Metoda obarvanja FISH (fluorescentna in situ hibridizacija) je bila razvita v Livermore National Laboratory (ZDA) leta 1986. To je bistveno nova metoda za preučevanje kromosomov - metoda fluorescenčne detekcije DNA s hibridizacijo in situ s specifičnimi molekularnimi sondami. Metoda temelji na sposobnosti kromosomske DNA, da se pod določenimi pogoji veže na fragmente DNA (DNA sonde), ki vključujejo zaporedja nukleotidov, komplementarna kromosomski DNA. DNA sonde so vnaprej označene s posebnimi snovmi (na primer biotin ali digoksigenin). Označene DNA sonde se nanesejo na citogenetske pripravke metafaznih kromosomov, pripravljenih za hibridizacijo. Po opravljeni hibridizaciji pripravke obdelamo s posebnimi fluorescenčnimi barvili, konjugiranimi s snovmi, ki se lahko selektivno vežejo na biotin ali digoksigenin. Vsak kromosom ima določeno barvo. Hibridizacijo lahko izvedemo tudi z radioaktivno označenimi sondami. Citogenetska analiza se izvaja pod fluorescenčnim mikroskopom v ultravijolični svetlobi.
Metoda FISH se uporablja za odkrivanje majhnih delecij in translokacij. Kromosomske izmenjave (translokacije in dicentrike) med različno obarvanimi kromosomi zlahka prepoznamo kot večbarvne strukture.
Konec dela -
Ta tema pripada:
Učni modul. celična biologija
Visoka strokovna izobrazba. Baškirska državna medicinska univerza.. Ministrstvo za zdravje in socialni razvoj..
Če potrebujete dodatno gradivo o tej temi ali niste našli tistega, kar ste iskali, priporočamo iskanje v naši bazi del:
Kaj bomo naredili s prejetim materialom:
Če se je to gradivo izkazalo za koristno za vas, ga lahko shranite na svojo stran v družabnih omrežjih:
| tvit |
Vse teme v tem razdelku:
Učni modul. Osnove splošne in medicinske genetike
(navodila za študente) Študentska disciplina Biologija Za smer priprave Splošna medicina Co.
Pravila za registracijo laboratorijskega dela
Nujen element mikroskopske študije predmeta je njegova skica v albumu. Namen skice je bolje razumeti in pritrditi v spomin strukturo predmeta, obliko posameznih struktur.
Praktično delo
1. Priprava začasnega preparata "Celice filma čebule" Za pripravo začasnega preparata s filmom čebule odstranite
Zgradba citoplazemskih membran. Transportna funkcija membran
2. Učni cilji: Spoznati: - zgradbo univerzalne biološke membrane - vzorce pasivnega transporta snovi skozi membrane.
Zgradba evkariontskih celic. Citoplazma in njene sestavine
2. Učni cilji: Poznati: - značilnosti organizacije evkariontske celice- zgradba in delovanje organelov citoplazme
Organele, ki sodelujejo pri sintezi snovi
V kateri koli celici se izvaja sinteza zanjo značilnih snovi, ki so bodisi gradbeni materiali za novonastale strukture namesto obrabljenih, bodisi encimi, ki sodelujejo v biokemičnih reakcijah.
Organeli z zaščitno in prebavno funkcijo
Lizosomi Ti organeli so znani že od petdesetih let 20. stoletja, ko je belgijski biokemik de Duve v jetrnih celicah odkril majhna zrnca, ki vsebujejo hidrolitične
Organele, ki sodelujejo pri oskrbi celice z energijo
Velika večina celičnih funkcij vključuje porabo energije. Živa celica ga tvori kot posledica nenehnih redoks procesov, ki tvorijo
Organeli, ki sodelujejo pri delitvi in gibanju celic
Ti vključujejo celični center in njegove derivate - cilije in flagele. Celični center Celični center se nahaja v živalskih celicah in v nekaterih
Praktično delo št. 1
1. Mikroskopska analiza trajnega preparata "Golgijev kompleks v celicah spinalni ganglij» Na pripravku so živčne celice poimenovane po
Ribosomi
Zaznano z uporabo elektronska mikroskopija v celicah vseh organizmov pro- in evkariontov je njihova velikost 8-35 nm, mejijo na zunanjo membrano endoplazmatskega retikuluma. Izvaja se na ribosomih
Granularni endoplazmatski retikulum
Preglejte submikroskopsko strukturo hrapavega endoplazmatskega retikuluma na elektronski mikrofotografiji. Tri področja acinarnih celic trebušne slinavke stradajočih netopir. prej
Citoplazmatski mikrotubuli
Citoplazemske tubule najdemo v celicah vseh živalskih in rastlinskih organizmov. To so valjaste, nitaste tvorbe, dolge 20-30 mikronov, 1
Mitotična aktivnost v tkivih in celicah
Trenutno so proučeni mitotični cikli in način mitotične aktivnosti mnogih živalskih in rastlinskih tkiv. Izkazalo se je, da ima vsako tkivo določeno stopnjo mitotične aktivnosti. O m
Mitoza (posredna delitev) v celicah korenine čebule
Z majhno povečavo mikroskopa poiščite območje razmnoževanja konice čebule, v sredino vidnega polja postavite območje z jasno vidnimi aktivno delečimi celicami. Nato nastavite zdravilo na veliko povečanje
Amitoza (neposredna delitev) v mišjih jetrnih celicah
Preglejte mišje jetrne celice pri veliki povečavi mikroskopa. Na preparatu imajo celice večplastno obliko. V celicah, ki se ne delijo, je jedro zaokroženo z nukleolom. V delečih se celicah, ki so se začele
Ascaris ovum synkaryon
Z majhno povečavo mikroskopa poiščite del maternice okroglega črva, napolnjen s folikli z jajčeci. Oglejte si vzorec pri veliki povečavi. Citoplazma v jajčecu se skrči in odlušči
Zgradba in funkcije DNA in RNA. Struktura genov in regulacija izražanja genov pri pro- in evkariontih. Faze biosinteze beljakovin
2. Učni cilji: Vedeti: - kemična sestava in značilnosti organizacije nukleinskih kislin; - razlike med DNA in RNA;
Vzorci dedovanja lastnosti pri monohibridnem križanju. Vrste interakcij alelnih genov
2. Učni cilji: Spoznati: - vzorce monohibridnega križanja; - I. in II. Mendlov zakon; - vrste interakcij
Zakon neodvisnega dedovanja lastnosti. Vrste interakcij nealelnih genov
2. Učni cilji: Poznati: - vzorce di- in polihibridnega križanja; - III Mendelov zakon; - vrste interakcij
Spremenljivost kot lastnost živega, njegova oblika. Fenotipska (modifikacijska ali nededna) variabilnost. Genotipska variabilnost
2. Učni cilji: Spoznati: - glavne oblike variabilnosti; - dobijo ideje o prodornosti in izraznosti prepoznavanja
Samostojno delo študentov pod vodstvom učitelja
Praktično delo Ugotavljanje stopnje variabilnosti lastnosti in koeficienta variacije glede na razmere v okolju.
Analiza rodovnika
Vse metode genetike niso uporabne za analizo dedovanja določenih lastnosti pri ljudeh. Vendar pa je s preučevanjem fenotipov več generacij sorodnikov mogoče ugotoviti naravo dedovanja
Dvojna metoda za študij človeške genetike
Dvojna metoda ocenjuje relativno vlogo genetskih in okoljskih dejavnikov pri razvoju določene lastnosti ali bolezni. Dvojčki so enojajčni (enojajni) in dvojajčni (krat
Dermatoglifska metoda za študij človeške genetike
Dermatoglifska analiza je študija papilarnih vzorcev prstov, dlani in stopal. Na teh predelih kože so velike dermalne papile, povrhnjica, ki jih pokriva, pa tvori g
Citogenetska metoda pri proučevanju človeške genetike
Med številnimi metodami za preučevanje dedne patologije človeka zavzema citogenetska metoda pomembno mesto. S pomočjo citogenetske metode je mogoče analizirati materialne temelje dednega
Študija kromosomskega niza
Izvaja se lahko na dva načina: 1) z direktno metodo - študija metafaznih kromosomov v celicah, ki se delijo, npr. kostni mozeg(je
Praktično delo
1. Ogled demonstracijskega preparata "Humani kariotip" v citogenetskem laboratoriju S povečavo X90 so v vidnem polju vidni levkociti.
Analiza kariotipa pri bolnikih s kromosomskimi boleznimi (iz fotografij)
št. 1. trisomija na 13. kromosomu (Patauov sindrom). Kariotip 47, +13. št. 2. trisomija na 18. kromosomu (Edwardsov sindrom). Kariotip 47, +18. 3. trisomija na 21. kromosomu (Downova bolezen).
Izvedba analize prstnih odtisov
Za izdelavo lastnih prstnih odtisov potrebujete naslednjo opremo: fotografski valj, steklo 20x20 cm2, kos penaste gume, tiskarsko barvo (ali podobno).
Citogenetska analiza kariotipa (na podlagi mikrofotografij metafaznih plošč)
1. Skicirajte metafazno ploščo. 2. Izračunaj skupaj kromosomi. 3. Identificirajte kromosome skupin A (3 pari velikih metacentričnih kromosomov), B (dva para velikih
Ekspresna metoda za preučevanje X-spolnega kromatina v jedrih epitelija ustne sluznice
Preden vzamete strganje, bolnika prosimo, da z zobmi ugrizne sluznico lica in obriše notranjo površino lica z gazo. Ta postopek je potreben za odstranitev uničenih celic, g
Populacijsko-statistična metoda
Populacija je skupek osebkov iste vrste, ki dolgo časa naseljujejo isto ozemlje, razmeroma izolirani od drugih skupin osebkov te vrste, se prosto križajo med seboj in dajejo
Biokemijska metoda
Biokemijske metode temeljijo na preučevanju aktivnosti encimskih sistemov (bodisi po aktivnosti samega encima bodisi po količini končnih produktov reakcije, ki jo katalizira ta encim). Biokemikalije
Molekularno genetska metoda
Vse molekularne genetske metode temeljijo na proučevanju strukture DNK. Faze analize DNK: 1. Izolacija DNK iz celic, ki vsebujejo jedra (kr
Polimerazna verižna reakcija sinteze DNA
polimeraza verižna reakcija(PCR) - metoda pomnoževanja (razmnoževanja) DNA in vitro, s pomočjo katere je mogoče v nekaj urah identificirati in razmnožiti zanimiv fragment DNA iz 80
Št. Polno ime Genotip Ivanov AA Petrov Aa
Opazovani genotip in frekvence alelov
Genotipi, aleli Število primerov Pogostost (v deležih) АА 1/5 = 0,2 Аа
Opažene in pričakovane frekvence genotipov in alelov
Opaženo število primerov Opazovana pogostnost Pričakovana pogostnost AA (p2)
Opazovani genotip in frekvence alelov
№ p / p Sposobnost zvijanja jezika v cev Genotipi Lahko (da) A_
Rak dojke - nevarna bolezen, ki je po statističnih podatkih na prvem mestu med rakavimi obolenji pri ženskah. Tveganje za razvoj te bolezni se poveča pri vseh ženskah, starejših od 40 let, in je lahko posledica številnih drugih dejavnikov. Med najverjetnejše vzroke za nastanek raka dojke so debelost, genetska ali dedna nagnjenost, zgodnji začetek menstruacije in njihovega poznega zaključka, hormonske ali radioterapije.
Poleg tega je tveganje za obolevnost povečano pri nosečnicah in ženskah, ki so že prebolele raka. Tudi moški lahko zbolijo za rakom dojke.
Vrste in metode diagnoze
Prvi korak pri diagnosticiranju raka dojke je rutinski pregled pri mamologu. Ženske, starejše od 40 let, morajo te preglede opraviti vsaj enkrat na dve leti. Zdravnik opravi vizualni pregled, palpacijo in mamografijo mlečnih žlez. Vizualni znaki razvoja bolezni so lahko:
splošne informacije
Rentgenski pregled dojk (mamografija) vam omogoča, da ugotovite prisotnost, velikost in lokacijo tumorja. Za izboljšanje natančnosti dobljenih rezultatov se uporablja tehnologija uvajanja kontrastnega sredstva. Če je tumor že odkrit, se uporabi metoda pnevmocistografije - odstranitev tumorske tekočine in vnos zraka v votlino. Če prisotnost tumorja ni določena, se uporablja duktografija - vnos kontrastnega sredstva v mlečne kanale.
Te metode vam omogočajo vizualizacijo prisotnosti formacij v tkivih mlečne žleze.
Če je prisotnost tumorja razvidna tudi na mamografiji, se bolnica napoti na sklop diagnostičnih ukrepov:
Na ultrazvoku lahko zdravnik loči tumor od ciste in razjasni lokalizacijo tvorbe. Po tem se iz njega vzame vzorec tkiva za biopsijo. Biopsija vam omogoča, da ugotovite vrsto tvorbe: benigne ali maligne, pa tudi ugotovite, ali je tumor hormonsko odvisen. Ti podatki omogočajo zdravniku, da se odloči o strategiji zdravljenja, vendar ne omogoča vedno določitve stopnje. Pogosto, tudi z vsemi potrebnimi diagnostičnimi ukrepi, ga je mogoče določiti šele po operaciji.
Mehanizem histoloških študij
Biopsija tkiva se opravi pred operacijo in po njej. Postopek se izvede po razjasnitvi lokalizacije izobraževanja.
Biopsija je postopek odstranitve koščka tkiva, njegova študija pa se imenuje "histološki pregled" ali preprosto "histologija".
Zdravstveni delavec s posebno iglo vzame majhno količino tkiva iz neoplazme ali pa se tumor, ki je že odstranjen iz bolnikovega telesa, pošlje na histološko preiskavo. Nato se fragment tkiva obarva in obdela na poseben način, da se poveča kontrast in olajša preučevanje. Rezino pod mikroskopom pregleda specialist in poda sklep o kakovosti tumorske tvorbe. Veliko v tej študiji je odvisno od pozornosti in usposobljenosti laboratorijskega pomočnika, ki daje zaključek.
Sorodna študija je imunohistokemija. Na splošno se lahko imenuje tudi "histologija", ker. metoda temelji na preučevanju tkiv, vendar je imunohistokemija naprednejša metoda analize. Tkivo v tej študiji je tudi obarvano s posebnimi reagenti, ki ne samo povečajo vizualni kontrast, temveč tudi kombinirajo (»označijo«) s protitelesi na poseben način, kar omogoča določitev več značilnosti neoplazme. Reakcija v tem primeru poteka veliko hitreje, kar vam omogoča hitro pridobivanje rezultatov analize.
Imunohistokemija omogoča ne samo razjasnitev vrste neoplazme, temveč tudi načrtovanje strategije zdravljenja bolnika na podlagi odkrivanja občutljivosti tumorskega tkiva na različne vrste terapevtski učinek. Poleg tega je izvajanje te študije čim bolj avtomatizirano, kar zmanjšuje verjetnost diagnostične napake zaradi človeškega dejavnika.
Obstajajo tudi sodobni diagnostični ukrepi, ki omogočajo odkrivanje prisotnosti tumorja v telesu: to je spektralna analiza krvi, imunološka (biokemijska) analiza, FISH test tumorskega tkiva. Genetski krvni test omogoča vsaki ženski, da preveri prisotnost ali odsotnost predpogojev za nastanek raka dojke. CT in MRI vam omogočata, da natančno določite lokalizacijo tumorja in izsledite dinamiko njegovega razvoja, ocenite strukturo neoplazme.
Kako odkriti raka s krvnim testom?
Krvni test v glavnem predpiše zdravnik po ultrazvočnem pregledu. Obstajajo situacije, ko bolnik na lastno pobudo daruje kri za označevalce oken ali genetsko analizo, da bi ugotovili, ali ima nagnjenost k raku dojke. V nekaterih primerih lahko splošni krvni test služi kot razlog za stik z onkološkim dispanzerjem (skupaj s palpacijo pečata ali vizualnimi znaki raka).
Biokemična analiza
Kri kot material za raziskave omogoča naslednje diagnostične ukrepe:
Hkrati lahko le prvi dve analizi imenujemo specializirani metodi za odkrivanje raka, od katerih je druga bolj preventivni ukrep kot operativni. Dva druga krvna testa se opravita predvsem pred operacijo, da se ugotovi stanje telesa in obseg procesa. Vendar, kot je bilo že omenjeno, če se v prsih čuti pečat in hkrati splošni krvni test pokaže več kot dva negativna diagnostična koeficienta, je to razlog za stik s specialistom. Negativni koeficienti so kazalci zunaj norme pri določenih parametrih sestave krvi.
Biokemični krvni test razkriva prisotnost protiteles proti tumorskim celicam. Takšna telesa se imenujejo tumorski markerji. Število in vrsta tumorskih markerjev je odvisno od specifike (lokalizacije) rakavi tumor in stopnje njegovega razvoja. Tumorski markerji vključujejo:
Pri raku dojk bo lečečega zdravnika zanimala predvsem prisotnost tumorskega markerja CA-15-3, saj njegova prisotnost v krvi nedvoumno kaže na bolezen raka dojke. Dešifriranje rezultata traja v povprečju en dan. Biokemična analiza se izvaja večkrat med potekom bolezni. Kri zanj se vzame iz vene zjutraj na prazen želodec. Dva tedna pred testom bolnik preneha jemati vse zdravila(določi lečeči zdravnik). Dva dni pred darovanjem krvi ne morete jesti alkohola, mastne in ocvrte hrane.
Uro pred postopkom ne morete kaditi in je zaželeno zmanjšati čustveni stres. Kri na biokemična analiza običajno ne odnehajo takoj po obsevanju in fizioterapiji.
Opredelitev genetskih dejavnikov
Preden govorimo o genetskem krvnem testu, je treba poudariti razliko med pojmoma "genetsko" in "dedno". genetski dejavnik Pojav raka je širši pojem, ki ne pomeni le prisotnosti sorodnikov z rakom dojke, temveč tudi specifično gensko mutacijo, zaradi katere se poveča tveganje za to bolezen.
Dedni dejavnik pomeni potencialno tveganje za raka dojke na podlagi družinske anamneze. Hkrati lahko ne le ženske, ampak tudi moški dobijo mutirani gen, vendar njegov nosilec ne bo nujno zbolel.
Vsaka ženska lahko opravi genetsko analizo. To je še posebej priporočljivo za tiste, katerih neposredni sorodniki so imeli raka dojke. Pred postopkom darovanja krvi za analizo se mora s pacientom pogovoriti specialist s področja genetike, ki bo razložil nianse dešifriranja rezultatov. Od bolnika pred darovanjem krvi ni potrebna posebna priprava.
V primeru prejema pozitiven rezultat mutacije v genih BRCA, vendar v odsotnosti drugih simptomi anksioznosti, ni panike. Ženskam z mutacijo teh genov se lahko kot preventivni ukrep priporočajo redni samopregledi in fizični pregledi. Po 40 letih je smiselno razmišljati o odstranitvi jajčnikov in dojk, mlajšim ženskam, ki v prihodnosti ne nameravajo imeti otrok, se včasih priporoča jemanje kontracepcijskih sredstev. Odločitev o teh ukrepih je v celoti na ramenih ženske same in zahteva premišljen pristop in posvetovanje z zdravniki.
Najnovejše diagnostične metode
Spektralna analiza kri razkriva prisotnost neoplazem v telesu z verjetnostjo do 93%. To je relativno poceni diagnostična metoda, ki temelji na infrardečem obsevanju krvnega seruma in analizi njegove molekularne sestave.
Zaključek o spektralni analizi krvi je podan po načelu "prisotnosti-odsotnosti" in je namenjen identifikaciji večine vrst malignih tumorjev. Tudi ta študija lahko določi stopnjo razvoja raka dojke. Interpretacija rezultatov poteka v laboratoriju in ne zahteva dodatnega zdravnikovega mnenja.
Za darovanje krvi za spektralno analizo je potrebno dokončati jemanje zdravil 2 meseca pred posegom. Od trenutka rentgenske ali druge izpostavljenosti, pa tudi kemoterapije, morajo miniti vsaj 3 meseci. Poleg tega ženska v času odvzema krvi ne sme biti noseča ali imeti menstruacijo. Vzorčenje krvi poteka zjutraj na prazen želodec. Spektralna analiza krvi v povprečju traja 12 delovnih dni.
Eden od najnovejše metode diagnostika raka je tako imenovani "ribji test" (FISH, fluorescentna hibridizacija). O njegovi učinkovitosti se še vedno razpravlja, glavno vprašanje njene izvedljivosti pa je drag raziskovalni postopek. Bistvo metode je označevanje celičnih fragmentov s fluorescentno sestavo in nadaljnji mikroskopski pregled celic. Glede na to, s katerimi deli genetskega materiala so bili označeni fragmenti v stiku, je mogoče razumeti, ali ima bolnik nagnjenost k raku in kakšne metode zdravljenja bodo v posameznem primeru pomembne.
Test FISH ne zahteva popolnoma zrelih celic, zato je ta analiza veliko hitrejša od drugih laboratorijskih testov. Poleg tega vam metoda FISH omogoča bolj jasno opazovanje genetskih poškodb, kar z drugimi vrstami analiz ni mogoče. Test FISH se najpogosteje uporablja prav za odkrivanje raka dojke, deluje pa tudi pri odkrivanju nekaterih drugih vrst raka.
Slabosti testa FISH so poleg visokih stroškov tudi nezmožnost delovanja na nekaterih delih kromosomov zaradi specifičnosti oznak. Poleg tega test FISH ne upošteva določenih vrst mutacij in okvar. genetski kod, kar je lahko pomembna pomanjkljivost pri diagnozi. Primerjalne študije FISH s cenejšim IHC testom niso pokazale bistvenih prednosti pri določanju občutljivosti rakavih celic na Herceptin. Kljub temu je test FISH trenutno najhitrejši med visoko natančnimi metodami za diagnosticiranje raka.
Vodja
"Onkogenetika"
Zhusina
Julia Gennadievna
Diplomiral na Pediatrični fakulteti Voroneške države medicinska univerza njim. N.N. Burdenko leta 2014.
2015 - pripravništvo v terapiji na podlagi Oddelka za fakultetno terapijo Voroneške državne medicinske univerze. N.N. Burdenko.
2015 - certifikacijski tečaj na specialnosti "Hematologija" na podlagi Hematološkega raziskovalnega centra v Moskvi.
2015-2016 – terapevt VGKBSMP št. 1.
2016 - odobril temo disertacije za diplomo kandidata medicinske vede"študij klinični potek bolezen in prognoza pri bolnikih s kronično obstruktivno pljučno boleznijo z anemičnim sindromom. Soavtor več kot 10 publikacij. Udeleženec znanstvenih in praktičnih konferenc o genetiki in onkologiji.
2017 - izpopolnjevanje na temo: "interpretacija rezultatov genetskih študij pri bolnikih z dednimi boleznimi."
Od leta 2017 rezidenca na specialnosti "Genetika" na podlagi RMANPO.
Vodja
"Genetika"
Kanivec
Ilja Vjačeslavovič
Kanivets Ilya Vyacheslavovich, genetik, kandidat medicinskih znanosti, vodja oddelka za genetiko medicinskega genetskega centra Genomed. Asistent Oddelka za medicinsko genetiko Ruske federacije medicinsko akademijo stalno strokovno izobraževanje.
Leta 2009 je diplomiral na Medicinski fakulteti Moskovske državne univerze za medicino in zobozdravstvo, leta 2011 pa na specializaciji "Genetika" na oddelku za medicinsko genetiko iste univerze. Leta 2017 je zagovarjal disertacijo za doktorat medicinskih znanosti na temo: Molekularna diagnostika variacije števila kopij DNA (CNV) pri otrocih s prirojenimi malformacijami, fenotipom in/ali anomalijami. duševna zaostalost pri uporabi oligonukleotidnih mikromrež SNP z visoko gostoto"
Od leta 2011 do 2017 je delal kot genetik na Klinični kliniki za otroke. N.F. Filatov, znanstveno-svetovalni oddelek Zvezne državne proračunske znanstvene ustanove "Center za medicinske genetske raziskave". Od leta 2014 do danes vodi oddelek za genetiko MHC Genomed.
Glavne dejavnosti: diagnostika in zdravljenje bolnikov z dednimi boleznimi in prirojenimi malformacijami, epilepsijo, medicinsko genetsko svetovanje družinam, v katerih je bil rojen otrok s dedno patologijo ali malformacijami, prenatalna diagnostika. Med svetovanjem se opravi analiza kliničnih podatkov in genealogije, da se določi klinična hipoteza in potrebna količina genetskega testiranja. Na podlagi rezultatov ankete se podatki interpretirajo in prejete informacije pojasnijo svetovalcem.
Je eden od ustanoviteljev projekta Šola genetike. Redno predstavlja predstavitve na konferencah. Predava za genetike, nevrologe in porodničarje-ginekologe ter za starše bolnikov z dednimi boleznimi. Je avtor in soavtor več kot 20 člankov in recenzij v ruskih in tujih revijah.
Področje strokovnega zanimanja je uvajanje sodobnih genomskih študij v klinično prakso, interpretacija njihovih rezultatov.
Sprejemni čas: sre, pet 16.-19
Vodja
"nevrologija"
Šarkov
Artem Aleksejevič
Šarkov Artjom Aleksejevič– nevrolog, epileptolog
Leta 2012 je študiral v okviru mednarodnega programa »Oriental medicine« na univerzi Daegu Haanu v Južni Koreji.
Od 2012 - sodelovanje pri organizaciji baze in algoritma za interpretacijo genetskih testov xGenCloud (https://www.xgencloud.com/, vodja projekta - Igor Ugarov)
Leta 2013 je diplomiral na Pediatrični fakulteti Ruske nacionalne raziskovalne medicinske univerze po imenu N.I. Pirogov.
Od leta 2013 do 2015 je študiral klinično specializacijo iz nevrologije na Zvezni državni proračunski znanstveni ustanovi "Znanstveni center za nevrologijo".
Od leta 2015 dela kot nevrolog, raziskovalec na Znanstvenoraziskovalnem kliničnem inštitutu za pediatrijo po imenu akademika Yu.E. Veltishchev GBOU VPO RNIMU im. N.I. Pirogov. Deluje tudi kot nevrolog in zdravnik v laboratoriju za video-EEG spremljanje v klinikah Centra za epileptologijo in nevrologijo po imenu A.I. A. A. Ghazaryan" in "Center za epilepsijo".
Leta 2015 se je izobraževal v Italiji na šoli »2nd International Residential Course on Drug Resistant Epilepsies, ILAE, 2015«.
Leta 2015 izpopolnjevanje - "Klinična in molekularna genetika za zdravnike", RCCH, RUSNANO.
V letu 2016 izpopolnjevanje - "Osnove molekularne genetike" pod vodstvom bioinformatike, dr. Konovalova F.A.
Od leta 2016 - vodja nevrološke smeri laboratorija "Genomed".
Leta 2016 se je izpopolnjeval v Italiji na šoli »San Servolo international advanced course: Brain Exploration and Epilepsy Surger, ILAE, 2016«.
Leta 2016 izpopolnjevanje - "Inovativne genetske tehnologije za zdravnike", "Inštitut za laboratorijsko medicino".
Leta 2017 - šola "NGS v medicinski genetiki 2017", Moskovski državni znanstveni center
Trenutno izvaja Znanstvena raziskava na področju genetike epilepsije pod vodstvom prof. dr. med. Belousova E.D. in profesorica, d.m.s. Dadali E.L.
Odobrena je bila tema disertacije za diplomo kandidata medicinskih znanosti "Klinične in genetske značilnosti monogenih variant zgodnjih epileptičnih encefalopatij".
Glavna področja delovanja so diagnostika in zdravljenje epilepsije pri otrocih in odraslih. Ozka specializacija - kirurško zdravljenje epilepsije, genetika epilepsije. Nevrogenetika.
Znanstvene publikacije
Šarkov A., Šarkova I., Golovtejev A., Ugarov I. "Optimizacija diferencialna diagnoza in interpretacija rezultatov genetskega testiranja ekspertnega sistema XGenCloud pri določenih oblikah epilepsije. Medicinska genetika, št. 4, 2015, str. 41.
*
Šarkov A.A., Vorobjov A.N., Troicki A.A., Savkina I.S., Dorofeeva M.Yu., Melikyan A.G., Golovteev A.L. "Kirurgija epilepsije pri multifokalnih možganskih lezijah pri otrocih s tuberozno sklerozo." Povzetki XIV ruskega kongresa "INOVATIVNE TEHNOLOGIJE V PEDIATRIJI IN OTROŠKI KIRURGiji". Ruski bilten perinatologije in pediatrije, 4, 2015. - str.226-227.
*
Dadali E.L., Belousova E.D., Šarkov A.A. "Molekularno genetski pristopi k diagnostiki monogene idiopatske in simptomatske epilepsije". Povzetek XIV ruskega kongresa "INOVATIVNE TEHNOLOGIJE V PEDIATRIJI IN OTROŠKI KIRURGiji". Ruski bilten perinatologije in pediatrije, 4, 2015. - str.221.
*
Šarkov A.A., Dadali E.L., Šarkova I.V. "Redka različica zgodnje epileptične encefalopatije tipa 2, ki jo povzročajo mutacije v genu CDKL5 pri moškem bolniku." Konferenca "Epileptologija v sistemu nevroznanosti". Zbirka konferenčnih gradiv: / Uredila: prof. Neznanova N.G., prof. Mikhailova V.A. Sankt Peterburg: 2015. - str. 210-212.
*
Dadali E.L., Šarkov A.A., Kanivets I.V., Gundorova P., Fominykh V.V., Šarkova I.V. Troitsky A.A., Golovteev A.L., Polyakov A.V. Nova alelna varianta mioklonusne epilepsije tipa 3, ki jo povzročajo mutacije v genu KCTD7 // Medicinska genetika.-2015.- v.14.-№9.- str.44-47
*
Dadali E.L., Šarkova I.V., Šarkov A.A., Akimova I.A. "Klinične in genetske značilnosti ter sodobne metode diagnostike dedne epilepsije". Zbirka gradiva "Molekularne biološke tehnologije v medicinski praksi" / Ed. dopisni član RANEN A.B. Maslennikova.- Št. 24.- Novosibirsk: Academizdat, 2016.- 262: str. 52-63
*
Belousova E.D., Dorofeeva M.Yu., Sharkov A.A. Epilepsija pri tuberozni sklerozi. V "Brain Diseases, Medical and Social Aspects", ki sta ga uredila Gusev E.I., Gekht A.B., Moskva; 2016; str.391-399
*
Dadali E.L., Šarkov A.A., Šarkova I.V., Kanivets I.V., Konovalov F.A., Akimova I.A. Dedne bolezni in sindromi, ki jih spremljajo febrilni krči: klinične in genetske značilnosti ter diagnostične metode. //Ruski časopis za otroško nevrologijo.- T. 11.- št. 2, str. 33-41. doi: 10.17650/ 2073-8803-2016-11-2-33-41
*
Šarkov A.A., Konovalov F.A., Šarkova I.V., Belousova E.D., Dadali E.L. Molekularno genetski pristopi k diagnostiki epileptičnih encefalopatij. Zbirka povzetkov "VI BALTIČKI KONGRES O OTROŠKI NEVROLOGIJI" / Uredila profesorica Guzeva V.I. Sankt Peterburg, 2016, str. 391
*
Hemisferotomija pri epilepsiji, odporni na zdravila, pri otrocih z obojestransko poškodbo možganov Zubkova N.S., Altunina G.E., Zemlyansky M.Yu., Troitsky A.A., Sharkov A.A., Golovteev A.L. Zbirka povzetkov "VI BALTIČKI KONGRES O OTROŠKI NEVROLOGIJI" / Uredila profesorica Guzeva V.I. Sankt Peterburg, 2016, str. 157.
*
*
Članek: Genetika in diferencirano zdravljenje zgodnjih epileptičnih encefalopatij. A.A. Šarkov*, I.V. Šarkova, E.D. Belousova, E.L. Dadali. Revija za nevrologijo in psihiatrijo, 9, 2016; Težava. 2doi:10.17116/jnevro20161169267-73
*
Golovteev A.L., Šarkov A.A., Troitsky A.A., Altunina G.E., Zemlyansky M.Yu., Kopachev D.N., Dorofeeva M.Yu. "Kirurško zdravljenje epilepsije pri tuberozni sklerozi" uredila Dorofeeva M.Yu., Moskva; 2017; str.274
*
Novo mednarodne klasifikacije epilepsije in epileptičnih napadov Mednarodne lige za epilepsijo. Revija za nevrologijo in psihiatrijo. C.C. Korsakov. 2017. V. 117. št. 7. S. 99-106
Vodja
"Prenatalna diagnoza"
Kijev
Julija Kirillovna
Leta 2011 je diplomirala na Moskovski državni medicinski in stomatološki univerzi. A.I. Evdokimova z diplomo iz splošne medicine Študirala je na oddelku za medicinsko genetiko iste univerze z diplomo iz genetike
Leta 2015 je opravila pripravništvo iz porodništva in ginekologije na Medicinskem inštitutu za podiplomsko medicinsko izobraževanje Zvezne državne proračunske izobraževalne ustanove višjega strokovnega izobraževanja "MGUPP"
Od leta 2013 vodi posvetovalni termin v Centru za načrtovanje družine in reprodukcijo DZM.
Od leta 2017 je vodja oddelka za »Prenatalno diagnostiko« laboratorija Genomed.
Redno predstavlja predstavitve na konferencah in seminarjih. Predava zdravnikom različnih specialnosti s področja reprodukcije in prenatalne diagnostike
Izvaja medicinsko genetsko svetovanje nosečnicam o prenatalni diagnostiki z namenom preprečevanja rojstva otrok z prirojene okvare razvoj, pa tudi družine z domnevno dedno ali prirojeno patologijo. Izvaja interpretacijo dobljenih rezultatov DNK diagnostike.
SPECIALISTI
Latypov
Artur Šamilevič
Latypov Artur Shamilevich - zdravnik genetik najvišje kvalifikacijske kategorije.
Po diplomi na medicinski fakulteti Kazanskega državnega medicinskega inštituta leta 1976 je dolga leta delal najprej kot zdravnik v uradu za medicinsko genetiko, nato kot vodja medicinsko genetskega centra republiške bolnišnice Tatarstan, glavni specialist Ministrstvo za zdravje Republike Tatarstan, učitelj na oddelkih Kazanske medicinske univerze.
Avtor več kot 20 znanstvena dela o problemih reproduktivne in biokemijske genetike, udeleženec številnih domačih in mednarodnih kongresov in konferenc o problemih medicinske genetike. V praktično delo centra je uvedel metode množičnega presejanja nosečnic in novorojenčkov za dedne bolezni, opravil na tisoče invazivnih posegov pri sumu na dedne bolezni ploda v različnih obdobjih nosečnosti.
Od leta 2012 dela na Oddelku za medicinsko genetiko s predmetom prenatalne diagnostike na Ruski akademiji za podiplomsko izobraževanje.
Raziskovalno področje – presnovne bolezni pri otrocih, prenatalna diagnostika.
Čas sprejema: sre 12-15, sob 10-14Zdravniki se sprejemajo po dogovoru.
genetik
Gabelko
Denis Igorevič
Leta 2009 je diplomiral na medicinski fakulteti KSMU po imenu. S. V. Kurashova (specialnost "medicina").
Pripravništvo na Sankt Peterburški medicinski akademiji za podiplomsko izobraževanje Zvezne agencije za zdravje in socialni razvoj (specialnost "Genetika").
Pripravništvo v terapiji. Primarna prekvalifikacija po specialnosti " Ultrazvočna diagnostika". Od leta 2016 je zaposlen na Katedri Katedre za temeljno fundiranje klinična medicina Inštitut za temeljno medicino in biologijo.
Področje strokovnega zanimanja: prenatalna diagnostika, uporaba sodobnih presejalnih in diagnostičnih metod za prepoznavanje genetske patologije ploda. Ugotavljanje tveganja ponovitve dednih bolezni v družini.
Udeleženec znanstvenih in praktičnih konferenc o genetiki ter porodništvu in ginekologiji.
Delovne izkušnje 5 let.
Posvetovanje po dogovoruZdravniki se sprejemajo po dogovoru.
genetik
Grishina
Kristina Aleksandrovna
Leta 2015 je diplomirala na Moskovski državni medicinski in stomatološki univerzi iz splošne medicine. Istega leta je vstopila na specializacijo 30.08.30 "Genetika" v Zvezni državni proračunski znanstveni ustanovi "Center za medicinske genetske raziskave".
V Laboratoriju za molekularno genetiko kompleksno dednih bolezni (vodja - doktor bioloških znanosti Karpukhin A.V.) se je zaposlila marca 2015 kot raziskovalna laborantka. Od septembra 2015 je premeščena na delovno mesto raziskovalke. Je avtor in soavtor več kot 10 člankov in povzetkov o klinični genetiki, onkogenetiki in molekularni onkologiji v ruskih in tujih revijah. Redni udeleženec konferenc o medicinski genetiki.
Področje znanstvenih in praktičnih interesov: medicinsko genetsko svetovanje bolnikov z dedno sindromsko in multifaktorsko patologijo.
Posvetovanje z genetikom vam omogoča, da odgovorite na naslednja vprašanja:
Ali so otrokovi simptomi znaki dedna bolezen
katere raziskave so potrebne za ugotovitev vzroka
določitev natančne napovedi
priporočila za izvajanje in vrednotenje rezultatov prenatalne diagnoze
vse, kar morate vedeti o načrtovanju družine
Posvetovanje o načrtovanju IVF
terenska in spletna svetovanja
udeležili znanstveno-praktične šole »Inovativne genetske tehnologije za zdravnike: uporaba v klinična praksa«, konference Evropskega združenja za humano genetiko (ESHG) in druge konference, posvečene humani genetiki.
Zagotavlja medicinsko genetsko svetovanje družinam s sumom na dedno ali prirojeno patologijo, vključno z monogene bolezni in kromosomske nepravilnosti, določa indikacije za laboratorijske genetske študije, interpretira rezultate DNK diagnostike. Svetuje nosečnicam o prenatalni diagnostiki z namenom preprečevanja rojstva otrok s prirojenimi malformacijami.
Genetik, porodničar-ginekolog, kandidat medicinskih znanosti
Kudrjavceva
Elena Vladimirovna
Genetik, porodničar-ginekolog, kandidat medicinskih znanosti.
Specialistka na področju reproduktivnega svetovanja in dedne patologije.
Leta 2005 je diplomiral na Uralski državni medicinski akademiji.
Specializacija iz porodništva in ginekologije
Pripravništvo na specialnosti "Genetika"
Strokovna prekvalifikacija v specialnosti "ultrazvočna diagnostika"
Dejavnosti:
- Neplodnost in spontani splav Vasilisa Jurijevna
Diplomirala je na Medicinski fakulteti Državne medicinske akademije v Nižnem Novgorodu (specialnost "medicina"). Diplomirala je na kliničnem stažu FBGNU "MGNTS" z diplomo iz "Genetike". Leta 2014 je opravila pripravništvo na kliniki za materinstvo in otroštvo (IRCCS materno infantile Burlo Garofolo, Trst, Italija).
Od leta 2016 dela kot zdravnica svetovalka v podjetju Genomed LLC.
Redno sodeluje na znanstvenih in praktičnih konferencah o genetiki.
Glavne dejavnosti: Svetovanje o klinični in laboratorijski diagnostiki genetskih bolezni ter interpretacija rezultatov. Vodenje bolnikov in njihovih družin s sumom na dedno patologijo. Svetovanje pri načrtovanju nosečnosti, pa tudi med nosečnostjo o prenatalni diagnostiki, da bi preprečili rojstvo otrok s prirojeno patologijo.
Ker test FISH odkriva genetske nepravilnosti, ki povzročajo raka, je učinkovita metoda diagnozo nekaterih vrst raka. Test se uporablja tudi za potrditev diagnoze in vam omogoča, da dobite Dodatne informacije O možen izid bolezen in smiselnost uporabe kemoterapije.
Na primer, pri bolnikih z rakom dojke FISH test tkiva, odvzetega med biopsijo, pomaga ugotoviti prisotnost kopij gena HER2 v celicah.
Celice s kopijami gena HER2 imajo več receptorjev HER2, ki sprejemajo signale, ki spodbujajo rast rakavih celic v dojkah. Zato je za bolnike s kopijami gena HER2 priporočljivo uporabljati Herceptin (trastuzumab), zdravilo, ki zavira sposobnost receptorjev HER2 za sprejemanje signalov.
Zaradi visoke cene in relativne nedostopnosti testa FISH se pogosteje uporablja drug test za odkrivanje raka dojke, imunohistokemija (IHC).
V medicinskih krogih potekajo polemike o visoka učinkovitost Test FISH v primerjavi s standardnimi testi. Zaradi tehnološkega napredka pa test FISH postaja cenejši in bolj dostopen v različnih kliničnih okoljih.
Kako deluje test FISH
Pri izvajanju testa FISH na vzorcu pacientovega tkiva se uporabljajo fluorescentne oznake, ki se vežejo samo na določena področja kromosomi. Nato se s fluorescenčnim mikroskopom določijo področja kromosomov, na katere so se vezale fluorescenčne sonde, in prisotnost možna odstopanja izzovejo razvoj raka.
IN rakave celice možna so naslednja odstopanja:
- translokacija - prenos dela kromosoma na novo mesto na istem ali drugem kromosomu;
- inverzija - zasuk dela kromosoma za 180 stopinj ob ohranjanju povezave s samim kromosomom;
- delecija - izguba dela kromosoma;
- podvajanje - podvojitev dela kromosoma, kar vodi do presežne vsebnosti kopij gena v celici.
Translokacije pomagajo pri diagnosticiranju nekaterih vrst levkemije, limfoma in sarkoma. Prisotnost podvajanja celic raka dojke zdravniku pomaga pri izbiri najboljšega zdravljenja.
Prednost FISH testa pred standardnimi citogenetskimi testi (ki preučujejo genetsko sestavo celic) je v tem, da lahko odkrije tudi najmanjše genetske spremembe, ki jih z običajnim mikroskopom ni mogoče videti.
Druga pomembna značilnost testa FISH je, da ga lahko izvajamo na celicah, ki se še niso začele aktivno razvijati. Drugi testi se izvajajo na celicah šele potem, ko so zrasle laboratorijske razmere v dveh tednih, torej lahko celoten postopek traja tudi do tri tedne, rezultati FISH testa pa so na voljo v nekaj dneh.
Primeri testa FISH za diagnozo raka
Čeprav se test FISH najpogosteje uporablja za analizo genetskih nepravilnosti pri raku dojke, zagotavlja pomembne informacije tudi o drugih vrstah raka.
Na primer pri diagnosticiranju raka Mehur Test FISH za celice v urinu je natančnejši od testov atipičnih celic. Poleg tega vam omogoča, da določite ponovitev raka mehurja 3-6 mesecev prej.
Test FISH pomaga odkriti tudi kromosomske nepravilnosti pri levkemiji, vključno s celicami, ki kažejo na agresivno obliko. kronična limfocitna levkemija(HLL). Bolniki z agresivno KLL bodo morda potrebovali nujno zdravljenje, pri manj agresivnih oblikah pa lahko zadostuje opazovanje.
Polemika glede testa FISH
Vsi strokovnjaki se ne strinjajo, da je test FISH najnatančnejši test za diagnosticiranje raka, občutljivega na Herceptin.
Leta 2010 so znanstveniki z inštituta Mayo (Irska) izjavili, da je cenejši test IHC skoraj tako učinkovit pri določanju občutljivosti na Herceptin kot test FISH.
Drugi strokovnjaki so kritizirali test FISH, ker ni zaznal majhnih mutacij, kot so majhne delecije, vstavitve in točkovne mutacije, in ker je ignoriral nekatere inverzije.
Izboljšava testa FISH
Kljub temu, da testna tehnologija FISH še ne omogoča analize vseh delov kromosomov, se nenehno razvija v tej smeri.
Na primer, leta 2007 so kanadski znanstveniki napovedali razvoj mikroskopskega stekelca v velikosti čipa, ki bi omogočil izvedbo testa FISH z napravo, ki se prilega vaši dlani.
Ta izboljšani test, imenovan FISH Test on a Chip, bo dal rezultate v enem dnevu in bo stal manj kot drugi testi.
Kratek odgovor: Metoda fluorescenčne in situ hibridizacije (FISH - fluorescence in situ hybridization) vključuje uporabo edinstvenih nukleotidnih zaporedij DNA kot sonde za iskanje želenih zaporedij DNA v materialu, pridobljenem od pacienta. Metoda temelji na komplementarni vezavi DNK sonde na DNK metafaznih kromosomov ali interfaznih celic. Sonda DNK in testna DNK sta denaturirani, da tvorita enoverižno DNK. Kromosomskemu pripravku dodamo sondo DNA in jo inkubiramo določen čas. Prisotnost ali odsotnost s fluorokromom označene sonde v DNA po hibridizaciji se določi s pregledom kromosomov s fluorescentno mikroskopijo.
Podroben odgovor:
Metoda fluorescentne hibridizacije in situ vam omogoča identifikacijo posameznih kromosomov ali njihovih posameznih regij na pripravkih metafaznih kromosomov ali interfaznih jeder na podlagi komplementarne interakcije sonde DNA, konjugirane s fluorescentno oznako, in želene regije na kromosomu. Za vizualizacijo peptidno-nukleinskih spojin na kromosomu so PNA-sonde na osnovi beljakovinski izdelek.
Metoda temelji na komplementarni vezavi sonde DNA na DNA metafaznih kromosomov ali interfaznih celic in vključuje naslednje korake:
1. Denaturacija dvoverižna sonda DNA in ciljna DNA v enoverižno pod vplivom visoke temperature ali kemičnih sredstev.
2. Hibridizacija DNA sonda z DNA tarčo po principu komplementarnosti s tvorbo dvoverižne hibridne molekule
3. Pranje po hibridizaciji za odstranitev nehibridizirane DNA sonde
4. Analiza hibridizacijske signale s fluorescenčnim mikroskopom
Prednosti Metode molekularne genetske diagnostike FISH vključujejo hitro analizo veliko število celice, visoka občutljivost in specifičnost, sposobnost preučevanja nekulturnih in nedeljivih celic.
Napake metoda sta nezmožnost pridobitve informacij o fizično stanje DNK ali regija kromosoma, ki se proučuje.
FISH se uporablja v prenatalni molekularni genetski diagnostiki in za karakterizacijo tumorjev; v pediatrični praksi se praviloma uporablja za identifikacijo submikroskopskih izbrisov, povezanih s specifičnimi malformacijami. Sindromi, ki temeljijo na mikrodelecijah, so prej veljali za bolezni neznane etiologije, saj so kromosomske delecije in preureditve, povzročajo razvoj teh bolezni običajno ni mogoče prikazati s tradicionalnimi metodami kromosomske analize. Tako majhne delecije v določenih regijah kromosomov je mogoče zaznati z veliko natančnostjo. FISH metoda. Bolezni, ki jih povzročajo submikroskopske delecije, vključujejo Prader-Willijev, Angelmanov, Williamsov, Miller-Diekerjev, Smith-Magenisov sindrom in velokardiofacialni sindrom. FISH olajša diagnozo teh sindromov v netipičnih primerih, zlasti v otroštvu, ko še manjka veliko diagnostičnih orodij. pomembne lastnosti bolezni. Uporaba te metode molekularne genetske diagnostike je priporočljiva tudi v adolescenci in odrasli dobi, ko je Klinični znaki bolezni, značilne za otroštvo, se spremenijo.
121. DNK sonde. Njihova uporaba pri določanju dednih bolezni.
Kratek pregled
DNK sonda je kratek fragment DNA, konjugiran s fluoresceinom, encimom ali radioaktivnim izotopom, ki se uporablja za hibridizacijo s komplementarno regijo ciljne molekule DNA.
Glavni del
DNK diagnostični sistemi
Informacije o celotni raznolikosti lastnosti organizma so vsebovane v njegovem genetskem materialu. Tako je patogenost bakterij določena s prisotnostjo določenega gena ali niza genov v njih, dedna genetska bolezen pa nastane kot posledica poškodbe določenega gena. Segment DNK, ki določa danost biološka lastnost, ima strogo določeno nukleotidno zaporedje in lahko služi kot diagnostični marker.
Številne hitre in zanesljive diagnostične metode temeljijo na hibridizaciji nukleinskih kislin – združevanju dveh komplementarnih segmentov različnih molekul DNA. Postopek v na splošno sestoji iz naslednjega.
1. Fiksacija tarče enoverižne DNA na membranski filter.
2. Aplikacija označene enoverižne DNA sonde, ki se pod določenimi pogoji (temperatura in ionska moč) spari s tarčno DNA.
3. Izpiranje filtra, da odstranite odvečno nevezano označeno DNA sondo.
4. Detekcija hibridnih molekul sonda/tarča.
Pri diagnostičnih testih, ki temeljijo na hibridizaciji nukleinskih kislin, so ključne tri komponente: sonda DNA, tarča DNA in metoda detekcije hibridizacijskega signala. Sistem zaznavanja mora biti zelo specifičen in zelo občutljiv.
* Fluorescein (dioksifluoran, uranin A) - organska spojina, fluorescentno barvilo. V analitični kemiji se fluorescein uporablja kot luminiscenčni kislinsko-bazični indikator. v biokemiji in molekularna biologija izotiocianatni derivati fluoresceina kot biološka barvila za določanje antigenov in protiteles.
* Detekcija je odkrivanje, prepoznavanje, najdba česa.
*conjugation=konjugacija
*Če mešanico DNK, na primer človeške in mišje, stopimo in žarimo v eni »epruveti«, se bodo nekateri odseki verig mišje DNK rekombinirali s komplementarnimi deli verig človeške DNK in tvorili hibride. Število takih rastišč je odvisno od stopnje sorodnosti vrste. Bližje kot sta vrsti druga drugi, več je regij komplementarnosti verig DNK. Ta pojav se imenuje Hibridizacija DNA-DNA.
122. Metode in pogoji za uporabo neposredne DNK diagnostike.
Kratek pregled:
Z neposrednimi metodami ugotavljamo motnje v primarnem nukleotidnem zaporedju DNK (mutacije in njihove vrste). Za neposredne metode je značilna natančnost, ki doseže skoraj 100%.
Namen neposredne diagnostike je odkrivanje mutantnih alelov (nepravilnosti v primarnem nukleotidnem zaporedju DNA, mutacije in njihove vrste).
Pomanjkljivost neposredne diagnostike DNK je potreba po poznavanju natančne lokacije gena in spektra njegovih mutacij. Metode direktne DNK diagnostike so indicirane pri boleznih kot so fenilketonurija (mutacija R408W), cistična fibroza - (najpogostejša mutacija delF508), Huntingtonova horea (razširitev trinukleotidnih ponovitev-CTG ponovitev) itd.
Celoten odgovor:
Z neposrednimi metodami ugotavljamo motnje v primarnem nukleotidnem zaporedju DNK (mutacije in njihove vrste). Za neposredne metode je značilna natančnost, ki doseže skoraj 100%. Vendar pa je v praksi te metode mogoče uporabiti pod določenimi pogoji:
1) znana citogenetska lokalizacija gena, odgovornega za nastanek dedne bolezni,
2) gen bolezni mora biti kloniran in njegovo nukleotidno zaporedje znano.
Namen neposredne diagnostike je odkrivanje mutantnih alelov (nepravilnosti v primarnem nukleotidnem zaporedju DNA, mutacije in njihove vrste). Visoka natančnost neposredne diagnostične metode DNK v večini primerov ne zahteva analize DNK vseh družinskih članov, saj odkrivanje mutacije v ustreznem genu omogoča potrditev diagnoze s skoraj 100-odstotno natančnostjo in določitev genotipa vsi družinski člani bolnega otroka, vključno s heterozigotnimi nosilci.
Pomanjkljivost neposredne diagnostike DNK je potreba po poznavanju natančne lokacije gena in spektra njegovih mutacij.
Metode direktne DNK diagnostike so indicirane pri boleznih kot so fenilketonurija (mutacija R408W), cistična fibroza - (najpogostejša mutacija delF508), Huntingtonova horea (razširitev trinukleotidnih ponovitev-CTG ponovitev) itd.
Vendar do danes geni številnih bolezni niso bili preslikani, njihova ekson-intronska organizacija ni znana in številne dedne bolezni značilna izrazita genetska heterogenost, ki ne omogoča popolne uporabe neposrednih metod diagnostike DNK. Zato je informativnost metode neposredne diagnostike DNK zelo različna. Torej, pri diagnozi Huntingtonove horeje, ahondroplazije je 100%, s fenilketonurijo, cistično acidozo, adrenogenitalnim sindromom - od 70 do 80%, z boleznijo Wilson-Konovalov in miopatijo Duchenne / Becker - 45-60%. V zvezi s tem se uporabljajo posredne metode molekularne genetske diagnoze dednih bolezni.
