Методът за оцветяване FISH (флуоресцентна in situ хибридизация) е разработен в Ливърморската национална лаборатория (САЩ) през 1986 г. Това е принципно нов метод за изследване на хромозомите - метод за флуоресцентно откриване на ДНК чрез in situ хибридизация със специфични молекулярни сонди. Методът се основава на способността на хромозомната ДНК да се свързва при определени условия с ДНК фрагменти (ДНК сонди), които включват нуклеотидни последователности, комплементарни на хромозомната ДНК. ДНК сондите са предварително маркирани със специални вещества (например биотин или дигоксигенин). Маркираните ДНК проби се прилагат към цитогенетични препарати на метафазни хромозоми, подготвени за хибридизация. След като е настъпила хибридизация, препаратите се третират със специални флуоресцентни багрила, конюгирани с вещества, които могат селективно да се прикрепят към биотин или дигоксигенин. Всяка хромозома има определен цвят. Хибридизацията може също да се извърши с радиоактивно маркирани сонди. Цитогенетичният анализ се извършва под флуоресцентен микроскоп под ултравиолетова светлина.
Методът FISH се използва за откриване на малки делеции и транслокации. Хромозомните обмени (транслокации и дицентрики) между различно оцветени хромозоми лесно се определят като многоцветни структури.
Край на работата -
Тази тема принадлежи към раздела:
Обучителен модул. Клетъчна биология
Висше професионално образование.. Башкирски държавен медицински университет.. Министерство на здравеопазването и социалното развитие..
Ако имате нужда от допълнителен материал по тази тема или не сте намерили това, което търсите, препоръчваме да използвате търсенето в нашата база данни с произведения:
Какво ще правим с получения материал:
Ако този материал е бил полезен за вас, можете да го запазите на страницата си в социалните мрежи:
| Tweet |
Всички теми в този раздел:
Обучителен модул. Основи на общата и медицинската генетика
(методически указания за студенти) Учебна дисциплина Биология За направление подготовка Обща медицина Ко.
Правила за изпълнение на лабораторната работа
Необходим елемент от микроскопското изследване на обект е неговото скициране в албум. Целта на скицата е по-доброто разбиране и консолидиране в паметта на структурата на обекта, формата на отделните структури
Практическа работа
1. Приготвяне на временен препарат „Клетки от филм от лук“ За да приготвите временен препарат с филм от лук, отстранете
Структура на цитоплазмените мембрани. Транспортна функция на мембраните
2. Образователни цели: Да се знае: - структурата на универсалната биологична мембрана - моделите на пасивен транспорт на вещества през мембраните
Структурата на еукариотните клетки. Цитоплазма и нейните компоненти
2. Цели на обучението: Да познава: - особеностите на организацията еукариотни клетки- структура и функция на цитоплазмените органели
Органели, участващи в синтеза на вещества
Във всяка клетка се синтезират характерни за нея вещества, които са или строителни материали за новообразувани структури, за да заменят износените, или ензими, участващи в биохимични реакции.
Органели със защитни и храносмилателни функции
Лизозоми Тези органели са известни от 50-те години на 20 век, когато белгийският биохимик дьо Дюве открива малки гранули, съдържащи хидролитични вещества в чернодробните клетки.
Органели, участващи в енергийното снабдяване на клетката
По-голямата част от клетъчните функции включват разход на енергия. Живата клетка го образува в резултат на постоянно протичащи редокс процеси, които съставляват
Органели, участващи в клетъчното делене и движение
Те включват клетъчния център и неговите производни - реснички и флагели. Клетъчен център Клетъчният център се намира в животинските клетки и в някои
Практическа работа №1
1. Микроскопски анализ на перманентен препарат „Комплекс Голджи в клетките” спинален ганглий» На препарата, нервни клетки на името на
Рибозоми
Идентифициран с помощта на електронна микроскопияв клетките на всички про- и еукариотни организми техният размер е 8-35 nm, те са в съседство с външната мембрана на ендоплазмения ретикулум. На рибозомите се осъществява с
Гранулиран ендоплазмен ретикулум
Разгледайте субмикроскопската структура на грапавия ендоплазмен ретикулум в електронна микрография. Идентифицирани са три области на ацинарни клетки на гладния панкреас прилеп. Преди
Цитоплазмени микротубули
Цитоплазмените тръби се намират в клетките на всички животински и растителни организми. Това са цилиндрични, нишковидни образувания с дължина 20-30 микрона, 1
Митотична активност в тъканите и клетките
Понастоящем са изследвани митотичните цикли и режимът на митотична активност на много животински и растителни тъкани. Оказа се, че всяка тъкан има определено ниво на митотична активност. О, м
Митоза (непряко делене) в клетките на корена на лука
С помощта на микроскоп с ниско увеличение намерете зоната на възпроизвеждане на върха на лука, поставете в центъра на зрителното поле област с ясно видими активно делящи се клетки. След това настройте препарата на висока мощност
Амитоза (директно делене) в миши чернодробни клетки
Изследвайте чернодробните клетки на мишка при голямо увеличение под микроскоп. В препарата клетките имат многостранна форма. В неделящите се клетки ядрото е кръгло с ядро. В делящи се клетки, които са започнали да
Синкарионна яйцеклетка на кръгъл червей
С помощта на микроскоп с ниско увеличение намерете част от матката на кръглия червей, пълна с фоликули, съдържащи яйца. Разгледайте образеца при голямо увеличение. Цитоплазмата в яйцата се свива и се отлепва
Структура и функции на ДНК и РНК. Генна структура и регулация на генната експресия при про- и еукариоти. Етапи на биосинтеза на протеини
2. Цели на обучението: Да се знае: - химичен състави особености на организацията на нуклеиновите киселини; - разлики между ДНК и РНК;
Модели на унаследяване на белези при монохибридни кръстосвания. Видове взаимодействие на алелни гени
2. Образователни цели: Да познава: - закономерности на монохибридно кръстосване; - I и II закон на Мендел; - видове взаимодействие
Закон за независимото наследяване на характеристиките. Видове взаимодействие на неалелни гени
2. Образователни цели: Да познава: - закономерности на ди- и полихибридно кръстосване; - III закон на Мендел; - видове взаимодействие
Променливостта като свойство на живите същества, неговата форма. Фенотипна (модифицираща или ненаследствена) променливост. Генотипна изменчивост
2. Цели на обучението: Да познава: - основните форми на изменчивост; - придобиват идеи за проникновеността и изразителността на разпознаването
Самостоятелна работа на учениците под ръководството на учител
Практическа работа Определяне на степента на изменчивост на признака и коефициента на вариация в зависимост от условията на средата.
Анализ на родословието
Не всички генетични методи са приложими за анализа на унаследяването на определени черти при хората. Въпреки това, чрез изучаване на фенотипа на няколко поколения роднини, е възможно да се установи естеството на наследството
Двоен метод за изследване на човешката генетика
Двойният метод ни позволява да оценим относителната роля на генетичните фактори и факторите на околната среда в развитието на определена черта или заболяване. Близнаците могат да бъдат еднояйчни (еднояйчни) или дизиготни (еднакви
Дерматоглифен метод за изследване на човешката генетика
Дерматоглифният анализ е изследване на папиларни модели на пръстите, дланите и краката. Тези участъци от кожата имат големи дермални папили, а епидермисът, който ги покрива, образува g
Цитогенетичен метод в изследването на генетиката на човека
Сред многото методи за изследване на наследствената патология на човека, цитогенетичният метод заема значително място. С помощта на цитогенетичния метод е възможно да се анализира материалната основа на наследствеността
Изследване на хромозомния набор
Може да се извърши по два начина: 1) директен метод - изследване на метафазни хромозоми в делящи се клетки, напр. костен мозък(от
Практическа работа
1. Разглеждане на демонстрационния препарат „Човешки кариотип” в цитогенетична лаборатория При увеличение X90 в зрителното поле се виждат левкоцити
Анализ на кариотипа при пациенти с хромозомни заболявания (от снимки)
№ 1. тризомия на хромозома 13 (синдром на Патау). Кариотип 47, +13. № 2. тризомия на хромозома 18 (синдром на Едуардс). Кариотип 47, +18. № 3. тризомия 21 (болест на Даун).
Извършване на анализ на пръстови отпечатъци
За да направите собствени пръстови отпечатъци, ви е необходимо следното оборудване: фотографски валяк, стъкло с площ 20x20 cm2, парче гума от порест материал, печатарско мастило (или др.
Цитогенетичен анализ на кариотипа (на базата на микроснимки на метафазни плаки)
1. Начертайте метафазната плоча. 2. Изчислете обща сумахромозоми. 3. Идентифицирайте хромозоми от групи А (3 двойки големи метацентрични хромозоми), В (две двойки големи
Експресен метод за изследване на X-sex хроматин в ядрата на епитела на устната лигавица
Преди да вземете остъргване, пациентът е помолен да захапе лигавицата на бузата със зъби и да избърше вътрешната повърхност на бузата с марля. Тази процедура е необходима за отстраняване на унищожени клетки, напр
Популационен статистически метод
Популацията е съвкупност от индивиди от един и същи вид, обитаващи дълго време една територия, относително изолирани от други групи индивиди от този вид, свободно кръстосващи се и произвеждащи
Биохимичен метод
Биохимичните методи се основават на изследване на активността на ензимните системи (или чрез активността на самия ензим, или чрез броя на крайните продукти на реакцията, катализирана от този ензим). Биохимикали
Молекулярно-генетичен метод
Всички молекулярно-генетични методи се основават на изследване на структурата на ДНК. Етапи на ДНК анализ: 1. Изолиране на ДНК от клетки, съдържащи ядра (кръв
Полимеразна верижна реакция на синтеза на ДНК
Полимераза верижна реакция(PCR) е метод за амплификация (възпроизвеждане) на ДНК in vitro, с помощта на който в рамките на няколко часа можете да идентифицирате и възпроизведете интересен ДНК фрагмент с размер от 80
No Пълно име Генотип Иванов АА Петров Аа
Наблюдаван генотип и алелни честоти
Генотипове, алели Брой случаи Честота (в дроби) AA 1 / 5 = 0,2 Aa
Наблюдавани и очаквани честоти на генотипове и алели
Наблюдаван брой случаи Наблюдавана честота Очаквана честота на AA (p2)
Наблюдаван генотип и алелни честоти
Не. Възможност за навиване на езика в тръба Генотипове Мога (да) A_
Рак на млечната жлеза - опасна болест, което според статистиката е на първо място сред раковите заболявания при жените. Рискът от развитие на това заболяване се увеличава при всички жени над 40 години и може да се дължи на няколко други фактора. Най-вероятните причини за рак на гърдата включват затлъстяване, генетична или наследствена предразположеност, ранен стартменструация и нейното късно завършване, хормонална или лъчева терапия.
В допълнение, рискът от заболеваемост е повишен при нераждали жени и жени, които вече са имали рак. Мъжете също могат да получат рак на гърдата.
Видове и методи за диагностика
Първият етап от диагностицирането на рак на гърдата е рутинен преглед от мамолог. Жените над 40 години трябва да се подлагат на такива прегледи поне веднъж на две години. Лекарят извършва визуален преглед, палпация и мамография на млечните жлези. Визуалните признаци на развитие на заболяването могат да включват:
Главна информация
Рентгенографията на гърдата (мамография) ви позволява да определите наличието, размера и местоположението на тумора. За повишаване на точността на получените резултати се използва технологията за въвеждане на контрастно вещество. Ако вече е открит тумор, тогава се използва методът на пневмоцистография - отстраняване на туморна течност и въвеждане на въздух в кухината. Ако наличието на тумор не е уточнено, тогава се използва дуктография - въвеждане на контрастно вещество в млечните канали.
Тези методи ви позволяват да визуализирате наличието на образувания в гръдната тъкан.
Ако наличието на тумор стане очевидно и при мамография, пациентът получава направление за набор от диагностични мерки:
С помощта на ултразвук лекарят може да различи тумор от киста и да изясни местоположението на образуването. След това от него се взема тъканна проба за биопсия. Биопсията ви позволява да разберете вида на тумора: доброкачествен или злокачествен, както и да определите дали туморът е хормонално зависим. Тази информация позволява на лекаря да вземе решение за стратегия за лечение, но не винаги дава възможност да се определи етапът. Често, дори и при всички необходими диагностични мерки, може да се определи само след операция.
Механизъм на хистологичните изследвания
Преди и след операцията се извършва тъканна биопсия. Процедурата се извършва след изясняване на локализацията на образуванието.
Биопсията е процес на отстраняване на парче тъкан и нейното изследване се нарича „хистологично изследване“ или просто „хистология“.
Медицинският работник използва специална игла за отстраняване на малко количество тъкан от тумора или тумор, който вече е бил отстранен от тялото на пациента, се изпраща за хистологично изследване. След това тъканният фрагмент е специално оцветен и обработен, за да се увеличи контрастът и да се улесни изследването. Специалистът изследва среза под микроскоп и дава мнение за качеството на туморната формация. Много в това изследване зависи от вниманието и квалификацията на лабораторния техник, който дава заключението.
Подобно изследване е имунохистохимията. Като цяло може да се нарече и „хистология“, т.к методът се основава на изследване на тъкани, но имунохистохимията е по-напреднал метод за анализ. При това изследване тъканта се оцветява и със специални реагенти, които не само засилват визуалния контраст, но и се комбинират („маркират“) с антитела по специален начин, което дава възможност да се изяснят повече характеристики на тумора. В този случай реакцията протича много по-бързо, което ви позволява бързо да получите резултатите от анализа.
Имунохистохимията позволява не само да се изясни вида на тумора, но и да се планира стратегия за лечение на пациента въз основа на идентифициране на чувствителността на туморната тъкан към различни видоветерапевтични ефекти. В допълнение, това изследване е възможно най-автоматизирано, което ни позволява да сведем до минимум вероятността от диагностична грешка поради човешкия фактор.
Има и съвременни диагностични мерки, които позволяват да се открие наличието на тумор в тялото: това е спектрален кръвен тест, имунологичен (биохимичен) анализ, FISH тест на туморна тъкан. Генетичният кръвен тест позволява на всяка жена да провери дали има или няма предпоставки за рак на гърдата. CT и MRI позволяват точно да се определи местоположението на тумора и да се наблюдава динамиката на неговото развитие, като се оценява структурата на тумора.
Как да открием рак чрез кръвен тест?
Обикновено кръвен тест се предписва от лекар след ултразвуково изследване. Има ситуации, когато пациент по собствена инициатива дарява кръв за маркери на прозорци или генетичен анализ, за да идентифицира предразположението към рак на гърдата. В някои случаи общият кръвен тест може да бъде причина да се свържете с онкологична клиника (заедно с палпиране на бучка или визуални признаци на рак).
Биохимичен анализ
Кръвта като материал за изследване позволява извършването на следните диагностични мерки:
В същото време само първите два анализа могат да се нарекат специализирани методи за определяне на рак, вторият от които е по-скоро превантивна мярка, отколкото оперативна. Други два кръвни теста се правят предимно преди операцията, за да се установи състоянието на организма и степента на процеса. Въпреки това, както вече беше споменато, ако се усети бучка в гърдите и общият кръвен тест показва повече от два отрицателни диагностични коефициента, това е причина да се консултирате със специалист. Отрицателните коефициенти са показатели извън нормата в определени параметри на кръвния състав.
Биохимичният кръвен тест може да установи наличието на антитела срещу туморни клетки. Такива тела се наричат туморни маркери. Броят и видът на туморните маркери зависи от спецификата (локализацията) раков тумори етапа на неговото развитие. Туморните маркери включват:
В случай на рак на гърдата, лекуващият лекар ще се интересува предимно от наличието на туморен маркер CA-15-3, тъй като присъствието му в кръвта ясно показва рак на гърдата. Декодирането на резултата отнема средно един ден. Биохимичен анализ се извършва няколко пъти в хода на заболяването. Кръвта за това се взема от вената през първата половина на деня на празен стомах. Две седмици преди изследването пациентът спира приема на всички лекарства(потвърждава се от лекуващия лекар). Два дни преди кръводаряване не трябва да пиете алкохол, мазни и пържени храни.
Един час преди процедурата не трябва да се пуши и е препоръчително да се намали емоционалният стрес. Кръв върху биохимичен анализОбикновено те не се приемат веднага след лъче- и физиотерапевтично лечение.
Определяне на генетични фактори
Преди да говорим за генетично кръвно изследване, си струва да подчертаем разликата между понятията „генетичен“ и „наследствен“. Генетичен факторпоявата на рак е по-широко понятие, което предполага не само наличието на роднини с рак на гърдата, но и специфична генна мутация, която увеличава риска от това заболяване.
Наследствеността предполага потенциален риск от рак на гърдата въз основа на фамилната история. В същото време не само жените, но и мъжете могат да получат мутантния ген, но неговият носител не е задължително да се разболее.
Всяка жена може да се подложи на генетично изследване. Това се препоръчва особено за тези, чиито преки роднини са имали рак на гърдата. Преди да дари кръв за анализ, пациентът трябва да говори със специалист в областта на генетиката, който ще обясни нюансите на дешифрирането на резултатите. Не се изисква специална подготовка от пациента преди кръводаряване.
В случай на получаване положителен резултат BRCA генни мутации, но при липса на други тревожни симптоми, няма място за паника. Жените с мутации в тези гени може да бъдат посъветвани да се подлагат на редовен самоизследване и физически прегледи като превантивни мерки. След 40 години има смисъл да се мисли за отстраняване на яйчниците и гърдите; по-младите жени, които не планират да имат деца в бъдеще, понякога се препоръчват да приемат контрацептиви. Решението за тези мерки е изцяло на плещите на самата жена и изисква обмислен подход и консултация с лекари.
Най-новите диагностични методи
Спектрален анализкръвта разкрива наличието на тумори в тялото с вероятност до 93%. Това е сравнително евтин диагностичен метод, който се основава на облъчване на кръвен серум с инфрачервен спектър и анализ на неговия молекулен състав.
Заключението за спектрален кръвен тест се дава на принципа "наличие-отсъствие" и е насочено към идентифициране на повечето видове злокачествени тумори. Този тест може също така да определи етапа на развитие на рака на гърдата. Резултатите се дешифрират в лабораторията и не изискват допълнително лекарско мнение.
За да дарите кръв за спектрален анализ, е необходимо да спрете приема на лекарства 2 месеца преди процедурата. От момента на рентгеново или друго облъчване, както и химиотерапия трябва да минат най-малко 3 месеца. Освен това жената не трябва да е бременна или да има менструация по време на вземането на кръв. Вземането на кръв се извършва на празен стомах през първата половина на деня. Един спектрален кръвен тест отнема средно 12 работни дни.
Един от най-новите методиДиагнозата на рака е така нареченият „фиш тест” (FISH, флуоресцентна хибридизация). Ефективността му все още се обсъжда; основният въпрос за неговата осъществимост е скъпата изследователска процедура. Същността на метода е маркиране на клетъчни фрагменти с флуоресцентен състав и последващо микроскопско изследване на клетките. Въз основа на това с кои части от генетичния материал са свързани белязаните фрагменти, може да се разбере дали пациентът има предразположеност към рак и какви методи на лечение ще бъдат подходящи в конкретен случай.
Тестът FISH не изисква напълно зрели клетки, така че е много по-бърз за изпълнение от други лабораторни тестове. В допълнение, методът FISH ви позволява по-ясно да наблюдавате генетичните увреждания, което е невъзможно да се направи с други видове анализи. Тестът FISH най-често се използва за откриване на рак на гърдата, но работи и за откриване на няколко други вида рак.
Недостатъците на теста FISH включват, в допълнение към високата му цена, неговата неспособност да работи върху някои хромозомни региони поради спецификата на таговете. В допълнение, тестът FISH игнорира някои видове мутации и повреди генетичен код, което може да бъде важен диагностичен пропуск. Сравнителните проучвания на FISH с по-евтиния IHC тест не показват значително предимство при определяне на чувствителността на раковите клетки към Herceptin. Въпреки това тестът FISH в момента е най-бързият сред високоточните методи за диагностициране на рак.
Ръководител на
"онкогенетика"
Жусина
Юлия Генадиевна
Завършил педиатричния факултет на Воронежския щат медицински университеттях. Н.Н. Бурденко през 2014 г.
2015 г. - стаж по терапия в катедрата по факултетна терапия на VSMU. Н.Н. Бурденко.
2015 г. - сертификационен курс по специалност "Хематология" в Научноизследователския център по хематология в Москва.
2015-2016 г. – терапевт във ВГКБСМП №1.
2016 г. - темата на дисертацията за научната степен на кандидата е одобрена медицински науки"изучаване клинично протичанезаболяване и прогноза при пациенти с хронична обструктивна белодробна болест с анемичен синдром. Съавтор на повече от 10 публикувани труда. Участник в научно-практически конференции по генетика и онкология.
2017 г. - курс за напреднали на тема: „интерпретация на резултатите от генетични изследвания при пациенти с наследствени заболявания“.
От 2017 г. пребиваване по специалността „Генетика“ на базата на RMANPO.
Ръководител на
"генетика"
Канивец
Иля Вячеславович
Канивец Иля Вячеславович, генетик, кандидат на медицинските науки, ръководител на генетичния отдел на медицинския генетичен център Genomed. асистент, Катедра по медицинска генетика, рус медицинска академиянепрекъснато професионално обучение.
Завършва Медицинския факултет на Московския държавен медико-стоматологичен университет през 2009 г., а през 2011 г. - ординатура по специалността "Генетика" в катедрата по медицинска генетика на същия университет. През 2017 г. защитава дисертация за научна степен "Кандидат на медицинските науки" на тема: Молекулярна диагностика на вариациите на броя на копията на ДНК участъци (CNVs) при деца с вродени малформации, фенотипни аномалии и/или умствена изостаналостпри използване на SNP олигонуклеотидни микрочипове с висока плътност"
От 2011-2017 г. работи като генетик в Детската клинична болница на името на. Н.Ф. Филатов, научно-консултативен отдел на Федералната държавна бюджетна институция „Център за медико-генетични изследвания“. От 2014 г. до момента ръководи отделението по генетика на МЦ Геномед.
Основни области на дейност: диагностика и лечение на пациенти с наследствени заболявания и вродени малформации, епилепсия, медицинско и генетично консултиране на семейства, в които е родено дете с наследствена патология или дефекти в развитието, пренатална диагностика. По време на консултацията се анализират клинични данни и генеалогия, за да се определи клиничната хипотеза и необходимото количество генетични изследвания. Въз основа на резултатите от проучването данните се интерпретират и получената информация се разяснява на консултантите.
Той е един от създателите на проекта „Училище по генетика”. Редовно изнася презентации на конференции. Изнася лекции пред генетици, невролози и акушер-гинеколози, както и пред родители на пациенти с наследствени заболявания. Автор и съавтор е на повече от 20 статии и рецензии в руски и чуждестранни списания.
Област на професионални интереси е прилагането на съвременни геномни изследвания в клиничната практика и интерпретацията на резултатите от тях.
Приемно време: сряда, петък 16-19ч
Ръководител на
"неврология"
Шарков
Артьом Алексеевич
Шарков Артьом Алексеевич– невролог, епилептолог
През 2012 г. учи по международната програма „Ориенталска медицина” в университета Daegu Haanu в Южна Корея.
От 2012 г. - участие в организацията на база данни и алгоритъм за интерпретиране на генетични тестове xGenCloud (https://www.xgencloud.com/, ръководител на проекта - Игор Угаров)
През 2013 г. завършва педиатричния факултет на Руския национален изследователски медицински университет на името на N.I. Пирогов.
От 2013 г. до 2015 г. учи в клинична ординатура по неврология във Федералната държавна бюджетна институция "Научен център по неврология".
От 2015 г. работи като невролог и изследовател в Научноизследователския клиничен институт по педиатрия на името на академик Ю.Е. Велтищев ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогов. Той също така работи като невролог и лекар в лабораторията за видео-ЕЕГ мониторинг в клиниките на Центъра по епилептология и неврология на името на. А.А.Казарян“ и „Епилептичен център“.
През 2015 г. преминава обучение в Италия в училището “2nd International Residential Course on Drug Resistant Epilepsies, ILAE, 2015”.
През 2015 г. усъвършенствано обучение - „Клинична и молекулярна генетика за практикуващи лекари“, RDKB, RUSNANO.
През 2016 г. усъвършенствано обучение - „Основи на молекулярната генетика“ под ръководството на биоинформатик, д-р. Коновалова F.A.
От 2016 г. - ръководител на неврологично направление на лаборатория Genomed.
През 2016 г. завършва обучение в Италия в училището “San Servolo international advanced course: Brain Exploration and Epilepsy Surger, ILAE, 2016”.
През 2016 г. усъвършенствано обучение - „Иновативни генетични технологии за лекари“, „Институт по лабораторна медицина“.
През 2017 г. – школа „NGS по медицинска генетика 2017“, Московски държавен изследователски център
В момента се провежда Научно изследванев областта на генетиката на епилепсията под ръководството на проф. д.м.н. Белоусова Е.Д. и професор, доктор на медицинските науки. Дадали Е.Л.
Утвърдена е темата на дисертацията за научната степен „Кандидат на медицинските науки“ „Клинични и генетични характеристики на моногенни варианти на ранни епилептични енцефалопатии“.
Основните направления на дейност са диагностика и лечение на епилепсия при деца и възрастни. Тясна специализация – хирургично лечение на епилепсия, генетика на епилепсията. Неврогенетика.
Научни публикации
Шарков А., Шаркова И., Головтеев А., Угаров И. „Оптимизация диференциална диагнозаи интерпретация на резултатите от генетични тестове от експертната система XGenCloud за определени форми на епилепсия.“ Медицинска генетика, № 4, 2015, с. 41.
*
Шарков А.А., Воробьов А.Н., Троицки А.А., Савкина И.С., Дорофеева М.Ю., Меликян А.Г., Головтеев А.Л. „Епилептична хирургия при мултифокални мозъчни лезии при деца с туберозна склероза.“ Резюмета на XIV руски конгрес "ИНОВАЦИОННИ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИЯТА И ДЕТСКАТА ХИРУРГИЯ." Руски бюлетин по перинатология и педиатрия, 4, 2015. - p.226-227.
*
Дадали Е.Л., Белоусова Е.Д., Шарков А.А. „Молекулярно-генетични подходи за диагностика на моногенни идиопатични и симптоматични епилепсии.“ Тезис на XIV руски конгрес "ИНОВАЦИОННИ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИЯТА И ДЕТСКАТА ХИРУРГИЯ." Руски бюлетин по перинатология и педиатрия, 4, 2015. - стр.221.
*
Шарков А.А., Дадали Е.Л., Шаркова И.В. „Рядък вариант на ранна епилептична енцефалопатия тип 2, причинена от мутации в гена CDKL5 при пациент от мъжки пол.“ Конференция "Епилептологията в системата на невронауките". Сборник материали от конференцията: / Ред.: проф. Незнанова Н.Г., проф. Михайлова В.А. Санкт Петербург: 2015. – с. 210-212.
*
Дадали Е.Л., Шарков А.А., Канивец И.В., Гундорова П., Фоминых В.В., Шаркова И.В. Троицки А.А., Головтеев А.Л., Поляков А.В. Нов алелен вариант на миоклонус епилепсия тип 3, причинен от мутации в гена KCTD7 // Медицинска генетика.-2015.- Том 14.-№9.- стр.44-47
*
Дадали Е.Л., Шаркова И.В., Шарков А.А., Акимова И.А. „Клинични и генетични особености и съвременни методи за диагностициране на наследствени епилепсии.“ Сборник с материали „Молекулярно-биологични технологии в медицинската практика” / Изд. чл.-кор ДЪЖД А.Б. Масленникова.- Бр. 24.- Новосибирск: Академиздат, 2016.- 262: с. 52-63
*
Белоусова Е.Д., Дорофеева М.Ю., Шарков А.А. Епилепсия при туберозна склероза. В "Болести на мозъка, медицински и социални аспекти" под редакцията на Гусев E.I., Gekht A.B., Москва; 2016 г.; стр.391-399
*
Дадали Е.Л., Шарков А.А., Шаркова И.В., Канивец И.В., Коновалов Ф.А., Акимова И.А. Наследствени заболявания и синдроми, придружени от фебрилни гърчове: клинични и генетични характеристики и диагностични методи. //Руски журнал за детска неврология.- Т. 11.- № 2, стр. 33- 41. doi: 10.17650/ 2073-8803-2016-11-2-33-41
*
Шарков А.А., Коновалов Ф.А., Шаркова И.В., Белоусова Е.Д., Дадали Е.Л. Молекулярно-генетични подходи за диагностика на епилептичните енцефалопатии. Сборник резюмета „VI БАЛТИЙСКИ КОНГРЕС ПО ДЕТСКА НЕВРОЛОГИЯ” / Под редакцията на проф. Гузева V.I. Санкт Петербург, 2016, с. 391
*
Хемисферотомия за лекарствено-резистентна епилепсия при деца с двустранно увреждане на мозъка Зубкова Н.С., Алтунина Г.Е., Землянски М.Ю., Троицки А.А., Шарков А.А., Головтеев А.Л. Сборник резюмета „VI БАЛТИЙСКИ КОНГРЕС ПО ДЕТСКА НЕВРОЛОГИЯ” / Под редакцията на проф. Гузева V.I. Санкт Петербург, 2016, с. 157.
*
*
Статия: Генетика и диференцирано лечение на ранните епилептични енцефалопатии. А.А. Шарков*, И.В. Шаркова, Е.Д. Белоусова, Е.Л. Да, те го направиха. Вестник по неврология и психиатрия, 9, 2016; Vol. 2doi: 10.17116/jnevro 20161169267-73
*
Головтеев А.Л., Шарков А.А., Троицки А.А., Алтунина Г.Е., Землянски М.Ю., Копачев Д.Н., Дорофеева М.Ю. "Хирургично лечение на епилепсия при туберозна склероза" под редакцията на Дорофеева М.Ю., Москва; 2017 г.; стр.274
*
Нов международни класификацииепилепсия и епилептични припадъци на Международната лига срещу епилепсията. Вестник по неврология и психиатрия. C.C. Корсаков. 2017. Т. 117. № 7. С. 99-106
Ръководител на
"Пренатална диагностика"
Киев
Юлия Кириловна
През 2011 г. завършва Московския държавен медицински и стоматологичен университет. ИИ Евдокимова със специалност „Обща медицина” Специалност „Генетика” в катедра „Медицинска генетика” на същия университет.
През 2015 г. е преминала стаж по акушерство и гинекология в Медицинския институт за повишаване на квалификацията на лекарите на Федералната държавна бюджетна образователна институция за висше професионално образование "MSUPP"
От 2013 г. провежда консултации в ДБУ „Център за семейно планиране и репродукция” към Министерството на здравеопазването.
От 2017 г. е ръководител на направление „Пренатална диагностика” на лаборатория Genomed.
Редовно прави презентации на конференции и семинари. Изнася лекции пред различни лекари специалисти в областта на репродукцията и пренаталната диагностика
Извършва медико-генетично консултиране на бременни жени по пренатална диагностика с цел предотвратяване на раждането на деца с вродени дефектиразвитие, както и семейства с предполагаема наследствена или вродена патология. Интерпретира получените резултати от ДНК диагностика.
СПЕЦИАЛИСТИ
Латипов
Артър Шамилевич
Латипов Артур Шамилевич е лекар генетик от най-висока квалификационна категория.
След като завършва медицинския факултет на Казанския държавен медицински институт през 1976 г., той работи дълги години, първо като лекар в кабинета по медицинска генетика, след това като ръководител на медико-генетичния център на Републиканската болница на Татарстан, главен специалист на Министерството на здравеопазването на Република Татарстан и като преподавател в катедрите на Казанския медицински университет.
Автор над 20 научни трудовепо проблемите на репродуктивната и биохимичната генетика, участник в много местни и международни конгреси и конференции по проблемите на медицинската генетика. Той въвежда в практическата работа на центъра методите за масов скрининг на бременни и новородени за наследствени заболявания и извършва хиляди инвазивни процедури при съмнения за наследствени заболявания на плода в различни срокове на бременността.
От 2012 г. работи в катедрата по медицинска генетика с курс по пренатална диагностика в Руската академия за следдипломно образование.
Област на научни интереси: метаболитни заболявания при деца, пренатална диагностика.
Приемно време: сряда 12-15, събота 10-14Лекарите се преглеждат с уговорка.
Генетик
Габелко
Денис Игоревич
През 2009 г. завършва Медицинския факултет на KSMU на име. С. В. Курашова (специалност „Обща медицина”).
Стаж в Санкт Петербургската медицинска академия за следдипломно образование на Федералната агенция за здравеопазване и социално развитие (специалност „Генетика“).
Стаж по терапия. Първична преквалификация по специалността " Ултразвукова диагностика" От 2016 г. е служител в катедра „Фундаментални основи“. клинична медицинаИнститут по фундаментална медицина и биология.
Област на професионални интереси: пренатална диагностика, използване на съвременни скринингови и диагностични методи за идентифициране на генетична патология на плода. Определяне на риска от повторна поява на наследствени заболявания в семейството.
Участник в научно-практически конференции по генетика и акушерство и гинекология.
Трудов стаж 5 години.
Консултация с предварително записванеЛекарите се преглеждат с уговорка.
Генетик
Гришина
Кристина Александровна
Завършила е Московския държавен медицински и стоматологичен университет през 2015 г. със специалност „Обща медицина“. През същата година тя влезе в резидентура по специалността 08/30/30 „Генетика“ във Федералната държавна бюджетна институция „Център за медицински генетични изследвания“.
Назначена е в Лабораторията по молекулярна генетика на комплексно наследствените заболявания (ръководител д-р А.В. Карпухин) през март 2015 г. като научен сътрудник. От септември 2015 г. е преместена на длъжност научен сътрудник. Той е автор и съавтор на повече от 10 статии и резюмета по клинична генетика, онкогенетика и молекулярна онкология в руски и чуждестранни списания. Редовен участник в конференции по медицинска генетика.
Област на научни и практически интереси: медицинско и генетично консултиране на пациенти с наследствена синдромна и мултифакторна патология.
Консултацията с генетик ви позволява да отговорите на следните въпроси:
Симптомите на детето признаци ли са наследствено заболяване
какви изследвания са необходими за установяване на причината
определяне на точна прогноза
препоръки за провеждане и оценка на резултатите от пренаталната диагностика
всичко, което трябва да знаете, когато планирате семейство
консултация при планиране на IVF
консултации на място и онлайн
взе участие в научно-практическата школа „Иновативни генетични технологии за лекари: приложение в клинична практика“, конференцията на Европейското дружество по човешка генетика (ESHG) и други конференции, посветени на човешката генетика.
Провежда медико-генетично консултиране на семейства със съмнение за наследствени или вродени патологии, в т.ч. моногенни заболяванияи хромозомни аномалии, определя индикации за лабораторни генетични изследвания и интерпретира резултатите от ДНК диагностиката. Консултира бременни жени за пренатална диагностика за предотвратяване на раждането на деца с вродени малформации.
Генетик, акушер-гинеколог, кандидат на медицинските науки
Кудрявцева
Елена Владимировна
Генетик, акушер-гинеколог, кандидат на медицинските науки.
Специалист в областта на репродуктивното консултиране и наследствената патология.
Завършва Уралската държавна медицинска академия през 2005 г.
Специализация по акушерство и гинекология
Стаж по специалност "Генетика"
Професионална преквалификация по специалност „Ултразвукова диагностика”
Дейности:
- Безплодие и спонтанен аборт Василиса Юриевна
Завършила е Медицинския факултет на Нижегородската държавна медицинска академия (специалност „Обща медицина”). Завършила е клинична ординатура във ФБНУ "МГНЦ" със специалност "Генетика". През 2014 г. преминава стаж в Клиника за майчинство и детство (IRCCS materno infantile Burlo Garofolo, Триест, Италия).
От 2016 г. работи като лекар-консултант в Genomed LLC.
Редовно участва в научни и практически конференции по генетика.
Основни дейности: Консултации по клинична и лабораторна диагностика на генетични заболявания и интерпретация на резултатите. Лечение на пациенти и техните семейства със съмнение за наследствена патология. Консултиране при планиране на бременност, както и по време на бременност, за пренатална диагностика с цел предотвратяване на раждането на деца с вродени патологии.
Тъй като тестът FISH може да открие генетични аномалии, които причиняват рак, това е така ефективен методдиагностика на някои видове рак. Тестът се използва и за потвърждаване на диагнозата и ви позволява да получите Допълнителна информацияО възможен изходзаболяване и целесъобразността от използване на химиотерапия.
Например, при пациенти с рак на гърдата, FISH тестът на тъкан, взета от биопсия, помага да се определи наличието на копия на гена HER2 в клетките.
Клетките с копия на гена HER2 имат повече HER2 рецептори, които получават сигнали, които стимулират растежа на раковите клетки в гърдата. Следователно, за пациенти с копия на гена HER2 е препоръчително да се използва Herceptin (трастузумаб), агент, който инхибира способността на HER2 рецепторите да приемат сигнали.
Поради високата цена и относителната недостъпност на FISH теста, по-често се използва друг тест за откриване на рак на гърдата - имунохистохотомия (IHC).
В медицинските среди има дебат относно висока ефективност FISH тест в сравнение със стандартните тестове. Въпреки това, благодарение на технологичния напредък, тестът FISH става все по-евтин и по-широко достъпен в различни клинични условия.
Как работи тестът FISH?
Когато се извършва FISH тест върху тъканна проба на пациент, се използват флуоресцентни маркери, които се свързват само с определени областихромозоми. След това с помощта на флуоресцентен микроскоп се определят участъците от хромозомите, към които са свързани флуоресцентните сонди, и наличието възможни отклонения, провокиращи развитието на рак.
IN ракови клеткиМогат да бъдат открити следните отклонения:
- транслокация - преместване на хромозомна секция на нова позиция на същата или друга хромозома;
- инверсия - завъртане на част от хромозома на 180 градуса при запазване на връзката със самата хромозома;
- делеция - загуба на част от хромозома;
- дупликацията е удвояване на част от хромозома, което води до излишък от генни копия в клетката.
Транслокациите помагат за диагностицирането на някои видове левкемия, лимфом и сарком. Наличието на дупликация в клетките на рака на гърдата помага на лекаря да избере оптималното лечение.
Предимството на теста FISH пред стандартните цитогенетични тестове (които изследват генетичния състав на клетките) е, че той може да открие дори най-малките генетични промени, които не могат да се видят с конвенционален микроскоп.
Друга важна разлика на теста FISH е способността да се провежда върху клетки, които все още не са започнали активно да се развиват. Други тестове се извършват върху клетки само след като са пораснали лабораторни условияв рамките на две седмици, така че целият процес може да отнеме до три седмици, а резултатите от теста FISH са известни в рамките на няколко дни.
Примери за FISH тест за диагностика на рак
Въпреки че тестът FISH най-често се използва за анализ на генетични аномалии при рак на гърдата, той може да предостави важна информация и за други видове рак.
Например при диагностициране на рак Пикочен мехурКлетъчният тест в урината FISH дава по-точни резултати от тестовете за анормални клетки. В допълнение, той ви позволява да откриете рецидив на рак на пикочния мехур 3-6 месеца по-рано.
Тестът FISH също помага за откриване на хромозомни аномалии при левкемия, включително клетки, които показват агресивна форма хронична лимфоцитна левкемия(HLL). Пациенти с агресивен CLL може да се нуждаят спешно лечение, докато при по-малко агресивните форми наблюдението може да е достатъчно.
Противоречие на теста за FISH
Не всички експерти са съгласни, че тестът FISH е най-точният тест за диагностициране на ракови заболявания, чувствителни към Herceptin.
През 2010 г. учени от Mayo Institute в Ирландия съобщиха, че по-евтиният IHC тест е почти толкова ефективен, колкото теста FISH за определяне на чувствителността към Herceptin.
Други експерти критикуват теста FISH за това, че не успява да открие малки мутации, като малки делеции, вмъквания и точкови мутации, и за игнориране на някои инверсии.
Подобряване на теста FISH
Въпреки факта, че тестовата технология FISH все още не позволява анализ на всички хромозомни региони, тя непрекъснато се развива в тази посока.
Например през 2007 г. канадски учени обявиха разработването на чип с размерите на предметно стъкло за микроскоп, който ще позволи извършването на FISH тестове с помощта на устройство, което се побира в дланта на ръката.
Този подобрен тест, наречен FISH тест върху чип, ще даде резултати в рамките на един ден и ще струва по-малко от другите тестове.
Кратък отговор: Методът на флуоресцентна in situ хибридизация (FISH) включва използване на уникални ДНК нуклеотидни последователности като сонда за търсене на желаните ДНК последователности в материал, получен от пациента. Методът се основава на комплементарното свързване на ДНК сонда с ДНК на метафазни хромозоми или интерфазни клетки. ДНК сондата и ДНК, която се тества, се денатурират и се образува едноверижна ДНК. ДНК сондата се добавя към хромозомния препарат и се инкубира определено време. Наличието или отсъствието на белязана с флуорохром проба в ДНК след хибридизация се определя чрез изследване на хромозоми с помощта на флуоресцентна микроскопия.
Подробен отговор:
Метод на флуоресцентна хибридизация на мястови позволява да идентифицирате отделни хромозоми или техните индивидуални участъци върху препарати от метафазни хромозоми или интерфазни ядра въз основа на комплементарното взаимодействие на ДНК сонда, конюгирана с флуоресцентен етикет и желания участък от хромозомата. За визуализиране на съединенията пептид-нуклеинова киселина върху хромозомата, PNA проби, базирани на протеинов продукт.
Методът се основава на комплементарното свързване на ДНК сонда с ДНК на метафазни хромозоми или интерфазни клетки и включва следните стъпки:
1. Денатурациядвойноверижна сонда ДНК и прицелна ДНК към едноверижна ДНК под въздействието на висока температура или химически агенти.
2. ХибридизацияДНК сонда с прицелна ДНК съгласно принципа на комплементарност за образуване на двойноверижна хибридна молекула
3. Измиване след хибридизацияза отстраняване на нехибридизирана ДНК сонда
4. Анализхибридизационни сигнали с флуоресцентен микроскоп
ПредимстваМолекулярно-генетичните диагностични методи FISH включват бърз анализ голямо числоклетки, висока чувствителност и специфичност, възможност за изследване на некултивирани и неделящи се клетки.
недостатъциметод са невъзможността за получаване на информация за физическо състояниеДНК или хромозомна област, която се изследва.
FISH се използва при пренатална молекулярно-генетична диагностика и за характеризиране на тумори; в педиатричната практика се използва, като правило, за идентифициране на субмикроскопични делеции, свързани със специфични дефекти в развитието. Синдромите, базирани на микроделеции, преди това се считаха за заболявания с неизвестна етиология, тъй като хромозомните делеции и пренареждания предизвикващи развитиеот тези заболявания обикновено не се визуализират чрез традиционните методи за хромозомен анализ. Такива малки делеции в специфични области на хромозомите могат да бъдат открити с голяма точност FISH метод. Болестите, причинени от субмикроскопични делеции, включват Синдроми на Prader-Willi, Angelman, Williams, Miller-Dieker, Smith-Magenis и велокардиофациален синдром. FISH улеснява диагностицирането на тези синдроми в нетипични случаи, особено в ранна детска възраст, когато много диагностични тестове все още липсват. значими знацизаболявания. Използването на този метод за молекулярно-генетична диагностика също е препоръчително в юношеска и зряла възраст, когато е типично Клинични признациболестите, характерни за детството, претърпяват промени.
121. ДНК сонди. Използването им при определяне на наследствени заболявания.
Кратък преглед
ДНК сондата екъс фрагмент от ДНК, конюгиран с флуоресцеин, ензим или радиоактивен изотоп, който се използва за хибридизация с комплементарния регион на целевата ДНК молекула.
Главна част
ДНК диагностични системи
Информация за цялото разнообразие от свойства на един организъм се съдържа в неговия генетичен материал. По този начин патогенността на бактериите се определя от наличието на определен ген или набор от гени, а наследственото генетично заболяване възниква в резултат на увреждане на определен ген. Сегментът на ДНК, който определя дадена биологична черта, има строго определена нуклеотидна последователност и може да служи като диагностичен маркер.
В основата на много бързи и надеждни диагностични методи е хибридизацията на нуклеиновите киселини - сдвояването на два комплементарни сегмента от различни ДНК молекули. Процедура в общ контуре както следва.
1. Фиксиране на едноверижна ДНК мишена върху мембранен филтър.
2. Прилагане на белязана едноверижна ДНК сонда, която при определени условия (температура и йонна сила) се сдвоява с таргетната ДНК.
3. Измийте филтъра, за да отстраните излишната несвързана белязана ДНК сонда.
4. Откриване на хибридни молекули сонда/мишена.
В диагностичните тестове, базирани на хибридизация на нуклеинова киселина, три компонента са ключови: ДНК сонда, целева ДНК и метод за откриване на хибридизационния сигнал. Системата за откриване трябва да бъде много специфична и силно чувствителна.
*Флуоресцеин (диоксифлуоран, уранин А) - органично съединение, флуоресцентно багрило. В аналитичната химия флуоресцеинът се използва като луминисцентен киселинно-алкален индикатор. В биохимията и молекулярна биологияизотиоцианатни производни на флуоресцеин като биологични багрила за определяне на антигени и антитела.
* Откриването е откриването, идентифицирането, намирането на нещо.
*conjugation=спрежение
*Ако смес от ДНК, например човешка и миша, се разтопи и закали в една „епруветка“, тогава някои участъци от ДНК веригите на мишката ще се обединят отново с допълващи се участъци от човешките ДНК веригите, за да образуват хибриди. Броят на тези обекти зависи от степента на родство на видовете. Колкото по-близо са видовете един до друг, толкова повече области на взаимно допълване на ДНК вериги има. Това явление се нарича ДНК-ДНК хибридизация.
122. Методи и условия за използване на директна ДНК диагностика.
Кратък преглед:
Чрез директни методи се откриват нередности в първичната нуклеотидна последователност на ДНК (мутации и техните видове). Директните методи се характеризират с точност, достигаща почти 100%.
Целта на директната диагностика е да се идентифицират мутантни алели (аномалии в първичната нуклеотидна последователност на ДНК, мутации и техните видове).
Недостатъкът на метода за директна ДНК диагностика е необходимостта да се знае точното местоположение на гена и спектъра на неговите мутации. Методите за директна ДНК диагностика са показани при заболявания като фенилкетонурия (мутация R408W), кистозна фиброза (най-честата мутация delF508), хорея на Хънтингтън (разрастване на тринуклеотидни повторения - CTG повторения) и др.
Пълен отговор:
Чрез директни методи се откриват нередности в първичната нуклеотидна последователност на ДНК (мутации и техните видове). Директните методи се характеризират с точност, достигаща почти 100%. На практика обаче тези методи могат да се използват при определени условия:
1) известна цитогенетична локализация на гена, отговорен за развитието на наследствено заболяване,
2) генът на заболяването трябва да бъде клониран и да се знае неговата нуклеотидна последователност.
Целта на директната диагностика е да се идентифицират мутантни алели (аномалии в първичната нуклеотидна последователност на ДНК, мутации и техните видове). Високата точност на метода за директна ДНК диагностика в повечето случаи не изисква ДНК анализ на всички членове на семейството, тъй като идентифицирането на мутация в съответния ген позволява да се потвърди диагнозата с почти 100% точност и да се определи генотипът на всички членове на семейството на болно дете, включително хетерозиготни носители.
Недостатъкът на метода за директна ДНК диагностика е необходимостта да се знае точното местоположение на гена и спектъра на неговите мутации.
Методите за директна ДНК диагностика са показани при заболявания като фенилкетонурия (мутация R408W), кистозна фиброза (най-честата мутация delF508), хорея на Хънтингтън (разрастване на тринуклеотидни повторения - CTG повторения) и др.
Към днешна дата обаче гените на много заболявания не са картографирани, тяхната екзон-интронна организация е неизвестна и много наследствени заболяваниясе характеризират с изразена генетична хетерогенност, която не позволява пълното използване на директни методи за ДНК диагностика. Следователно информационното съдържание на метода за директна ДНК диагностика варира в широки граници. Така при диагностициране на хорея на Хънтингтън, ахондроплазия е 100%, за фенилкетонурия, кистозна фиброза, адреногенитален синдром - от 70 до 80%, а за болест на Уилсън-Коновалов и миопатия на Дюшен / Бекер - 45-60%. В тази връзка се използват индиректни методи за молекулярно-генетична диагностика на наследствени заболявания.
