Metóda farbenia FISH (fluorescenčná in situ hybridizácia) bola vyvinutá v Livermore National Laboratory (USA) v roku 1986. Ide o zásadne novú metódu štúdia chromozómov - metódu fluorescenčnej detekcie DNA in situ hybridizáciou so špecifickými molekulárnymi sondami. Metóda je založená na schopnosti chromozomálnej DNA viazať sa za určitých podmienok na DNA fragmenty (DNA sondy), ktoré zahŕňajú nukleotidové sekvencie komplementárne k chromozomálnej DNA. DNA sondy sú vopred označené špeciálnymi látkami (napríklad biotínom alebo digoxigenínom). Značené DNA sondy sa aplikujú na cytogenetické preparáty metafázových chromozómov pripravených na hybridizáciu. Po hybridizácii sa prípravky ošetria špeciálnymi fluorescenčnými farbivami konjugovanými s látkami, ktoré sa môžu selektívne viazať na biotín alebo digoxigenín. Každý chromozóm má špecifickú farbu. Hybridizácia sa môže uskutočniť aj s rádioaktívne značenými sondami. Cytogenetická analýza sa uskutočňuje pod fluorescenčným mikroskopom v ultrafialovom svetle.
Metóda FISH sa používa na detekciu malých delécií a translokácií. Chromozomálne výmeny (translokácie a dicentriky) medzi rôznofarebnými chromozómami sa dajú ľahko identifikovať ako viacfarebné štruktúry.
Koniec práce -
Táto téma patrí:
Učebný modul. bunkovej biológie
Vyššie odborné vzdelanie.. Bashkir State Medical University.. Ministerstvo zdravotníctva a sociálneho rozvoja..
Ak potrebujete ďalší materiál k tejto téme, alebo ste nenašli to, čo ste hľadali, odporúčame použiť vyhľadávanie v našej databáze diel:
Čo urobíme s prijatým materiálom:
Ak sa tento materiál ukázal byť pre vás užitočný, môžete si ho uložiť na svoju stránku v sociálnych sieťach:
| pípanie |
Všetky témy v tejto sekcii:
Učebný modul. Základy všeobecnej a lekárskej genetiky
(usmernenie pre študentov) Akademická disciplína Biológia Za smer prípravy Všeobecné lekárstvo Co.
Pravidlá pre evidenciu laboratórnych prác
Nevyhnutným prvkom mikroskopického štúdia objektu je jeho skica v albume. Účelom skice je lepšie pochopiť a zafixovať si v pamäti štruktúru objektu, tvar jednotlivých štruktúr.
Praktická práca
1. Príprava dočasného prípravku "Cibuľové filmové bunky" Na prípravu dočasného prípravku s cibuľovým filmom odstráňte
Štruktúra cytoplazmatických membrán. Transportná funkcia membrán
2. Učebné ciele: Poznať: - štruktúru univerzálnej biologickej membrány - zákonitosti pasívneho transportu látok cez membrány
Štruktúra eukaryotických buniek. Cytoplazma a jej zložky
2. Ciele vzdelávania: Poznať: - vlastnosti organizácie eukaryotických buniek- stavba a funkcia organel cytoplazmy
Organely zapojené do syntézy látok
V každej bunke sa uskutočňuje syntéza látok pre ňu charakteristických, ktoré sú buď stavebnými materiálmi pre novovzniknuté štruktúry namiesto opotrebovaných, alebo enzýmy zapojené do biochemických reakcií.
Organely s ochrannou a tráviacou funkciou
Lyzozómy Tieto organely sú známe od 50. rokov 20. storočia, keď belgický biochemik de Duve objavil v pečeňových bunkách malé granuly obsahujúce hydrolytické
Organely, ktoré sa podieľajú na zásobovaní bunky energiou
Prevažná väčšina funkcií buniek zahŕňa výdaj energie. Živá bunka ho tvorí v dôsledku neustále prebiehajúcich redoxných procesov, konštituujúcich
Organely zapojené do delenia a pohybu buniek
Patrí medzi ne bunkové centrum a jeho deriváty – mihalnice a bičíky. Bunkové centrum Bunkové centrum sa nachádza v živočíšnych bunkách a v niektorých
Praktická práca č.1
1. Mikroskopická analýza permanentného preparátu „Golgiho komplex v bunkách spinálny ganglion» Na prípravku, nervové bunky pomenované po
Ribozómy
Zistené pomocou elektrónová mikroskopia v bunkách všetkých organizmov pro- a eukaryotov je ich veľkosť 8-35 nm, susedia s vonkajšou membránou endoplazmatického retikula. Vykonáva sa na ribozómoch
Granulárne endoplazmatické retikulum
Preskúmajte submikroskopickú štruktúru hrubého endoplazmatického retikula na elektrónovej mikrofotografii. Tri oblasti acinárnych buniek pankreasu hladujúcich netopier. Predtým
Cytoplazmatické mikrotubuly
Cytoplazmatické tubuly sa nachádzajú v bunkách všetkých živočíšnych a rastlinných organizmov. Sú to valcovité, vláknité útvary dlhé 20-30 mikrónov, 1
Mitotická aktivita v tkanivách a bunkách
V súčasnosti sa študovali mitotické cykly a spôsob mitotickej aktivity mnohých živočíšnych a rastlinných tkanív. Ukázalo sa, že každé tkanivo má určitú úroveň mitotickej aktivity. O m
Mitóza (nepriame delenie) v bunkách koreňov cibule
Pri malom zväčšení mikroskopu nájdite hniezdnu zónu špičky cibule, do stredu zorného poľa umiestnite oblasť s jasne viditeľnými aktívne sa deliacimi bunkami. Potom nastavte liek na veľké zvýšenie
Amitóza (priame delenie) v pečeňových bunkách myší
Preskúmajte bunky pečene myší pri veľkom zväčšení mikroskopu. Na prípravku majú bunky mnohostranný tvar. V nedeliacich sa bunkách je jadro zaoblené s jadierkom. Pri delení buniek, ktoré začali
Ascaris ovum synkaryon
Pri malom zväčšení mikroskopu nájdite časť maternice škrkavky naplnenú folikulmi s vajíčkami. Prezerajte si preparát pri veľkom zväčšení. Cytoplazma vo vajíčku sa zmršťuje a odlupuje
Štruktúra a funkcie DNA a RNA. Štruktúra génov a regulácia génovej expresie u pro- a eukaryotov. Etapy biosyntézy bielkovín
2. Ciele vzdelávania: Vedieť: - chemické zloženie a znaky organizácie nukleových kyselín; - rozdiely medzi DNA a RNA;
Vzorce dedičnosti znakov pri monohybridnom krížení. Typy interakcie alelických génov
2. Učebné ciele: Poznať: - vzorce monohybridného kríženia; - I. a II. Mendelov zákon; - typy interakcie
Zákon nezávislého dedenia vlastností. Typy interakcie nealelických génov
2. Učebné ciele: Poznať: - vzorce di- a polyhybridného kríženia; - III Mendelov zákon; - typy interakcie
Variabilita ako vlastnosť živého, jeho forma. Fenotypová (modifikovaná alebo nededičná) variabilita. Genotypová variabilita
2. Učebné ciele: Poznať: - hlavné formy variability; - získať predstavy o prenikavosti a výraznosti uznania
Samostatná práca žiakov pod dohľadom učiteľa
Praktická práca Stanovenie miery variability znaku a variačného koeficientu v závislosti od podmienok prostredia.
Rozbor rodokmeňa
Nie všetky metódy genetiky sú použiteľné na analýzu dedičnosti určitých vlastností u ľudí. Štúdiom fenotypov niekoľkých generácií príbuzných je však možné určiť povahu dedičnosti
Dvojitá metóda na štúdium ľudskej genetiky
Dvojitá metóda hodnotí relatívnu úlohu genetických a environmentálnych faktorov pri vývoji konkrétneho znaku alebo choroby. Dvojčatá sú jednovaječné (identické) a dvojvaječné (krát
Dermatoglyfická metóda na štúdium ľudskej genetiky
Dermatoglyfická analýza je štúdium papilárnych vzorov prstov, dlaní a chodidiel. V týchto oblastiach kože sú veľké dermálne papily a epidermis, ktorá ich pokrýva, tvorí g
Cytogenetická metóda v štúdiu ľudskej genetiky
Medzi mnohými metódami štúdia dedičnej patológie človeka zaujíma dôležité miesto cytogenetická metóda. Pomocou cytogenetickej metódy je možné analyzovať materiálne základy dedičnosti
Štúdium sady chromozómov
Môže sa uskutočniť dvoma spôsobmi: 1) priamou metódou - štúdiom metafázových chromozómov v deliacich sa bunkách, napr. kostná dreň(je
Praktická práca
1. Prehliadka demonštračného preparátu „Ľudský karyotyp“ v cytogenetickom laboratóriu Pri zväčšení X90 sú v zornom poli viditeľné leukocyty
Analýza karyotypu u pacientov s chromozomálnymi ochoreniami (z fotografií)
č.1. trizómia na 13. chromozóme (Patauov syndróm). Karyotyp 47, +13. č.2. trizómia na 18. chromozóme (Edwardsov syndróm). Karyotyp 47, +18. č.3. trizómia na 21. chromozóme (Downova choroba).
Vykonávanie analýzy odtlačkov prstov
Na vytvorenie vlastných odtlačkov prstov potrebujete nasledujúce vybavenie: fotografický valec, sklo 20x20 cm2, kúsok penovej gumy, tlačiarenskú farbu (alebo podobné
Cytogenetická analýza karyotypu (založená na mikrofotografiách metafázových platničiek)
1. Načrtnite metafázovú platňu. 2. Vypočítajte Celkom chromozómov. 3. Identifikujte chromozómy skupín A (3 páry veľkých metacentrických chromozómov), B (dva páry veľkých
Expresná metóda na štúdium X-sex chromatínu v jadrách epitelu ústnej sliznice
Pred zoškrabaním je pacient vyzvaný, aby zubami zahryzol sliznicu líca a utrel vnútorný povrch líca gázovým obrúskom. Tento postup je potrebný na odstránenie zničených buniek, napr
Populačno-štatistická metóda
Populácia je súbor jedincov toho istého druhu, ktorí dlhodobo obývajú to isté územie, relatívne izolovaní od ostatných skupín jedincov tohto druhu, voľne sa navzájom krížia a dávajú
Biochemická metóda
Biochemické metódy sú založené na štúdiu aktivity enzýmových systémov (buď aktivitou samotného enzýmu alebo množstvom konečných produktov reakcie katalyzovanej týmto enzýmom). Biochemikálie
Molekulárna genetická metóda
Všetky molekulárne genetické metódy sú založené na štúdiu štruktúry DNA. Etapy analýzy DNA: 1. Izolácia DNA z buniek obsahujúcich jadrá (krv
Polymerázová reťazová reakcia syntézy DNA
Polymeráza reťazová reakcia(PCR) - metóda amplifikácie (propagácie) DNA in vitro, pomocou ktorej je možné v priebehu niekoľkých hodín identifikovať a namnožiť požadovaný fragment DNA od 80
č. Celé meno Genotyp Ivanov AA Petrov Aa
Pozorovaný genotyp a frekvencie alel
Genotypy, alely Počet prípadov Frekvencia (v podieloch) АА 1/5 = 0,2 Аа
Pozorované a očakávané frekvencie genotypov a alel
Pozorovaný počet prípadov Pozorovaná frekvencia Očakávaná frekvencia AA (p2)
Pozorovaný genotyp a frekvencie alel
№ p / p Schopnosť zrolovať jazyk do skúmavky Genotypy môžem (áno) A_
Rakovina prsníka - nebezpečná choroba, ktorá je podľa štatistík na prvom mieste medzi nádorovými ochoreniami u žien. Riziko vzniku tohto ochorenia sa zvyšuje u všetkých žien nad 40 rokov a môže byť spôsobené niekoľkými ďalšími faktormi. Medzi najpravdepodobnejšie príčiny rakoviny prsníka patrí obezita, genetická alebo dedičná predispozícia, skorý štart menštruácia a ich neskoré ukončenie, hormonálna alebo radiačná terapia.
Okrem toho je riziko chorobnosti zvýšené u nulipar a žien, ktoré už mali rakovinu. U mužov sa môže vyvinúť aj rakovina prsníka.
Typy a metódy diagnostiky
Prvým krokom pri diagnostike rakoviny prsníka je rutinné vyšetrenie u mamológa. Ženy nad 40 rokov by mali absolvovať tieto prehliadky aspoň raz za dva roky. Lekár vykonáva vizuálne vyšetrenie, palpáciu a mamografiu mliečnych žliaz. Vizuálne príznaky vývoja ochorenia môžu byť:
všeobecné informácie
Röntgenové vyšetrenie prsníka (mamografia) umožňuje určiť prítomnosť, veľkosť a umiestnenie nádoru. Na zlepšenie presnosti získaných výsledkov sa používa technológia zavádzania kontrastnej látky. Ak už bol nádor zistený, potom sa použije metóda pneumocystografie - odstránenie nádorovej tekutiny a zavedenie vzduchu do dutiny. Ak nie je špecifikovaná prítomnosť nádoru, potom sa používa duktografia - zavedenie kontrastnej látky do mliekovodov.
Tieto metódy umožňujú vizualizovať prítomnosť útvarov v tkanivách mliečnej žľazy.
Ak sa prítomnosť nádoru prejaví aj na mamografii, pacientka dostane odporúčanie na súbor diagnostických opatrení:
Na ultrazvuku doktor dokáže rozlíšiť nádor od cysty a objasniť lokalizáciu formácie. Potom sa z nej odoberie vzorka tkaniva na biopsiu. Biopsia vám umožňuje zistiť typ formácie: benígny alebo malígny a tiež určiť, či je nádor závislý od hormónov. Tieto informácie umožňujú lekárovi rozhodnúť o liečebnej stratégii, ale nie vždy umožňujú určiť štádium. Často aj pri všetkých potrebných diagnostických opatreniach je možné ju určiť až po operácii.
Mechanizmus histologických štúdií
Pred aj po operácii sa vykonáva biopsia tkaniva. Postup sa vykonáva po objasnení lokalizácie vzdelávania.
Biopsia je proces odstránenia kúska tkaniva a jeho štúdium sa nazýva "histologické vyšetrenie" alebo jednoducho "histológia".
Zdravotnícky pracovník pomocou špeciálnej ihly odoberie z novotvaru malé množstvo tkaniva, prípadne už odstránený nádor z tela pacienta odošle na histologické vyšetrenie. Potom sa fragment tkaniva zafarbí a spracuje špeciálnym spôsobom, aby sa zvýšil kontrast a uľahčilo sa štúdium. Rez je vyšetrený mikroskopom odborníkom a dáva záver o kvalite tvorby nádoru. Veľa v tejto štúdii závisí od pozornosti a kvalifikácie laboratórneho asistenta, ktorý dáva záver.
Súvisiaca štúdia je imunohistochémia. Vo všeobecnosti ju možno nazvať aj „histológiou“, pretože. metóda je založená na štúdiu tkanív, ale imunohistochémia je pokročilejšia metóda analýzy. Tkanivo v tejto štúdii je tiež zafarbené špeciálnymi činidlami, ktoré nielen zvyšujú vizuálny kontrast, ale tiež sa špeciálnym spôsobom spájajú („označujú“) s protilátkami, čo umožňuje špecifikovať viac charakteristík novotvaru. Reakcia v tomto prípade prebieha oveľa rýchlejšie, čo vám umožňuje rýchlo získať výsledky analýzy.
Imunohistochémia umožňuje nielen objasniť typ novotvaru, ale aj naplánovať stratégiu liečby pacienta založenú na detekcii citlivosti nádorového tkaniva na rôzne druhy terapeutický účinok. Okrem toho je vykonávanie tejto štúdie čo najviac automatizované, čo minimalizuje pravdepodobnosť diagnostickej chyby spôsobenej ľudským faktorom.
Existujú aj moderné diagnostické opatrenia, ktoré umožňujú zistiť prítomnosť nádoru v tele: ide o spektrálny rozbor krvi, imunologický (biochemický) rozbor, FISH test nádorového tkaniva. Genetický krvný test umožňuje každej žene overiť prítomnosť alebo absenciu predpokladov pre výskyt rakoviny prsníka. CT a MRI umožňujú presne určiť lokalizáciu nádoru a vysledovať dynamiku jeho vývoja, vyhodnotiť štruktúru novotvaru.
Ako zistiť rakovinu krvným testom?
Krvný test predpisuje najmä lekár po ultrazvukovom vyšetrení. Sú situácie, keď pacient z vlastnej iniciatívy daruje krv na markery okien alebo genetickú analýzu, aby sa zistilo, či má predispozíciu na rakovinu prsníka. V niektorých prípadoch môže všeobecný krvný test slúžiť ako dôvod na kontaktovanie onkologického dispenzára (spolu s palpáciou tesnenia alebo vizuálnymi príznakmi rakoviny).
Biochemická analýza
Krv ako materiál pre výskum umožňuje nasledujúce diagnostické opatrenia:
Zároveň iba prvé dve analýzy možno nazvať špecializovanými metódami na stanovenie rakoviny, z ktorých druhá je skôr preventívnym opatrením ako operačným. Pred operáciou sa vykonávajú ďalšie dva krvné testy, aby sa zistil stav tela a rozsah procesu. Avšak, ako už bolo uvedené, ak sa v hrudníku cíti pečať a súčasne všeobecný krvný test ukazuje viac ako dva negatívne diagnostické koeficienty, je to dôvod na kontaktovanie špecialistu. Negatívne koeficienty sú ukazovatele mimo normy v určitých parametroch zloženia krvi.
Biochemický krvný test odhalí prítomnosť protilátok proti nádorovým bunkám. Takéto telieska sa nazývajú nádorové markery. Počet a typ nádorových markerov závisí od špecifík (lokalizácie) rakovinový nádor a etapách jeho vývoja. Nádorové markery zahŕňajú:
Pri rakovine prsníka bude ošetrujúceho lekára v prvom rade zaujímať prítomnosť nádorového markera CA-15-3, keďže jeho prítomnosť v krvi jednoznačne poukazuje na rakovinové ochorenie prsníka. Dešifrovanie výsledku trvá v priemere jeden deň. Biochemická analýza sa vykonáva niekoľkokrát v priebehu ochorenia. Krv pre neho sa odoberá zo žily ráno na prázdny žalúdok. Dva týždne pred testom pacient prestane užívať všetko lieky(upresní ošetrujúci lekár). Dva dni pred darovaním krvi nemôžete užívať alkohol, mastné a vyprážané jedlá.
Hodinu pred procedúrou nemôžete fajčiť a je žiaduce znížiť emočný stres. Krv na biochemická analýza zvyčajne sa nevzdávajte ihneď po ožarovaní a fyzioterapii.
Definícia genetických faktorov
Predtým, ako hovoríme o genetickom krvnom teste, je potrebné zdôrazniť rozdiel medzi pojmami „genetický“ a „dedičný“. genetický faktor výskyt rakoviny je širší pojem, ktorý zahŕňa nielen prítomnosť príbuzných s rakovinou prsníka, ale aj špecifickú génovú mutáciu, vďaka ktorej sa riziko tohto ochorenia zvyšuje.
Dedičný faktor implikuje potenciálne riziko rakoviny prsníka na základe rodinnej anamnézy. Zároveň nielen ženy, ale aj muži môžu dostať mutantný gén, ale jeho nosič nemusí nevyhnutne ochorieť.
Každá žena môže podstúpiť genetickú analýzu. Toto sa odporúča najmä tým, ktorých priami príbuzní mali rakovinu prsníka. Pred postupom darovania krvi na analýzu by sa mal s pacientom porozprávať odborník v oblasti genetiky, ktorý mu vysvetlí nuansy dešifrovania výsledkov. Pred darovaním krvi sa od pacienta nevyžaduje žiadna špeciálna príprava.
V prípade prijatia pozitívny výsledok mutácie v génoch BRCA, ale v neprítomnosti iných úzkostné symptómy, netreba robiť paniku. Ženám s mutáciou týchto génov možno ako preventívne opatrenia odporučiť pravidelné samovyšetrenie a fyzikálne vyšetrenia. Po 40 rokoch má zmysel uvažovať o odstránení vaječníkov a prsníkov, mladším ženám, ktoré v budúcnosti neplánujú mať deti, sa niekedy odporúča brať antikoncepciu. Rozhodnutie o týchto opatreniach leží výlučne na pleciach samotnej ženy a vyžaduje si premyslený prístup a konzultácie s lekármi.
Najnovšie diagnostické metódy
Spektrálna analýza krv odhalí prítomnosť novotvarov v tele s pravdepodobnosťou až 93%. Ide o relatívne lacnú diagnostickú metódu založenú na infračervenom ožiarení krvného séra a analýze jeho molekulárneho zloženia.
Záver o spektrálnej analýze krvi je daný na princípe "prítomnosť-neprítomnosť" a je zameraný na identifikáciu väčšiny typov zhubných nádorov. Táto štúdia je tiež schopná určiť štádium vývoja rakoviny prsníka. Interpretácia výsledkov prebieha v laboratóriu a nevyžaduje ďalšie vyjadrenie lekára.
Aby bolo možné darovať krv na spektrálnu analýzu, je potrebné absolvovať príjem liekov 2 mesiace pred zákrokom. Od okamihu röntgenovej alebo inej expozície, ako aj chemoterapie, musia prejsť najmenej 3 mesiace. Okrem toho žena v čase odberu krvi nesmie byť tehotná ani menštruovať. Odber krvi prebieha ráno nalačno. Spektrálna analýza krvi trvá v priemere 12 pracovných dní.
Jeden z najnovšie metódy diagnostika rakoviny je takzvaný "rybí test" (FISH, fluorescenčná hybridizácia). O jeho účinnosti sa stále diskutuje, hlavnou otázkou jeho realizovateľnosti je nákladný výskumný postup. Podstata metódy spočíva v označení bunkových fragmentov fluorescenčnou kompozíciou a ďalšom mikroskopickom vyšetrení buniek. Podľa toho, ktoré časti genetického materiálu označené fragmenty kontaktovali, možno pochopiť, či má pacient predispozíciu na rakovinu a aké metódy liečby budú v konkrétnom prípade relevantné.
Test FISH nevyžaduje úplne zrelé bunky, takže táto analýza je oveľa rýchlejšia ako iné laboratórne testy. Okrem toho vám metóda FISH umožňuje jasnejšie pozorovať genetické poškodenie, čo pri iných typoch analýz nie je možné. FISH test sa najčastejšie používa špeciálne na zistenie rakoviny prsníka, ale funguje aj na detekciu niektorých iných typov rakoviny.
Medzi nevýhody testu FISH patrí okrem vysokej ceny aj nemožnosť pracovať na niektorých častiach chromozómov kvôli špecifickosti znamienok. Okrem toho test FISH ignoruje určité typy mutácií a porúch. genetický kód, čo môže byť dôležitým opomenutím v diagnostike. Porovnávacie štúdie FISH s lacnejším IHC testom neodhalili významné výhody pri určovaní citlivosti rakovinových buniek na Herceptin. Napriek tomu je test FISH v súčasnosti najrýchlejší spomedzi vysoko presných metód diagnostiky rakoviny.
Vedúci
"onkogenetika"
Zhusina
Júlia Gennadievna
Absolvoval Pediatrickú fakultu Voronežského štátu lekárska univerzita ich. N.N. Burdenko v roku 2014.
2015 - stáž v terapii na základe Katedry fakultnej terapie Voronežskej štátnej lekárskej univerzity. N.N. Burdenko.
2015 - certifikačný kurz v odbore "Hematológia" na základe Hematologického výskumného centra v Moskve.
2015-2016 – terapeutka VGKBSMP č.1.
2016 - schválila tému dizertačnej práce na stupeň kandidát lekárske vedy"študovať klinický priebeh ochorenie a prognóza u pacientov s chronickou obštrukčnou chorobou pľúc s anemickým syndrómom. Spoluautor viac ako 10 publikácií. Účastník vedeckých a praktických konferencií z genetiky a onkológie.
2017 - nadstavbový kurz na tému: "interpretácia výsledkov genetických štúdií u pacientov s dedičnými chorobami."
Od roku 2017 pobyt v odbore „Genetika“ na báze RMANPO.
Vedúci
"genetika"
Kanivets
Iľja Vjačeslavovič
Kanivets Ilya Vyacheslavovich, genetik, kandidát lekárskych vied, vedúci oddelenia genetiky lekárskeho genetického centra Genomed. Asistent katedry lekárskej genetiky Ruska lekárska akadémia sústavné odborné vzdelávanie.
Vyštudoval Lekársku fakultu Moskovskej štátnej univerzity medicíny a zubného lekárstva v roku 2009 a v roku 2011 absolvoval rezidenčný pobyt v odbore „Genetika“ na Katedre lekárskej genetiky tej istej univerzity. V roku 2017 obhájil dizertačnú prácu na titul kandidáta lekárskych vied na tému: Molekulárna diagnostika variácií počtu kópií segmentov DNA (CNV) u detí s vrodenými vývojovými chybami, fenotypom a/alebo anomáliami. mentálna retardácia pri použití oligonukleotidových mikročipov SNP s vysokou hustotou"
V rokoch 2011-2017 pracoval ako genetik v Detskej klinickej nemocnici. N.F. Filatov, vedecké poradenské oddelenie Federálneho štátneho rozpočtového vedeckého ústavu "Centrum lekárskeho genetického výskumu". Od roku 2014 až do súčasnosti vedie genetické oddelenie MHC Genomed.
Hlavné činnosti: diagnostika a manažment pacientov s dedičnými chorobami a vrodenými chybami, epilepsiou, medicínsko-genetické poradenstvo rodinám, v ktorých sa narodilo dieťa s dedičnou patológiou alebo malformáciami, prenatálna diagnostika. Počas konzultácie sa vykoná analýza klinických údajov a genealógie, aby sa určila klinická hypotéza a požadované množstvo genetického testovania. Na základe výsledkov prieskumu sú údaje interpretované a získané informácie sú vysvetlené konzultantom.
Je jedným zo zakladateľov projektu Škola genetiky. Pravidelne vystupuje na konferenciách. Prednáša pre genetikov, neurológov a pôrodníkov-gynekológov, ako aj pre rodičov pacientov s dedičnými chorobami. Je autorom a spoluautorom viac ako 20 článkov a recenzií v ruských a zahraničných časopisoch.
Oblasťou odborného záujmu je zavádzanie moderných celogenómových štúdií do klinickej praxe, interpretácia ich výsledkov.
Čas recepcie: streda, piatok 16-19
Vedúci
"Neurológia"
Sharkov
Artem Alekseevič
Sharkov Arťom Alekseevič– neurológ, epileptológ
V roku 2012 študoval v rámci medzinárodného programu „Orientálna medicína“ na Univerzite Daegu Haanu v Južnej Kórei.
Od roku 2012 - účasť na organizácii databázy a algoritmu na interpretáciu genetických testov xGenCloud (https://www.xgencloud.com/, projektový manažér - Igor Ugarov)
V roku 2013 promoval na Pediatrickej fakulte Ruskej národnej výskumnej lekárskej univerzity pomenovanej po N.I. Pirogov.
V rokoch 2013 až 2015 študoval na klinickom pobyte v neurológii na vedeckej inštitúcii federálneho štátneho rozpočtu „Vedecké centrum neurológie“.
Od roku 2015 pôsobí ako neurológ, výskumník vo Vedeckom výskumnom klinickom ústave pediatrie pomenovanom po akademikovi Yu.E. Veltishchev GBOU VPO RNIMU im. N.I. Pirogov. Pôsobí tiež ako neurológ a lekár v laboratóriu video-EEG monitorovania na klinikách Centra epileptológie a neurológie pomenovaných po A.I. A.A. Ghazaryan“ a „Centrum epilepsie“.
V roku 2015 študoval v Taliansku na škole „2nd International Residential Course on Drug Resistant Epilepsies, ILAE, 2015“.
V roku 2015 nadstavbové vzdelávanie - "Klinická a molekulárna genetika pre praktických lekárov", RCCH, RUSNANO.
V roku 2016 nadstavbové vzdelávanie – „Základy molekulárnej genetiky“ pod vedením bioinformatika, Ph.D. Konovalová F.A.
Od roku 2016 - vedúci neurologického smeru laboratória "Genomed".
V roku 2016 študoval v Taliansku na škole „San Servolo international advanced course: Brain Exploration and Epilepsy Surger, ILAE, 2016“.
V roku 2016 nadstavbové vzdelávanie – „Inovatívne genetické technológie pre lekárov“, „Ústav laboratórnej medicíny“.
V roku 2017 - škola "NGS v lekárskej genetike 2017", Moskovské štátne vedecké centrum
V súčasnosti diriguje Vedecký výskum v odbore genetika epilepsie pod vedením Prof. Dr. med. Belousová E.D. a profesor, d.m.s. Dadali E.L.
Bola schválená téma dizertačnej práce pre titul kandidáta lekárskych vied „Klinická a genetická charakteristika monogénnych variantov včasných epileptických encefalopatií“.
Hlavnými oblasťami činnosti sú diagnostika a liečba epilepsie u detí a dospelých. Úzka špecializácia - chirurgická liečba epilepsie, genetika epilepsie. Neurogenetika.
Vedecké publikácie
Sharkov A., Sharkova I., Golovteev A., Ugarov I. "Optimalizácia odlišná diagnóza a interpretácia výsledkov genetického testovania expertným systémom XGenCloud pri určitých formách epilepsie. Lekárska genetika, číslo 4, 2015, s. 41.
*
Sharkov A.A., Vorobyov A.N., Troitsky A.A., Savkina I.S., Dorofeeva M.Yu., Melikyan A.G., Golovteev A.L. "Operácia epilepsie pri multifokálnych léziách mozgu u detí s tuberóznou sklerózou." Abstrakty XIV. ruského kongresu „INOVAČNÉ TECHNOLÓGIE V PEDIATRII A PEDIATRICKEJ CHIRURGII“. Ruský bulletin perinatológie a pediatrie, 4, 2015. - s.226-227.
*
Dadali E.L., Belousova E.D., Sharkov A.A. "Molekulárne genetické prístupy k diagnostike monogénnej idiopatickej a symptomatickej epilepsie". Abstrakt z XIV. ruského kongresu „INOVATÍVNE TECHNOLÓGIE V PEDIATRII A PEDIATRICKEJ CHIRURGII“. Ruský bulletin perinatológie a pediatrie, 4, 2015. - s.221.
*
Sharkov A.A., Dadali E.L., Sharkova I.V. "Zriedkavý variant včasnej epileptickej encefalopatie typu 2 spôsobený mutáciami v géne CDKL5 u mužského pacienta." Konferencia „Epileptológia v systéme neurovied“. Zborník konferenčných materiálov: / Edited by: prof. Neznánová N.G., prof. Michailova V.A. Petrohrad: 2015. - s. 210-212.
*
Dadali E.L., Sharkov A.A., Kanivets I.V., Gundorova P., Fominykh V.V., Sharkova I.V. Troitsky A.A., Golovteev A.L., Polyakov A.V. Nový alelický variant myoklonovej epilepsie typu 3 spôsobený mutáciami v géne KCTD7 // Lekárska genetika.-2015.- v.14.-№9.- str.44-47
*
Dadali E.L., Sharkova I.V., Sharkov A.A., Akimova I.A. "Klinické a genetické vlastnosti a moderné metódy diagnostiky dedičnej epilepsie". Zbierka materiálov "Molekulárne biologické technológie v lekárskej praxi" / Ed. zodpovedajúci člen RANEN A.B. Maslennikova.- Vydanie. 24.- Novosibirsk: Academizdat, 2016.- 262: s. 52-63
*
Belousova E.D., Dorofeeva M.Yu., Sharkov A.A. Epilepsia pri tuberóznej skleróze. V "Brain Diseases, Medical and Social Aspects" edited Gusev E.I., Gekht A.B., Moskva; 2016; str.391-399
*
Dadali E.L., Sharkov A.A., Sharkova I.V., Kanivets I.V., Konovalov F.A., Akimova I.A. Dedičné choroby a syndrómy sprevádzané febrilnými kŕčmi: klinická a genetická charakteristika a diagnostické metódy. //Russian Journal of Children's Neurology.- T. 11.- č. 2, s. 33-41. doi: 10.17650/ 2073-8803-2016-11-2-33-41
*
Sharkov A.A., Konovalov F.A., Sharkova I.V., Belousova E.D., Dadali E.L. Molekulárne genetické prístupy k diagnostike epileptických encefalopatií. Zborník abstraktov „VI BALTSKÝ KONGRES O DETSKEJ NEUROLÓGII“ / Edited by Professor Guzeva V.I. Petrohrad, 2016, s. 391
*
Hemisferotómia u farmakorezistentnej epilepsie u detí s bilaterálnym poškodením mozgu Zubkova N.S., Altunina G.E., Zemlyansky M.Yu., Troitsky A.A., Sharkov A.A., Golovteev A.L. Zborník abstraktov „VI BALTSKÝ KONGRES O DETSKEJ NEUROLÓGII“ / Edited by Professor Guzeva V.I. Petrohrad, 2016, s. 157.
*
*
Článok: Genetika a diferencovaná liečba včasných epileptických encefalopatií. A.A. Sharkov*, I.V. Sharková, E.D. Belousová, E.L. Dadali. Journal of Neurology and Psychiatry, 9, 2016; Problém. 2doi:10.17116/jnevro20161169267-73
*
Golovteev A.L., Sharkov A.A., Troitsky A.A., Altunina G.E., Zemlyansky M.Yu., Kopachev D.N., Dorofeeva M.Yu. "Chirurgická liečba epilepsie pri tuberóznej skleróze" editovala Dorofeeva M.Yu., Moskva; 2017; str.274
*
Nový medzinárodné klasifikácie epilepsie a epileptických záchvatov Medzinárodnej ligy pre epilepsiu. Journal of Neurology and Psychiatry. C.C. Korsakov. 2017. V. 117. Číslo 7. S. 99-106
Vedúci
"Prenatálna diagnostika"
Kyjev
Julia Kirillovna
V roku 2011 absolvovala Moskovskú štátnu lekársku a zubnú univerzitu. A.I. Evdokimova s titulom všeobecné lekárstvo Študovala na stáži na Katedre lekárskej genetiky tej istej univerzity s diplomom z genetiky
V roku 2015 absolvovala odbornú stáž v odbore pôrodníctvo a gynekológia na Lekárskom ústave pre postgraduálne vzdelávanie lekárov Federálneho štátneho rozpočtového vzdelávacieho ústavu vyššieho odborného vzdelávania „MGUPP“
Od roku 2013 vedie konzultačné stretnutie v Centre pre plánované a reprodukčné rodičovstvo, DZM.
Od roku 2017 je vedúcim oddelenia prenatálnej diagnostiky laboratória Genomed
Pravidelne vystupuje na konferenciách a seminároch. Číta prednášky pre lekárov rôznych odborností z oblasti reprodukcie a prenatálnej diagnostiky
Vykonáva lekárske genetické poradenstvo pre tehotné ženy o prenatálnej diagnostike s cieľom zabrániť narodeniu detí s vrodené chyby vývoj, ako aj rodiny s pravdepodobne dedičnou alebo vrodenou patológiou. Vykonáva interpretáciu získaných výsledkov DNA diagnostiky.
ŠPECIALISTI
Latypov
Artur Šamilevič
Latypov Artur Shamilevich – lekár genetik najvyššej kvalifikačnej kategórie.
Po absolvovaní lekárskej fakulty Kazanského štátneho lekárskeho inštitútu v roku 1976 dlhé roky pracoval najskôr ako lekár v kancelárii lekárskej genetiky, potom ako vedúci lekárskeho genetického centra Republikánskej nemocnice v Tatarstane, hlavný odborník Ministerstvo zdravotníctva Tatarskej republiky, učiteľ na katedrách Kazanskej lekárskej univerzity.
Autor viac ako 20 vedeckých prác o problémoch reprodukčnej a biochemickej genetiky, účastník mnohých domácich a medzinárodných kongresov a konferencií o problémoch lekárskej genetiky. Do praktickej práce centra zaviedol metódy hromadného skríningu tehotných žien a novorodencov na dedičné choroby, vykonal tisíce invazívnych výkonov pri podozrení na dedičné ochorenia plodu v rôznych štádiách tehotenstva.
Od roku 2012 pôsobí na Katedre lekárskej genetiky s kurzom prenatálnej diagnostiky na Ruskej akadémii postgraduálneho vzdelávania.
Výskumné záujmy – metabolické ochorenia u detí, prenatálna diagnostika.
Čas recepcie: St 12-15, So 10-14Lekári sú prijímaní po dohode.
Genetik
Gabelko
Denis Igorevič
V roku 2009 ukončil štúdium na lekárskej fakulte KSMU pomenovanej po. S. V. Kurashova (špecializácia "Medicína").
Stáž na Petrohradskej lekárskej akadémii postgraduálneho vzdelávania Spolkovej agentúry pre zdravotníctvo a sociálny rozvoj (odbor "Genetika").
Stáž v terapii. Primárna rekvalifikácia v odbore " Ultrazvuková diagnostika". Od roku 2016 je pracovníkom oddelenia odboru základných nadácií klinickej medicínyÚstav základnej medicíny a biológie.
Oblasť profesionálneho záujmu: prenatálna diagnostika, používanie moderných skríningových a diagnostických metód na identifikáciu genetickej patológie plodu. Stanovenie rizika recidívy dedičných chorôb v rodine.
Účastník vedeckých a praktických konferencií z genetiky a pôrodníctva a gynekológie.
Pracovná prax 5 rokov.
Konzultácia po dohodeLekári sú prijímaní po dohode.
Genetik
Grishina
Christina Alexandrovna
V roku 2015 absolvovala Moskovskú štátnu lekársku a zubnú univerzitu v odbore všeobecné lekárstvo. V tom istom roku nastúpila na pobyt v odbore 30.08.30 „Genetika“ vo Federálnom štátnom rozpočtovom vedeckom ústave „Centrum lekárskeho genetického výskumu“.
Do Laboratória molekulárnej genetiky komplexne dedičných chorôb (vedúci - doktor biologických vied Karpukhin A.V.) bola prijatá v marci 2015 ako výskumná laborantka. Od septembra 2015 je preradená na pozíciu vedeckej pracovníčky. Je autorom a spoluautorom viac ako 10 článkov a abstraktov z klinickej genetiky, onkogenetiky a molekulárnej onkológie v ruských a zahraničných časopisoch. Pravidelný účastník konferencií o lekárskej genetike.
Oblasť vedeckého a praktického záujmu: lekárske genetické poradenstvo pacientov s dedičnou syndrómovou a multifaktoriálnou patológiou.
Konzultácia s genetikom vám umožňuje odpovedať na nasledujúce otázky:
Sú príznaky príznakov dieťaťa dedičné ochorenie
aký výskum je potrebný na zistenie príčiny
určenie presnej prognózy
odporúčania na vykonávanie a hodnotenie výsledkov prenatálnej diagnostiky
všetko, čo potrebujete vedieť o plánovaní rodiny
Konzultácia plánovania IVF
terénne a online konzultácie
zúčastnili na vedecko-praktickej škole „Inovatívne genetické technológie pre lekárov: aplikácia v klinickej praxi“, konferencie Európskej spoločnosti pre ľudskú genetiku (ESHG) a ďalšie konferencie venované ľudskej genetike.
Poskytuje lekárske genetické poradenstvo rodinám s podozrením na dedičnú alebo vrodenú patológiu vrátane monogénne ochorenia a chromozomálnych abnormalít, určuje indikácie pre laboratórne genetické štúdie, interpretuje výsledky DNA diagnostiky. Radí tehotným ženám v oblasti prenatálnej diagnostiky s cieľom predchádzať narodeniu detí s vrodenými chybami.
Genetik, pôrodník-gynekológ, kandidát lekárskych vied
Kudryavceva
Elena Vladimirovna
Genetik, pôrodník-gynekológ, kandidát lekárskych vied.
Špecialista v oblasti reprodukčného poradenstva a dedičnej patológie.
V roku 2005 absolvoval Uralskú štátnu lekársku akadémiu.
Rezidencia v pôrodníctve a gynekológii
Stáž v odbore "Genetika"
Odborné preškolenie v odbore "Ultrazvuková diagnostika"
Aktivity:
- Neplodnosť a potrat Vasilisa Yurievna
Je absolventkou Lekárskej fakulty Štátnej lekárskej akadémie v Nižnom Novgorode (odbor "Medicína"). Vyštudovala klinickú stáž FBGNU „MGNTS“ s titulom „Genetika“. V roku 2014 absolvovala stáž na klinike materstva a detstva (IRCCS materno infantile Burlo Garofolo, Terst, Taliansko).
Od roku 2016 pracuje ako konzultantka v spoločnosti Genomed LLC.
Pravidelne sa zúčastňuje vedeckých a praktických konferencií o genetike.
Hlavné činnosti: Poradenstvo v oblasti klinickej a laboratórnej diagnostiky genetických ochorení a interpretácia výsledkov. Manažment pacientov a ich rodín s podozrením na dedičnú patológiu. Poradenstvo pri plánovaní tehotenstva, ako aj počas tehotenstva o prenatálnej diagnostike s cieľom predchádzať narodeniu detí s vrodenou patológiou.
Pretože test FISH zisťuje genetické abnormality, ktoré spôsobujú rakovinu, je to tak efektívna metóda diagnostika určitých typov rakoviny. Test sa tiež používa na potvrdenie diagnózy a umožňuje vám získať Ďalšie informácie O možný výsledok choroby a vhodnosti použitia chemoterapie.
Napríklad u pacientov s rakovinou prsníka pomáha test FISH tkaniva odobratého počas biopsie určiť prítomnosť kópií génu HER2 v bunkách.
Bunky s kópiami génu HER2 majú viac receptorov HER2, ktoré dostávajú signály, ktoré stimulujú rast rakovinových buniek v prsníku. Preto sa u pacientov s kópiami génu HER2 odporúča použiť Herceptin (trastuzumab), liek, ktorý inhibuje schopnosť receptorov HER2 prijímať signály.
Vzhľadom na vysokú cenu a relatívnu nedostupnosť testu FISH sa častejšie používa iný test na detekciu rakoviny prsníka, imunohistochémia (IHC).
V lekárskych kruhoch sa vedú polemiky vysoká účinnosť FISH test verzus štandardné testy. V dôsledku technologického pokroku sa však test FISH stáva lacnejším a dostupnejším v rôznych klinických podmienkach.
Ako funguje test FISH
Pri vykonávaní testu FISH na vzorke tkaniva pacienta sa používajú fluorescenčné značky, ktoré sa viažu iba na určitých oblastiach chromozómov. Potom sa pomocou fluorescenčného mikroskopu určia oblasti chromozómov, na ktoré sa fluorescenčné sondy naviazali, a prítomnosť možné odchýlky provokujúce rozvoj rakoviny.
IN rakovinové bunky možno nájsť tieto odchýlky:
- translokácia - presun časti chromozómu do novej polohy na rovnakom alebo inom chromozóme;
- inverzia - otočenie úseku chromozómu o 180 stupňov pri zachovaní spojenia so samotným chromozómom;
- delécia - strata časti chromozómu;
- duplikácia - zdvojnásobenie úseku chromozómu, čo vedie k nadmernému obsahu kópií génu v bunke.
Translokácie pomáhajú diagnostikovať niektoré typy leukémie, lymfómu a sarkómu. Prítomnosť duplikácie v bunkách rakoviny prsníka pomáha lekárovi vybrať najlepšiu liečbu.
Výhodou testu FISH oproti štandardným cytogenetickým testom (ktoré skúmajú genetické zloženie buniek) je, že dokáže odhaliť aj tie najmenšie genetické zmeny, ktoré nie je možné vidieť bežným mikroskopom.
Ďalšou dôležitou vlastnosťou testu FISH je, že ho možno vykonať na bunkách, ktoré sa ešte nezačali aktívne rozvíjať. Ostatné testy sa vykonávajú na bunkách až po ich vrastení laboratórne podmienky do dvoch týždňov, takže celý proces môže trvať až tri týždne a výsledky testu FISH sú k dispozícii o niekoľko dní.
Príklady testu FISH na diagnostiku rakoviny
Hoci test FISH sa najčastejšie používa na analýzu genetických abnormalít pri rakovine prsníka, poskytuje dôležité informácie aj o iných typoch rakoviny.
Napríklad pri diagnostikovaní rakoviny močového mechúra FISH test na bunky moču je presnejší ako atypické bunkové testy. Okrem toho vám umožňuje určiť recidívu rakoviny močového mechúra o 3-6 mesiacov skôr.
FISH test tiež pomáha odhaliť chromozomálne abnormality pri leukémii, vrátane buniek, ktoré svedčia o agresívnej forme. chronická lymfocytová leukémia(HLL). Pacienti s agresívnou CLL môžu vyžadovať núdzové ošetrenie, zatiaľ čo pri menej agresívnych formách môže postačovať pozorovanie.
Kontroverzia testu FISH
Nie všetci odborníci súhlasia s tým, že test FISH je najpresnejším testom na diagnostiku rakoviny citlivých na Herceptin.
V roku 2010 vedci z Mayo Institute (Írsko) uviedli, že lacnejší IHC test je takmer rovnako účinný pri určovaní citlivosti na Herceptin ako test FISH.
Iní odborníci kritizovali test FISH za to, že nedokázal odhaliť malé mutácie, ako sú malé delécie, inzercie a bodové mutácie, a za ignorovanie niektorých inverzií.
Vylepšenie testu FISH
Napriek tomu, že testovacia technológia FISH zatiaľ neumožňuje analyzovať všetky časti chromozómov, neustále sa vyvíja týmto smerom.
Napríklad v roku 2007 kanadskí vedci oznámili vývoj čipu veľkosti mikroskopického sklíčka, ktorý by umožnil vykonať test FISH pomocou zariadenia, ktoré sa zmestí do dlane.
Tento vylepšený test s názvom FISH Test on a Chip prinesie výsledky za jeden deň a bude stáť menej ako iné testy.
Stručná odpoveď: Metóda fluorescenčnej in situ hybridizácie (FISH - fluorescence in situ hybridization) zahŕňa použitie unikátnych DNA nukleotidových sekvencií ako sondy na hľadanie požadovaných DNA sekvencií v materiáli získanom od pacienta. Metóda je založená na komplementárnej väzbe DNA sondy na DNA metafázových chromozómov alebo interfázových buniek. DNA sonda a testovaná DNA sa denaturujú za vzniku jednovláknovej DNA. DNA sonda sa pridá k chromozómovému preparátu a inkubuje sa určitý čas. Prítomnosť alebo neprítomnosť sondy značenej fluorochrómom v DNA po hybridizácii sa stanoví skúmaním chromozómov pomocou fluorescenčnej mikroskopie.
Podrobná odpoveď:
Fluorescenčná hybridizačná metóda in situ umožňuje identifikovať jednotlivé chromozómy alebo ich jednotlivé oblasti na preparátoch metafázových chromozómov alebo interfázových jadier na základe komplementárnej interakcie DNA sondy konjugovanej s fluorescenčnou značkou a požadovanou oblasťou na chromozóme. Na vizualizáciu peptidovo-nukleových zlúčenín na chromozóme sa PNA sondy založené na proteínový produkt.
Metóda je založená na komplementárnej väzbe DNA sondy na DNA metafázových chromozómov alebo interfázových buniek a zahŕňa nasledujúce kroky:
1. Denaturácia dvojvláknová sonda DNA a cieľová DNA na jednovláknovú pod vplyvom vysokej teploty alebo chemických látok.
2. Hybridizácia DNA sonda s DNA terčom podľa princípu komplementarity s tvorbou dvojvláknovej hybridnej molekuly
3. Post-hybridizačné umývanie na odstránenie nehybridizovanej DNA sondy
4. Analýza hybridizačné signály s fluorescenčným mikroskopom
Výhody Metódy molekulárnej genetickej diagnostiky FISH zahŕňajú rýchlu analýzu Vysoké číslo bunky, vysoká citlivosť a špecifickosť, schopnosť študovať nekultivovateľné a nedeliace sa bunky.
Nedostatky metódami sú neschopnosť získať informácie o fyzická kondíciaŠtudovaná oblasť DNA alebo chromozómu.
FISH sa používa v prenatálnej molekulárnej genetickej diagnostike a na charakterizáciu nádorov; v pediatrickej praxi sa spravidla používa na identifikáciu submikroskopických delécií spojených so špecifickými malformáciami. Syndrómy založené na mikrodeléciách boli predtým považované za choroby neznámej etiológie, pretože chromozomálne delécie a prestavby, spôsobuje rozvoj Tieto choroby sa zvyčajne nezobrazujú tradičnými metódami chromozomálnej analýzy. Takéto malé delécie v špecifických oblastiach chromozómov možno detegovať s veľkou presnosťou. Metóda FISH. Ochorenia spôsobené submikroskopickými deléciami zahŕňajú Prader-Willi, Angelman, Williams, Miller-Dieker, Smith-Magenis syndróm a velokardiofaciálny syndróm. FISH uľahčuje diagnostiku týchto syndrómov v atypických prípadoch, najmä v dojčenskom veku, keď ešte veľa diagnostických nástrojov chýba. významné vlastnosti choroby. Použitie tejto metódy molekulárnej genetickej diagnostiky je vhodné aj v období dospievania a dospelosti, kedy je typická Klinické príznaky choroby charakteristické pre detstvo prechádzajú zmenami.
121. DNA sondy. Ich využitie pri určovaní dedičných chorôb.
Krátka recenzia
DNA sonda je krátky fragment DNA konjugovaný s fluoresceínom, enzýmom alebo rádioaktívnym izotopom, ktorý sa používa na hybridizáciu s komplementárnou oblasťou cieľovej molekuly DNA.
Hlavná časť
DNA diagnostické systémy
Informácie o celej škále vlastností organizmu sú obsiahnuté v jeho genetickom materiáli. Patogenita baktérií je teda určená prítomnosťou špecifického génu alebo súboru génov v nich a v dôsledku poškodenia špecifického génu vzniká dedičné genetické ochorenie. Segment DNA, ktorý určuje danosť biologická vlastnosť, má presne definovanú nukleotidovú sekvenciu a môže slúžiť ako diagnostický marker.
Mnohé rýchle a spoľahlivé diagnostické metódy sú založené na hybridizácii nukleových kyselín – párovaní dvoch komplementárnych segmentov rôznych molekúl DNA. Postup v vo všeobecnosti pozostáva z nasledujúceho.
1. Fixácia cieľa jednovláknovej DNA na membránovom filtri.
2. Aplikácia značenej jednovláknovej DNA sondy, ktorá sa za určitých podmienok (teplota a iónová sila) spáruje s cieľovou DNA.
3. Premytie filtra na odstránenie nadbytočnej nenaviazanej značenej DNA sondy.
4. Detekcia hybridných molekúl sonda/cieľ.
V diagnostických testoch založených na hybridizácii nukleových kyselín sú kľúčové tri zložky: DNA sonda, DNA cieľ a metóda detekcie hybridizačného signálu. Detekčný systém musí byť vysoko špecifický a vysoko citlivý.
* Fluoresceín (dioxifluoran, uranín A) - organická zlúčenina, fluorescenčné farbivo. V analytickej chémii sa fluoresceín používa ako luminiscenčný acidobázický indikátor. v biochémii a molekulárna biológia izotiokyanátové deriváty fluoresceínu ako biologické farbivá na stanovenie antigénov a protilátok.
* Detekcia je detekcia, identifikácia, nájdenie niečoho.
*konjugácia=konjugácia
*Ak sa zmes DNA, napríklad ľudskej a myšacej, roztopí a žíha v jednej „skúmavke“, potom sa niektoré časti reťazcov myšacej DNA rekombinujú s komplementárnymi časťami reťazcov ľudskej DNA za vzniku hybridov. Počet takýchto lokalít závisí od stupňa príbuznosti druhu. Čím bližšie sú druhy k sebe, tým viac oblastí komplementarity reťazcov DNA. Tento jav sa nazýva DNA-DNA hybridizácia.
122. Metódy a podmienky využitia priamej DNA diagnostiky.
Krátka recenzia:
Pomocou priamych metód sa zisťujú poruchy v primárnej nukleotidovej sekvencii DNA (mutácie a ich typy). Priame metódy sa vyznačujú presnosťou dosahujúcou takmer 100 %.
Účelom priamej diagnostiky je identifikovať mutantné alely (abnormality v primárnej sekvencii nukleotidov DNA, mutácie a ich typy).
Nevýhodou priamej DNA diagnostiky je nutnosť poznať presnú lokalizáciu génu a spektrum jeho mutácií. Metódy priamej DNA diagnostiky sú indikované pri ochoreniach ako je fenylketonúria (mutácia R408W), cystická fibróza - (najčastejšia mutácia delF508), Huntingtonova chorea (expanzia trinukleotidových repetícií-CTG repetícií) atď.
Úplná odpoveď:
Pomocou priamych metód sa zisťujú poruchy v primárnej nukleotidovej sekvencii DNA (mutácie a ich typy). Priame metódy sa vyznačujú presnosťou dosahujúcou takmer 100 %. V praxi sa však tieto metódy môžu použiť za určitých podmienok:
1) známa cytogenetická lokalizácia génu zodpovedného za rozvoj dedičného ochorenia,
2) gén choroby musí byť klonovaný a musí byť známa jeho nukleotidová sekvencia.
Účelom priamej diagnostiky je identifikovať mutantné alely (abnormality v primárnej sekvencii nukleotidov DNA, mutácie a ich typy). Vysoká presnosť metódy priamej diagnostiky DNA vo väčšine prípadov nevyžaduje analýzu DNA všetkých členov rodiny, pretože detekcia mutácie v príslušnom géne umožňuje potvrdiť diagnózu s takmer 100% presnosťou a určiť genotyp. všetkých rodinných príslušníkov chorého dieťaťa, vrátane heterozygotných nosičov.
Nevýhodou priamej DNA diagnostiky je nutnosť poznať presnú lokalizáciu génu a spektrum jeho mutácií.
Metódy priamej DNA diagnostiky sú indikované pri ochoreniach ako je fenylketonúria (mutácia R408W), cystická fibróza - (najčastejšia mutácia delF508), Huntingtonova chorea (expanzia trinukleotidových repetícií-CTG repetícií) atď.
Doteraz však neboli zmapované gény mnohých chorôb, ich organizácia exón-intrón je neznáma a mnohé dedičné choroby charakterizovaná výraznou genetickou heterogenitou, ktorá neumožňuje plné využitie priamych metód diagnostiky DNA. Preto sa informačný obsah metódy priamej DNA diagnostiky značne líši. Takže pri diagnostike Huntingtonovej chorey, achondroplázie, je to 100%, s fenylketonúriou, cystickou acidózou, adrenogenitálnym syndrómom - od 70 do 80% a s Wilsonovou-Konovalovovou chorobou a myopatiou Duchenne / Becker - 45-60%. V tomto ohľade sa používajú nepriame metódy molekulárno-genetickej diagnostiky dedičných chorôb.
