stresas. Taip pat verta iš anksto aptarti su gydytoju, ar reikia nutraukti vaistų vartojimą – kai kurie vaistai gali iškreipti Kumbso testo rezultatus. Kraujas imamas švirkštu iš kubitalinės venos arba rečiau iš venos plaštakos gale. Per kelias valandas medžiaga pristatoma į laboratoriją.

Atliekant tiesioginį Kumbso testą, į paciento kraujo serumą pridedamas antiglobulino serumas. Po kurio laiko mišinys tiriamas, ar nėra agliutinatų – jie susidaro, jei ant raudonųjų kraujo kūnelių yra antikūnų. Jei rezultatas teigiamas, nustatomas agliutinacijos titras. Netiesioginis Kumbso testas susideda iš daugiau žingsnių. Pirma, serume esantys antikūnai fiksuojami prie suleistų raudonųjų kraujo kūnelių inkubacijos metu. Tada į mėginį pridedamas antiglobulino serumas, po kurio laiko nustatomas agliutinatų buvimas ir titras. Analizės laikotarpis yra 1 diena.

Normalūs rezultatai

Paprastai tiesioginio Kumbso testo rezultatas yra neigiamas (-). Tai reiškia, kad kraujyje nėra su raudonaisiais kraujo kūneliais susijusių antikūnų ir jie negali sukelti hemolizės. Normalus rezultatas Netiesioginis Kumbso testas taip pat yra neigiamas (-), tai yra, kraujo plazmoje nėra antikūnų prieš Rh faktorių. Ruošiantis kraujo perpylimui recipientui, tai reiškia suderinamumą su donoro krauju stebint nėštumą, tai reiškia, kad nėra motinos Rh jautrumo, maža rizika susirgti imunologiniu konfliktu. Fiziologiniai veiksniai, tokie kaip dieta ar fizinis aktyvumas, negali turėti įtakos tyrimo rezultatui. Todėl, jei rezultatas yra teigiamas, būtina gydytojo konsultacija.

Diagnostinė analizės vertė

Teigiamas Kumbso testo rezultatas išreiškiamas kokybiškai nuo (+) iki (++++) arba kiekybiškai, titrais nuo 1:16 iki 1:256. Antikūnų koncentracija ant raudonųjų kraujo kūnelių ir kraujo serume nustatoma abiejų tipų mėginiuose. Jei tiesioginis Kumbso testas yra teigiamas, ant išorinės raudonųjų kraujo kūnelių membranos aptinkami antikūnai, dėl kurių šie kraujo kūneliai sunaikinami. Priežastis gali būti kraujo perpylimas be išankstinio tipavimo – hemolizinė reakcija po perpylimo, taip pat naujagimio eritroblastozė, hemolizinė reakcija dėl vaistų vartojimo, pirminė ar antrinė autoimuninė hemolizinė anemija. Antrinį raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimą gali sukelti sisteminė raudonoji vilkligė, Evanso sindromas, Waldenströmo makroglobulinemija, paroksizminė šalta hemoglobinurija, lėtinė limfocitinė leukemija, limfoma, infekcinė mononukleozė, sifilis, mikoplazminė pneumonija.

Teigiamas netiesioginio Kumbso testo rezultatas rodo, kad plazmoje yra antikūnų prieš Rh faktorių. Praktiškai tai reiškia, kad įvyko Rh sensibilizacija ir nėštumo metu po donoro kraujo infuzijos gali išsivystyti Rh konfliktas. Siekiant išvengti nėštumo komplikacijų, moterys, kurių Kumbso testo rezultatas teigiamas, įtraukiamos į specialų registrą.

Anomalijų gydymas

Kumbso testas susijęs su izoserologiniais tyrimais. Jo rezultatai leidžia nustatyti hemolizinę reakciją, taip pat nustatyti donoro ir recipiento, motinos ir vaisiaus kraujo suderinamumą, kad būtų išvengta Rh konflikto vystymosi. Jei tyrimo rezultatas yra teigiamas, turite kreiptis į savo gydantį gydytoją - akušerį-ginekologą, hematologą, chirurgą.

Patvirtinta Roszdravnadzor įsakymu

dėl „Reagentų rinkinio rezus sistemos antigenams ir antikūnams žmogaus kraujyje nustatyti“ naudojimo
(AGS Kumbso testas)

TU 9398-102-51203590-2012

RU Nr. RZN 2013/1255 2013-10-11

I. ĮVADAS

Standartiniame Kumbso testo serume yra specifinių heteroimuninių antikūnų prieš žmogaus kraujo baltymus ir jis skirtas naudoti dviem reakcijos variantais – tiesioginiu ir netiesioginiu Kumbso testu.

Tiesioginis Kumbso testas naudojamas eritrocitų jautrumui in vivo nustatyti sergant naujagimių hemolizine liga ir pacientams, sergantiems lėtinės hemolizinės anemijos autoimunine forma, taip pat kai kuriomis kitomis ligomis. Tiesioginio Kumbso testo atlikimas susideda iš to, kad serumas Kumbso testui pridedamas prie tiriamų raudonųjų kraujo kūnelių, anksčiau nuplautų iš jų pačių plazmos baltymų. Jei raudonieji kraujo kūneliai buvo įjautrinti in vivo, reakcija sukelia jų agliutinaciją.

Netiesioginis Kumbso testas naudojamas kaip testas organizmo įsijautrinimo būklei nustatyti, leidžiantis aptikti laisvos būklės antikūnus tiriamojo kraujo serume; kaip perpilto kraujo suderinamumo tyrimas, kai tiriamas recipiento serumo poveikis numatomo donoro eritrocitams; ir kaip testas, skirtas nustatyti įvairių grupių antigenus eritrocituose, naudojant išankstinį poveikį standartiniams serumams, kuriuose yra žinomo specifiškumo antikūnų. Netiesioginis Kumbso testas (visos parinktys) pagaminta dviem etapais, iš kurių pirmasis yra tiriamojo (arba standartinio) serumo inkubavimas su standartiniais (arba tiriamaisiais) eritrocitais, t.y. eritrocitų jautrinimas in vitro. Antrasis etapas yra tikroji reakcija su serumu Kumbso testui, kuris atliekamas taip pat, kaip ir tiesioginis Kumbso testas.

Galutinis reakcijos rezultatas tiek tiesioginiuose, tiek netiesioginiuose Kumbso testuose atsiranda dėl sąveikos standartinis serumas Kumbso testui su antikūnais (žmogaus kraujo baltymais), fiksuotais ant raudonųjų kraujo kūnelių. Šis rezultatas pasireiškia kaip raudonųjų kraujo kūnelių agliutinacija. Norėdami stebėti agliutinaciją, naudokite baltą porcelianą arba bet kokią baltą lėkštę su drėkinamu paviršiumi, kad ant jos užlašinti lašai gerai susimaišytų ir neišsisklaidytų ant lėkštės paviršiaus. Sumaišytus lašus reikia lengvai paskleisti ant lėkštės, maždaug iki 2 kapeikų monetos dydžio.
II. REAKCIJOS INGREDIENTŲ PARUOŠIMAS

Tiriamasis serumas antikūnų buvimui ir specifiškumui jame nustatyti gaunamas iš tiriamojo kraujo nepridedant konservanto. Laikyti + 4–8 0 C temperatūroje ne ilgiau kaip 2 paras arba sušaldyti 1 mėnesį.

Suderinamumo testui skirtas serumas gaunamas tokiu pačiu būdu, tačiau naudojamas ne ilgiau kaip 2 dienas.

Raudonieji kraujo kūneliai, skirti tam tikriems juose esantiems izoantigenams nustatyti, ruošiami su kokiu nors konservantu iš žmogaus, kurio kraujas tiriamas. Taip pat galite naudoti raudonųjų kraujo kūnelių nuosėdas iš kraujo, paimto be konservantų.

Atliekant suderinamumo testą, naudojamas donoro kraujas, paimtas per adatą iš buteliuko, paruošto perpylimui.

Visais atvejais raudonieji kraujo kūneliai 3–4 kartus išplaunami mėgintuvėliuose iš plazmos, į vieną tūrį raudonųjų kraujo kūnelių įpilant 8–10 tūrių izotoninio natrio chlorido tirpalo, po to maišoma ir centrifuguojama 1500–2000 aps./min. 10 minučių (iki visiško eritrocitų nusėdimo). Po kiekvieno centrifugavimo supernatantas išsiurbiamas.
III. REAKCIJOS TECHNIKA

Tiriami eritrocitai ruošiami 5 % suspensijos pavidalu, kuriai vienas lašas keturis kartus išplautų eritrocitų mėgintuvėlyje sumaišomas su 19 lašų izotoninio natrio chlorido tirpalo.

Vienas lašas (0,05 ml) 5% raudonųjų kraujo kūnelių suspensijos perpilamas į baltą plokštelę ir ištepamas. Plokštelė kratoma ir stebima 3 minutes, kad būtų galima pamatyti, ar neįvyko raudonųjų kraujo kūnelių agliutinacija. Jei agliutinacija neįvyko, įlašinkite 1–2 lašus standartinio serumo Kumbso tyrimui, lašus gerai išmaišykite, tada šiek tiek pakratykite plokštelę, palikite vieną ar dvi minutes ir vėl suplakite. Tuo pačiu metu 10 minučių stebimas rezultatas, kuris išreiškiamas agliutinacijos buvimu ar nebuvimu.
Tiesioginio Kumbso testo rezultatų aiškinimas.

Nėra agliutinacijos – neigiamas testas

Agliutinacijos buvimas – teigiamas testas, rodantis tiriamų raudonųjų kraujo kūnelių įsijautrinimą, t.y. ant jų esančių antikūnų rezorbciją, atsiradusią in vivo žmogaus organizme (naujagimio, paciento). Jei tirtų raudonųjų kraujo kūnelių agliutinacija įvyko prieš pridedantį Kumbso testo serumą neatsižvelgiama;
2. Netiesioginis Kumbso testas

Sukurta aptikti izoantikūnus tiriamojo kraujo serume

Naudojamas tais atvejais, kai reikia išsiaiškinti, ar paciento, nėščios moters, donoro ir kt. kraujyje yra nepilnos formos izoimuninių antikūnų ir nustatyti jų specifiškumą. Reakcijai naudojamas tiriamojo kraujo serumas ir žinomo specifiškumo standartiniai raudonieji kraujo kūneliai. Tarp šių 8–10 ar daugiau raudonųjų kraujo kūnelių mėginių faktoriai turėtų skirtis nuo kitų sistemų, todėl labai svarbu, kad kiekvienas iš šių faktorių būtų bent viename raudonųjų kraujo kūnelių mėginyje. Skydelyje taip pat yra Rh neigiamų eritrocitų mėginiai su įvairiais kitų sistemų antigenų deriniais, todėl tarp jų yra Duffy teigiamų ir Duffy neigiamų, kurie savo ruožtu būtų suskirstyti į Kell teigiamus ir Kell neigiamus, Kidd teigiamas ir Kidd neigiamas ir tt Kaip neigiama kontrolė, jei įmanoma, į reakciją įtraukiami eritrocitai žmogaus, kurio serumas tiriamas.

Reakcijos technika

Į stovą įrengiama keletas centrifugų ar kitų 3-10 ml tūrio mėgintuvėlių, atsižvelgiant į į reakciją įtrauktų eritrocitų mėginių skaičių. Mėgintuvėliai yra paženklinti ir pagal ženklinimą į juos įlašinamas 1 nedidelis lašelis (0,01 ml) išplautų standartinių raudonųjų kraujo kūnelių. Į kiekvieną mėgintuvėlį įlašinami trys tiriamojo serumo lašai, mėgintuvėliai stipriai sukratomi, kad raudonieji kraujo kūneliai susimaišytų su serumu ir 45 minutėms įdedami į 37 0 C temperatūros termostatą. Po inkubacijos mėgintuvėliai išimami iš termostato, o raudonieji kraujo kūneliai nuplaunami į vamzdelio viršų įpilant izotoninio natrio chlorido tirpalo, maišant ir vėliau centrifuguojant. Plovimas kartojamas 3-4 kartus, kiekvieną kartą atsargiai išsiurbiant supernatantą, tada į išplautus raudonuosius kraujo kūnelius įlašinami 2 lašai izotoninio natrio chlorido tirpalo, kad gautųsi maždaug 5% suspensijos (naudojant centrifuginius mėgintuvėlius, galite apsiriboti skalbti du kartus).

1 lašas 5% eritrocitų suspensijos iš kiekvieno mėgintuvėlio perpilamas į baltą plokštelę, ten įlašinami 1-2 lašai standartinio serumo Kumbso tyrimui ir serumas kruopščiai sumaišomas su eritrocitais. Plokštelė šiek tiek pakratoma, po to paliekama 1-2 minutėms ir vėl periodiškai purtoma, tuo pat metu 20 minučių stebint reakcijos rezultatą.

Rezultatų interpretacija

Nėra agliutinacijos požymių (neigiamas rezultatas) visuose mėginiuose reiškia, kad tiriamajame serume nėra nepilnų antikūnų prieš grupės antigenus, esančius standartiniuose raudonuosiuose kraujo kūneliuose, įtrauktuose į tyrimą.

Jei kai kuriuose ar daugumoje lašų, ​​be kontrolės, Pastebėjus agliutinacija , tai reiškia, kad tiriamajame serume yra nepilnų antikūnų prieš eritrocitų antigenus. Šių antikūnų specifiškumo klausimas sprendžiamas lyginant teigiamus ir neigiamos reakcijos su antigenine raudonųjų kraujo kūnelių struktūra, įtraukta į reakciją. Šių antikūnų aktyvumo klausimas išsprendžiamas titruojant.

1 pavyzdys. Agliutinacija įvyko su visais eritrocitų mėginiais, turinčiais Rh 0 (D) faktorių, neatsižvelgiant į tai, ar yra ar nėra kitų šios sistemos ir kitų sistemų faktorių, tuo tarpu su visais Rh 0 (D) – neigiamais mėginiais agliutinacijos nepastebėta (todėl neatsižvelgiant į kitų veiksnių buvimą ar nebuvimą) – tai reiškia, kad tiriamajame serume yra nepilnų anti-rezus antikūnų – Rh 0 (D).

2 pavyzdys. Agliutinacija įvyko su visais eritrocitų mėginiais, kuriuose yra Duffy faktoriaus, neatsižvelgiant į Rėzus sistemos ir kitų sistemų antigenų buvimą ar nebuvimą, o su visais Duffy neigiamais mėginiais agliutinacija nepastebėta, o tai reiškia, kad tiriamajame serume yra nepilnų anti- antikūnai - Duffy.

Papildymas. Jei įstaigoje nėra visos standartinių raudonųjų kraujo kūnelių grupės, tačiau reikia ištirti serumą, ar nėra antikūnų, rekomenduojama atlikti tyrimą su 25-30 atsitiktinių raudonųjų kraujo kūnelių mėginių iš sveikų 0 grupės (I) arba to paties pavadinimo serumu kaip ir tiriamasis serumas. Tai leis išspręsti antikūnų prieš daugumą Rh-Hr, Duffy, Kell, Kidd sistemos antigenų buvimo ar nebuvimo problemą.

Jei gaunamas teigiamas rezultatas, tolesnė išvada apie aptiktų antikūnų specifiškumą gali būti padaryta specialiu tyrimu su visa standartinių raudonųjų kraujo kūnelių grupe.

3. Netiesioginio Kumbso testo, kaip perpilto kraujo suderinamumo tyrimo, atlikimo technika

Siekiant išvengti nesuderinamumo perpylimo metu, prieš perpylimą reikia atlikti šiuos suderinamumo tyrimus:

1. 
   ABO kraujo grupių suderinamumo testas, atliekamas plokštumoje kambario temperatūroje.
2. 
   Rh faktoriaus ir kitų izoantigenų suderinamumo testai.

Rh faktoriaus ir kai kurių kitų izoantigenų nesuderinamumas gali priklausyti tiek nuo pilnų antikūnų buvimo (nustatoma druskingoje aplinkoje 37 0 C temperatūroje mėgintuvėliuose), tiek dažniausiai nuo nepilnų antikūnų, kuriems netiesioginis Kumbso testas yra labiausiai tinkamas. jautrus.

Vienas nedidelis (0,01 ml) nuplautų donoro eritrocitų lašas, paimtas per adatą iš perpylimui skirto kraujo buteliuko, perpilamas į centrifugos ar kito 3-4 ml tūrio mėgintuvėlio dugną ir 3 lašai paciento. į jį pridedamas serumas. Mėgintuvėlis kratomas, kad eritrocitai susimaišytų su serumu, po to 45 minutėms įdedamas į 37 0 C temperatūros termostatą. Po inkubacijos į mėgintuvėlio viršų pilamas izotoninis natrio chlorido tirpalas, mėgintuvėlio turinys sumaišomas ir centrifuguojamas 5-10 min. Šis raudonųjų kraujo kūnelių plovimas kartojamas 3 kartus, kiekvieną kartą atsargiai pašalinant supernatantą. Naudodami centrifugos mėgintuvėlius galite apsiriboti plovimu du kartus. Į išplautus raudonuosius kraujo kūnelius įlašinkite 2 lašus izotoninio natrio chlorido tirpalo, kad gautumėte maždaug 5 % suspensijos.

1 lašas 5% raudonųjų kraujo kūnelių suspensijos perpilamas į baltą plokštelę, ten įlašinami 1-2 lašai standartinio serumo Kumbso tyrimui ir serumas kruopščiai sumaišomas su raudonaisiais kraujo kūneliais. Tada lėkštė šiek tiek pakratoma, paliekama 1-2 minutėms ir periodiškai vėl purtoma, stebint rezultatą 20 minučių.

Pastaba: Esant Rh nesuderinamumui, agliutinacija dažniausiai įvyksta per pirmąją minutę, tačiau esant žemam Rh antikūnų (ar kitų antikūnų) titrui, agliutinacija gali įvykti vėliau, kartais jau dvidešimtą minutę.
Rezultato interpretacija:

Matosi agliutinatai gabalėlių pavidalu išvalytame arba visiškai išbalintame fone - tai reiškia, kad donoro kraujas nesuderinamas su recipiento krauju ir jam negalima perpilti.

Nebuvimas agliutinacijos požymiai reiškia, kad paciento kraujyje nėra nepilnų antikūnų prieš donoro raudonuosius kraujo kūnelius, palyginti su Rh faktoriumi ir kitais izoantigenais, prieš kuriuos galėtų susidaryti nepilni antikūnai.

Netiesioginis Kumbso testas yra jautrus tik nepilniems antikūnams.
4. Netiesioginio Kumbso testo metodika, skirta nustatyti antigeninė struktūra raudonieji kraujo kūneliai

Šis testas naudojamas nustatyti raudonųjų kraujo kūnelių grupės antigeno buvimą ar nebuvimą naudojant standartinį serumą, kuriame yra atitinkamų antikūnų nepilna forma.

Dažniausiai netiesioginis Kumbso testas naudojamas antigenams Kell (K), Duffy (Fy), Kidd (Jk) nustatyti, taip pat silpnam Rh sistemos antigenui (Du) nustatyti.

Prieš pradedant antigenų nustatymą, tiriami raudonieji kraujo kūneliai turi būti ištirti tiesioginiu Kumbso testu. Jei tiesioginio tyrimo rezultatas yra teigiamas, antigenų nustatymas netiesioginiu Kumbso testu negali būti atliktas ir tam turi būti naudojamos kitos reakcijos.

Reakcijai naudojami centrifuginiai ar kiti 3-4 ml tūrio mėgintuvėliai, kurių kiekis yra trys: vienas eritrocitų tiriamajam mėginiui ir du 1 nedideliam (0,01 ml) lašeliui tris kartus nuplautų tiriamųjų eritrocitų. pirmojo mėgintuvėlio dugną, į antrąjį mėgintuvėlį, kuriame yra norimas antigenas (pavyzdžiui, Duffy-teigiamas), pridedami kontroliniai eritrocitai, o į trečiąjį mėgintuvėlį – neigiama kontrolė (Duffy-neigiamas). Į visus mėgintuvėlius įlašinkite 2–3 lašus standartinio serumo (šiame pavyzdyje anti-Duffy). Mėgintuvėliai sukratomi, kad turinys susimaišytų, ir 45 minutėms dedami į 37 0 C temperatūros termostatą. Po tokio inkubavimo mėgintuvėliai išimami iš termostato, į viršų pilamas izotoninis natrio chlorido tirpalas, turinys kruopščiai išmaišomas ir centrifuguojamas 1500-2000 tūkst. aps./min 5-10 min. Po centrifugavimo supernatantas atsargiai išsiurbiamas ir raudonųjų kraujo kūnelių plovimas kartojamas 4 kartus. (Naudodami centrifuginius mėgintuvėlius galite apsiriboti du kartus plauti).

Į išplautus raudonuosius kraujo kūnelius įlašinkite 2 lašus izotoninio natrio chlorido tirpalo, kad gautumėte maždaug 5 % suspensijos. 1 lašas 5% eritrocitų suspensijos iš kiekvieno mėgintuvėlio perpilamas į baltą plokštelę, į kiekvieną eritrocitų lašą įlašinami 1-2 lašai standartinio serumo Kumbso tyrimui ir sumaišoma. Plokštelė šiek tiek pakratoma, po to paliekama 1-2 minutėms ir vėl periodiškai purtoma, tuo pat metu 20 minučių stebint reakcijos eigą.
Rezultatų interpretacija

Agliutinacijos buvimas raudonieji kraujo kūneliai (teigiamas rezultatas) reiškia, kad kraujyje yra norimas antigenas (šiame pavyzdyje Duffy teigiamas kraujas).

Nėra agliutinacijos (neigiamas rezultatas) reiškia, kad ištirtame kraujyje nėra norimo antigeno (Duffy neigiamas).

Į rezultatą atsižvelgiama kaip į teisingą patikrinus kontrolinius mėginius, t. y. pavyzdyje, jei Duffy teigiamo mėginio rezultatas yra teigiamas, o Duffy neigiamo mėginio – neigiamas.

5. Išleidimo forma

Reagentas yra skysto pavidalo buteliukuose po 5 arba 10 ml (1 ml yra 10 dozių). Natrio azidas naudojamas kaip konservantas, kurio galutinė koncentracija yra 0,1%.

6.Sandėliavimas

Tinkamumo laikas: dveji metai šaldytuve 2-8°C temperatūroje. Atidarytas buteliukas tinkamas naudoti visą galiojimo laiką, laikomas šaldytuve, hermetiškai uždarytas.

Skundo pagrindas yra: aktyvumo stoka, nekonkretumas, buteliuko vientisumo pažeidimas, dribsnių buvimas, pasibaigęs reagento galiojimo laikas. Pateikdami skundą nurodykite gavimo datą, tiekėją (jei prekę gavote ne iš gamintojo), partijos numerį, priežastis, kodėl reagentas buvo pripažintas netinkamu. Pridėkite protokolą su reagento tyrimo rezultatais ir 2-3 neatidarytus buteliukus su reagentu
Skundas turi būti siunčiamas gamintojui LLC "MEDICLON": 127276